一种诊治子宫内膜癌的分子标志物制造技术

本发明专利技术公开了SKA3基因可以作为子宫内膜癌诊断的分子标志物，本发明专利技术的实验证明：与正常子宫内膜组织相比，SKA3基因在子宫内膜癌组织中表达量高。本发明专利技术还公开了SKA3基因可以用于制备治疗子宫内膜癌的药物。本发明专利技术的研究成果提供了一种新的子宫内膜癌临床诊断方法，同时提供了一种治疗子宫内膜癌的药物新靶标。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及癌症诊断、治疗、预测预后领域，更具体地，本专利技术涉及以检测SKA3异常为手段的癌症诊断、预测预后方法；及抑制SKA3基因或蛋白质的癌症治疗剂。
技术介绍
子宫内膜癌(Endometrial carcinoma EC)是原发于子宫内膜的上皮性恶性肿，是女性生殖器三大恶性肿瘤之一，高发年龄为58-61岁。近年来EC的发病率有逐年上升并年轻化的趋势，约占女性癌症总数7％，占女性生殖道恶性肿瘤的20％-30％，已经接近甚至超过宫颈癌的发病率，据美国癌症协会(American Cancer Society，ACS)报道，在美国EC已经成为发病率最高的女性生殖道恶性肿瘤，2011年美国新增加EC病例有46470例，远远高于宫颈癌和卵巢癌，其中有8120例患者死于本病。在中国，随着经济水平增长、生活条件的提高以及激素替代治疗等因素的影响，EC的发病率在逐渐升高。我国对EC发病率的研究没有确切报道，但通过住院患者频谱比值间接推算，在北京、上海等经济发达城市EC的发病率明显上升，已经成为经济发达省市女性生殖道恶性肿瘤之首。目前我国EC的病例增长迅速与国外一致，严重威胁着女性健康，但其发病机制仍不明确。根据发病原因EC分为雌激素依赖型(I型)和非雌激素依赖型(II型)，其中I型EC约占全部EC的85％，其发生一般经历子宫内膜增生，尤其是非典型增生过程，发病期别早，预后好，早期发现是有效治疗的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测SKA3基因或蛋白表达差异来诊断子宫内膜癌的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过检测SKA3基因或蛋白表达差异来预测子宫内膜癌预后的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种通过抑制SKA3基因或SKA3蛋白来治疗子宫内膜癌的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于筛选治疗子宫内膜癌的药物的方法。本专利技术的目的之五在于提供一种用于治疗子宫内膜癌的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测SKA3基因或SKA3蛋白的产品在制备子宫内膜癌诊断工具中的用途。本专利技术还提供了检测SKA3基因或SKA3蛋白的产品在制备预测子宫内膜癌预后工具中的用途。进一步，所述检测SKA3基因或SKA3蛋白的产品包括检测SKA3基因或SKA3蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合SKA3基因的核酸或者能够结合SKA3蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测SKA3基因的表达水平；所述物质能够检测SKA3蛋白的表达水平。本专利技术的检测SKA3基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(Amplification Refractory Mutation System，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。上面所述的核酸包括扩增SKA3基因的引物，产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。在本专利技术的具体实施方案中，所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.1(正向序列)和SEQ ID NO.2(反向序列)所示。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的检测SKA3蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的检测SKA3蛋白的产品包括特异性结合SKA3蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V区(双抗体)、或含有CDR的肽。本专利技术的检测SKA3蛋白的产品可以包括编码抗体或编码抗体片段的氨基酸序列的分离的核酸，包含该核酸的载体，和携带该载体的细胞。抗体可以通过本领域技术人员公知的方法来获得。例如，制备保留整个或部分靶蛋白质的多肽或整合编码它们的多核苷酸的哺乳动物细胞表达载体作为抗原。使用抗原免疫动物后，从经过免疫的动物获得免疫细胞并融合骨髓瘤细胞以获得杂交瘤。然后从杂交瘤培养物收集抗体。最后可以通过使用被用作抗原的SKA3蛋白或其部分对获得的抗体实施抗原特异性纯化来获得针对SKA3蛋白的单克隆抗体。可以如下制备多克隆抗体：用与上文相同的抗原免疫动物，从经过免疫的动物收集血液样品，从血液中分离出血清，然后使用上述抗原对血清实施抗原特异性纯化。可以通过用酶处理获得的抗体或通过使用获得的抗体的序列信息来获得抗体片段。标记物与抗体或其片段的结合可以通过本领域普遍知道的方法来实施。例如，可以如下荧光标记蛋白质或肽：用磷酸盐缓冲液清洗蛋白质或肽，添加用DMSO、缓冲剂、等准备的染料，然后混合溶液，再于室温放置10分钟。另外，标记可使用商品化的标记试剂盒，诸如生物素标记试剂盒，如生物素标记试剂盒-NH2、生物素标记试剂盒-SH(DojindoLaboratories)；碱性磷酸酶标记试剂盒诸如碱性磷酸酶标记试剂盒-NH2、碱性磷酸酶标记试剂盒-SH(Dojindo Laboratories)；过氧化物酶标记试剂盒诸如过氧化物酶标记试剂盒-NH2、过氧化物酶标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；藻胆蛋白标记试剂盒诸如藻胆蛋白标记试剂盒-NH2、藻胆蛋白标记试剂盒-SH、B-藻红蛋白标记试剂盒-NH2，B-藻红蛋白标记试剂盒-SH、R-藻红蛋白标记试剂盒-NH2、R-藻红蛋白标记试剂盒SH(DojindoLaboratories)；荧光标记试剂盒诸如荧光素标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)555标记试剂盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)647标记试剂盒-NH2(Dojindo Laboratories)；及DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗体标本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测SKA3基因或SKA3蛋白的产品在制备诊断子宫内膜癌或预测子宫内膜癌预后的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测SKA3基因或SKA3蛋白的产品在制备诊断子宫内膜癌或预测子宫内膜癌预后的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测SKA3基因或SKA3蛋白的产品包括检测SKA3基因或SKA3蛋白的表达水平的产品。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品包括能够结合SKA3基因的核酸或者能够结合SKA3蛋白的物质；所述核酸能够检测SKA3基因的表达水平；所述物质能够检测SKA3蛋白的表达水平。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述核酸是实时定量PCR中使用的特异扩增SKA3基因的引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。5.一种诊断子宫内膜癌或预测子宫内膜癌预后的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，宋宏涛，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11