槲皮素糖苷类化合物在治疗肝纤维化中的用途制造技术

本发明专利技术涉及医药领域，具体涉及槲皮素糖苷类化合物在治疗肝纤维化中的用途。药效学试验证明，槲皮素糖苷类化合物具有逆转CCl4能引起的肝损伤、肝实质细胞坏死、肝纤维化的作用，具有一定的保肝活性。槲皮素糖苷类化合物还能抑制炎症状态下HSC细胞的增殖和活化，从而发挥抗肝纤维化的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药领域，具体涉及槲皮素糖苷类化合物在治疗肝纤维化中的用途。
技术介绍
肝纤维化是由肝损伤引起的持续性炎症反应，肝脏中细胞外基质的数量及构成发生改变，正常的降解过程受到抑制，堆积增加，导致过多的不溶性基质堆积在肝脏中，引起正常组织结构破坏直至器官衰竭，最终发展为肝硬化甚至肝癌。肝硬化是肝脏实质性病变，医学界普遍认为较难逆转，而肝纤维化则是可逆转的，因此逆转肝纤维化的研究已成为学界关注的一个热点课题。大量研究表明，肝脏内慢性的炎症反应是导致肝纤维化的主要诱因。巨噬细胞是肝脏炎症反应的主要效应细胞，其中Kupffer细胞是肝脏中最主要的驻留型巨噬细胞。在肝损伤过程中，Kupffer细胞除直接参与炎症反应外，还能分泌多种促纤维化细胞因子(如TNF-α，IL-1，IL-6，TGF-β，PDGF)，刺激肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的增殖、迁移和活化，促进细胞外基质产生和纤维化形成。其中，TGF-β被认为是最有效的刺激HSC细胞活化的因子之一。此外，Kupffer细胞还释放大量的氧自由基(reactive oxygen species,ROS),持续的氧化应激也能诱导激活HSCs，维持肝纤维化的进程。目前，临床上常用的治疗肝纤维化的药物主要有干扰素、秋水仙碱等，但治疗效果有限，且副作用大。因此，市场上仍需要有效的抗肝纤维化药物的开发。槲皮素属于黄酮类化合物，广泛存在于多种药用植物和蔬菜水果中。研究表明，槲皮素及其糖苷类衍生物具有抗炎、抗氧化、降压、抗抑郁等广泛的药理学作用，但至今未见此类化合物在制备抗肝纤维化治疗药物中的应用报道。槲皮素及其糖苷的结构如下：
技术实现思路
本专利技术公开了槲皮素糖苷治疗肝纤维化的用途。本专利技术所述槲皮素糖苷优选下列结构通式：其中R代表-COOH或-CH2X，其中X代表OH、F、Cl、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、SH、OCH3、OC2H5或COOH。R优选代表-CH2OH，即异槲皮苷(代号IQ)。R还优选代表-COOH，即槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(代号QB)。R还优选代表-CH2OCH3。即槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯(代号QC)R还优选代表-CH2F。即氟代异槲皮素苷(代号QF)。下面是槲皮素糖苷的部分药效学试验及结果：一、槲皮素糖苷类化合物对CCl4引起的大鼠肝纤维化模型体内作用研究雄性SD大鼠56只，体重180-200g/只，分笼饲养，自由饮水，室温20-25℃，光照12小时/天。随机抽签分为7组，每组8只：①正常组(ND)；②模型组(MO)；③异槲皮苷组(IQ,25mg/kg/d)；④槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷组(QB,25mg/kg/d)；⑤槲皮素组(Q,50mg/kg/d)；⑥槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯：(QC,25mg/kg/d)；⑦氟代异槲皮素苷：(QF,25mg/kg/d)。正常组给予橄榄油溶液3mL/kg皮下注射，每周2次，共8周；其余组别首剂按5ml/kg给予40％CCl4橄榄油溶液皮下注射，以后按3ml/kg给予，每周2次，共8周。每天上午相同时间点分别灌胃给予相应药物，每周按体重调整给药剂量，给药4周。给药结束后，禁食16小时，股动脉采血，脱颈椎处死，取肝脏并按常规制备血清、肝组织匀浆。检测血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平。检测肝脏组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和SOD水平，以及kupffer细胞和HSC数目。(1)槲皮素糖苷类化合物对血清ALT和AST水平的影响表1.槲皮素糖苷类化合物对血清ALT和AST水平的影响相较于正常组，aP<0.5；相较于模型组，bP<0.5。结果显示：与正常组相比，模型组血清ALT和AST水平显著升高；与模型组相比，槲皮素糖苷类化合物QB、IQ、QC和QF均能显著下调血清中ALT和AST水平，而槲皮素(Q)能显著下调AST水平，但对ALT没有明显影响。以上结果表明，CCl4能引起明显的肝损伤，导致肝实质细胞坏死，发生肝纤维化，而槲皮素糖苷类化合物则能逆转这一作用，具有一定的保肝活性。(2)槲皮素糖苷类化合物对肝脏组织中Kupffer细胞的影响结果见图1，图1显示：与正常组相比，模型组肝脏中Kupffer细胞数目明显增加，其标志表达物CD68含量明显升高；与模型组相比，槲皮素糖苷类化合物QB、IQ和QC均能极显著减少肝脏组织Kupffer细胞的数目，下调CD68的表达，而QF和Q对肝脏组织中Kupffer细胞的数目具有一定的下调作用，但作用不显著。这表明槲皮素糖苷类化合物QB、IQ和QC可能通过调控Kupffer细胞，改善肝脏中的炎症状态，从而发挥抗肝纤维化作用。(3)槲皮素糖苷类化合物对肝脏中HSC细胞的影响 结果见图2，图2显示：与正常组相比，模型组肝脏组织中HSC细胞数量明显增加；与模型组相比，槲皮素糖苷类化合物IQ，QB和QC均可明显减少HSC细胞的数目，并且如图QB组的效果是最好的，而槲皮素对HSC细胞没有显著影响。此部分结果说明，在CCl4诱导的肝损伤过程中，槲皮素糖苷类化合物IQ，QB和QC都能够抑制HSC细胞的增殖。(4)槲皮素糖苷类化合物对肝脏组织中氧化和抗氧化指标的影响结果见图3，图3显示：与正常组相比，模型组肝脏中氧化还原水平失衡，ROS产生显著增多，而SOD酶活力明显下降；与模型组相比，槲皮素糖苷类化合物IQ，QB和QC均能显著减少肝脏中ROS的含量，升高SOD活力，而Q则对肝脏中的氧化抗氧化水平没有显著影响。此部分结果表明，槲皮素糖苷类化合物IQ，QB和QC能够减轻肝脏的氧化损伤，减少ROS的产生，提高SOD活力，具有保肝作用。二、槲皮素糖苷类化合物对LPS诱导的Kupffer细胞与HSC细胞共培养模型的体外作用研究(1)大鼠原代HSC细胞和Kupffer细胞的分离培养选用正常雄性SD大鼠，以10％水合氯醛(300μL/100g)麻醉后固定体位、消毒，依次 打开皮肤、腹腔暴露门静脉和下腔静脉，，打开胸腔下腔静脉胸段后插入静脉套管针以动脉夹固定，剪开门静脉，同时排空套管针内的空气，向肝脏灌注37℃预热的HEPES缓冲液，流速30mL/min。灌注15-20分钟后肝脏逐渐变为灰白色即刻停止灌注，换用37℃预热的0.02％含钙(0.06％)胶原酶灌注，流速为15mL/min，待看到肝脏表面出现囊泡或者裂痕时立即停止灌注，小心将肝脏取下放入盛有HEPES缓冲液的烧杯中轻轻冲洗一遍，然后将肝脏转移至一个盛有无血清DMEM培养基的烧杯中，用无菌镊子撕破肝脏表面的纤维膜，并不断抖动以抖落细胞。细胞悬液用200目滤网过滤，取过滤后的细胞悬液以50g离心90秒，使肝脏中的HSC细胞、kupffer细胞与肝细胞分离出来。取上层清液，50g离心5分钟，重复1-2次，弃沉淀。取上清液200g离心10分钟，取沉淀用含10％FBS的DMEM培养基重悬后，再次200g离心10分钟，弃上清，余下的沉淀用含10％FBS的DMEM培养基重悬，调整浓度为2×105接种至培养瓶中，置于37℃，体积分数5％的CO2培养箱中培养，每2本文档来自技高网...

【技术保护点】
槲皮素糖苷用于制备预防/治疗肝纤维化疾病的药物的用途。

【技术特征摘要】
1.槲皮素糖苷用于制备预防/治疗肝纤维化疾病的药物的用途。2.权利要求1的用途，其中槲皮素糖苷具有下列结构通式(I)：其中R代表-COOH或-CH2X，其中X代表OH、F、Cl、Br、I、CN、NO2、NH2、CF3、...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚靖，高榕荫，王路路，王涛，李妤，丁琳，张志超，
申请(专利权)人：南京瑞菁医药科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32