一种动物细胞培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种动物细胞培养基及其制备方法和应用。本发明专利技术的动物细胞培养基，包括150～230重量份的氨基酸或其盐、180～280重量份的碳水化合物、160～260重量份的无机盐、1～2重量份的维生素和0.002～0.003重量份的微量元素，其中，所述微量元素包括四水合二氯化锰、偏钒酸钠、亚硒酸、二氧化锗、溴化钾、六水合三氯化铬、偏钒酸铵、氯化铷、氯化镉、六水合氯化钴、乙酸钡、八水氧氯化锆、氟化钠、四水合钼酸铵、二水合氯化铜、氯化锂和六水合氯化铝。本发明专利技术的动物细胞培养基成分简单并且明确、制备和使用方便，质量稳定，批次间差异小，特别是可用于多种动物细胞的培养，细胞生长状态良好且稳定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细胞培养基，特别是涉及一种动物细胞培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。细胞培养基的组成通常包括氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子等；其中，氨基酸是组成蛋白质的基本单位，维生素是维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用，碳水化合物是细胞生长的主要能量来源，无机离子是细胞组成所必须的元素并且参与细胞代谢。细胞培养基可分为含血清培养基、无血清培养基、无蛋白质培养基和化学限定培养基四种类型。血清是细胞培养基中最重要的组分之一，其作为氨基酸、蛋白质、维生素、碳水化合物、脂质、激素、生长因子、矿物质和微量元素的来源，对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。然而，血清成分复杂，并且各批次之间差异较大，不仅对培养产物的分离、提纯、检测造成一定困难，还影响细胞培养的稳定性；此外，血清来源有限，成本高，在一定程度上限制了其大量使用。无血清培养基不含血清，其是在基础培养基中添加胰岛素，转铁蛋白、牛血清白蛋白等组分所形成，尽管其能够在一定程度上增加细胞培养的稳定性，并使培养产物易于纯化和下游加工，然而其成分中所含有的蛋白易受机械和化学等因素的影响，因此培养基的保存和应用较为不便；此外，该类培养基针对性较强，通常一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。无蛋白培养基不含有动物蛋白，目前一些无蛋白培养基添加植物水解物来替代动物激素、生长因子的作用。例如授权公告号为CN101173246B的中国专利公开了一种用于培养哺乳动物细胞的无蛋白无血清培养基，该培养基
包含基于培养基总干重的超过10％重量的大豆水解产物，该大豆水解产物的分子量≤1000道尔顿。尽管该培养基能够用于培养哺乳动物细胞，但仍然存在培养基成分结构不明确等问题。化学限定培养基不仅不含血清、动物蛋白以及植物水解物等，并且培养基中各成分的结构都是明确的，这种培养基质量稳定，有利于细胞培养的稳定性以及培养产物的纯化和分析。例如公开号为CN102533634A的中国专利公开了一种CHO细胞无血清无蛋白化学培养基，其包括无机盐、氨基酸、维生素、微量元素以及生物短肽A和生物短肽B。该培养基针对性较强，仅适合CHO系列细胞的培养；此外，其需要合成特定的短肽，不仅制备不便，而且成本高，不利于大规模生产和使用。
技术实现思路
本专利技术提供一种动物细胞培养基，其成分简单且明确，质量稳定。本专利技术还提供上述动物细胞培养基的制备方法，该方法操作简单、易于控制，并且各成分在培养基中分散均匀，各批次培养基之间差异小。本专利技术还提供上述动物细胞培养基的应用，该应用体现为一种利用上述动物细胞培养基进行动物细胞的培养方法，该方法可实现对多种动物细胞的培养，并且培养的动物细胞生长状态良好。本专利技术的动物细胞培养基，包括150～230重量份的氨基酸或其盐、180～280重量份的碳水化合物、160～260重量份的无机盐、1～2重量份的维生素和0.002～0.003重量份的微量元素，其中，所述微量元素包括四水合二氯化锰、偏钒酸钠、亚硒酸、二氧化锗、溴化钾、六水合三氯化铬、偏钒酸铵、氯化铷、氯化镉、六水合氯化钴、乙酸钡、八水氧氯化锆、氟化钠、四水合钼酸铵、二水合氯化铜、氯化锂和六水合氯化铝。具体地，本专利技术的动物细胞培养基不含有血清，即是一种无血清的动物细胞培养基。更具体地，本专利技术的动物细胞培养基不含有蛋白、植物水解物等结构不确定的成分，即是一种化学限定动物细胞培养基。本专利技术的动物细胞培养基中，所述微量元素包括如下重量份的成分：本专利技术的动物细胞培养基中，所述氨基酸可以选用本领域常规用于动物细胞培养基的氨基酸，特别是选用L型氨基酸，所述氨基酸盐可以为盐酸盐；进一步地，所述氨基酸或其盐可以包括如下重量份的成分：本专利技术的动物细胞培养基中，所述碳水化合物可以选用本领域常规用于动物细胞培养基的碳水化合物，例如单糖，进一步可以为葡萄糖，特别是D-葡萄糖。本专利技术的动物细胞培养基中，所述无机盐可以选用本领域常规用于动物细胞培养基的无机盐；进一步地，所述无机盐可以包括如下重量份的成分：本专利技术的动物细胞培养基中，所述维生素可以选用本领域常规用于动物细胞培养基的维生素；进一步地，所述维生素可以包括如下重量份的成分：进一步地，本专利技术的动物细胞培养基还可以包括0.008～0.012重量份的谷胱甘肽、0.00008～0.00012重量份的氢化可的松、0.03～0.05重量份的次黄嘌呤、0.0008～0.0012重量份的亚油酸和0.024～0.036重量份的胰岛素。本专利技术动物细胞培养基中所采用的各成分的纯度均≥98％，进一步≥99％；各成分均可以通过普通市售获得。并且，在不对本专利技术的动物细胞培养基在培养动物细胞时造成不利影响的前提条件下，该动物细胞培养基还可以包括其它的常规培养基成分，这些常规培养基成分的用量可以为本领域的常规用量。本专利技术还提供一种动物细胞培养基，包括第一组分、第二组分、第三组分和第四组分；所述第一组分包括如下重量份的成分：所述第二组分包括如下重量份的成分：所述第三组分包括如下重量份的成分：所述第四组分包括如下重量份的成分：在一具体方案中，该动物细胞培养基可以由第一组分、第二组分、第三组分和第四组分组成。本专利技术还提供上述动物细胞培养基的制备方法，包括如下步骤：1)按照重量份配比将第一组分中的各成分混合后，干燥，制得第一组分；2)按照重量份配比将第二组分中的各成分混合后，干燥，制得第二组分；3)将第三组分中的各成分制成溶液后，按照重量份配比混合形成第一混合溶液，向所述第一混合溶液中加入赋形剂后，干燥，制得第三组分；4)将第四组分中的各成分制成溶液后，按照重量份配比混合形成第二混合溶液，向所述第二混合溶液中加入赋形剂后，干燥，制得第四组分；5)按照重量份将所述第一组分、第二组分、第三组分和第四组分混合后球磨，制得所述动物细胞培养基。在本专利技术中，所述重量份配比指各组分中的各个成分之间的重量配比；所述赋形剂可为本领域常规的赋形剂，例如甘露醇、氯化钾、葡萄糖、组氨酸、甘氨酸等。进一步地，可以控制赋形剂在所述第三组分中的质量含量为85～95％，并且控制赋形剂在所述第四组分中的质量含量为85～95％。本专利技术对步骤1)和步骤2)中的干燥不作严格限定，可以采用本领域常
规的干燥方法，例如烘干、冷冻干燥、喷雾干燥等。在本专利技术具体方案中，步骤1)和步骤2)中的干燥均为烘干，其中步骤1)中的所述干燥在70～90℃的温度下进行，并且干燥时间为2～3小时；步骤2)中的所述干燥在105～120℃的温度下进行，并且干燥时间为3～5小时；步骤3)和步骤4)中的所述干燥均为真空冷冻干燥。在本专利技术的步骤3)中，可以根据第三组分中各成分的溶解性质而采用水、酸溶液、碱溶液中的一种进行溶解，各成分可以单独进行溶解，也可以使溶解性质相同的成分按照重量份同时溶解于水、酸溶液、碱溶液中的一种中，在混合形成的第一混合溶液中，各成分的重量份应当满足第三组分中各成分的重量份配比要求，并且第三组分中各成分在第一混合溶液的总质量含量可以为5～15％。在本专利技术的步骤4)中，可以根据第四组分中各成分的溶解性质而采用水、酸溶液、碱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动物细胞培养基，其特征在于，包括150～230重量份的氨基酸或其盐、180～280重量份的碳水化合物、160～260重量份的无机盐、1～2重量份的维生素和0.002～0.003重量份的微量元素，其中，所述微量元素包括四水合二氯化锰、偏钒酸钠、亚硒酸、二氧化锗、溴化钾、六水合三氯化铬、偏钒酸铵、氯化铷、氯化镉、六水合氯化钴、乙酸钡、八水氧氯化锆、氟化钠、四水合钼酸铵、二水合氯化铜、氯化锂和六水合氯化铝。

【技术特征摘要】
1.一种动物细胞培养基，其特征在于，包括150～230重量份的氨基酸或其盐、180～280重量份的碳水化合物、160～260重量份的无机盐、1～2重量份的维生素和0.002～0.003重量份的微量元素，其中，所述微量元素包括四水合二氯化锰、偏钒酸钠、亚硒酸、二氧化锗、溴化钾、六水合三氯化铬、偏钒酸铵、氯化铷、氯化镉、六水合氯化钴、乙酸钡、八水氧氯化锆、氟化钠、四水合钼酸铵、二水合氯化铜、氯化锂和六水合氯化铝。2.根据权利要求1所述的动物细胞培养基，其特征在于，所述微量元素包括如下重量份的成分：3.根据权利要求1或2所述的动物细胞培养基，其特征在于，还包括0.008～0.012重量份的谷胱甘肽、0.00008～0.00012重量份的氢化可的松、0.03～0.05重量份的次黄嘌呤、0.0008～0.0012重量份的亚油酸和0.024～0.036重量份的胰岛素。4.一种动物细胞培养基，其特征在于，包括第一组分、第二组分、第三组分和第四组分；所述第一组分包括如下重量份的成分：所述第二组分包括如下重量份的成分：所述第三组分包括如下重量份的成分：所述第四组分包括如下重量份的成分：5.权利要求4所述的动物细胞培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)按照重量份配比将第一组分中的各成分混合后，干燥，制得第一组分；2)按照重量份配比将第二组分中的各成分混合后，干燥，制得第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，王建超，赵洪磊，徐舸辰，
申请(专利权)人：北京天信和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11