【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请交叉引用本申请根据35U.S.C§119(e)要求美国临时申请62/037,905(申请日:2014年8月15日,已放弃)和美国临时申请61/915,271(申请日:2013年12月12日,已放弃)的优先权,本申请通过援引吸纳上述两临时申请的全部内容。联邦资助说明本专利技术得到国立卫生研究院(National Institutes of Health)给予的第1R15AG039008-01号政府资助。政府对本专利技术拥有一定的权利。专利技术背景专利
本专利技术主要涉及组织学,涉及经含醛交联剂(即基于醛的交联剂)保存的组合物或组织中蛋白质的检测。具体地说,本专利技术提供一种抗原修复的方法,其中用除醛剂来修复组合物或组织中因醛类固定剂而化学改性的蛋白质。相关技术说明临床病理实验室用于保存生物材料的常用固定剂有多种,例如戊二醛、甲醛和丙酮及其他有机溶剂。然而,大多数固定过程用到含醛交联剂,如甲醛和戊二醛。固定剂溶液一般为含水甲醛溶液,其中含有钠的磷酸盐,配制成具有缓冲能力且大致等渗的溶液,所述缓冲能力在加入少量强酸或强碱后以尽可能小的波动将pH稳定在pH7.2-7.6。固定溶液将甲醛或戊二醛加到蛋白质的多种基团上,例如胺族基团、酚类基团、硫醇类基团和羟基类基团,由此先形成一系列可逆修饰,包括亚胺、烯胺、羟基亚甲基和两个胺族基团之间的亚甲基交联。随着甲醛固定的继续,会形成蛋白质分子之间或之内可逆的分子间和分子内交联,由此形成致密的网络,这会妨碍石蜡渗透或/和与抗体分子的接触。结果,目标抗原可能被可逆甚至非可逆的掩蔽,或者表位因与含醛固定剂反应而化学改性 ...
【技术保护点】
一种用于固定组织中抗原修复和改善氨基酸、肽和蛋白质检测的方法,其步骤包括:制备含有除醛剂的溶液;以及令用含醛交联剂固定的组织与所述溶液接触;其中,所述除醛剂与所述包含交联剂的醛之间的反应修复固定组织中的所述抗原并改善固定组织中氨基酸、肽和蛋白质的检测。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.12 US 61/915,271;2014.08.15 US 62/037,9051.一种用于固定组织中抗原修复和改善氨基酸、肽和蛋白质检测的方法,其步骤包括:制备含有除醛剂的溶液;以及令用含醛交联剂固定的组织与所述溶液接触;其中,所述除醛剂与所述包含交联剂的醛之间的反应修复固定组织中的所述抗原并改善固定组织中氨基酸、肽和蛋白质的检测。2.如权利要求1所述的方法,其中,所述含醛交联剂是甲醛或戊二醛。3.如权利要求1所述的方法,其中,所述除醛剂在所述溶液中的浓度是约0.05%至约30%。4.如权利要求3所述的方法,其中,所述溶液的pH处于针对所述除醛剂的特定范围。5.如权利要求1所述的方法,还包括:将所述溶液加热至约60℃至约125℃从而在醛与醛加合物之间达成可逆平衡。6.如权利要求5所述的方法,其中,所述溶液降低加热后组织中的自体荧光。7.如权利要求1所述的方法,还包括对组织进行染色来检测所述蛋白质、肽、抗原或所述蛋白质、肽、抗原包含的表位。8.如权利要求1所述的方法,其中,所述除醛剂是氨基乙醇,N-甲基氨基乙醇,2-(羟甲基)哌啶,2-(羟甲基)吡咯烷,N-苄基氨基乙醇,亚氨基(二乙醇),2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇;丝氨酸,苏氨酸,壳聚糖,三(羟甲基)氨基甲烷,精氨酸,赖氨酸,甘氨酸,组氨酸,5-羟色氨酸,肌肽,胍,吗啉,2-(羟甲基)哌啶,氨,碳酸铵,羟胺,O-烷基化羟胺,N-烷基化羟胺,O,N-烷基化羟胺,羟甲基胺,甲氧基胺,二丁胺,三亚乙基四胺,苄胺,噻苯咪唑,苯并三唑,三唑,二氢吲哚,苯并胍胺,3,4-二氨基苯甲酸,4-氨基苯甲酸甲酯,苯胺;1-氨基-2-吲哚;聚氧化烯胺;聚酰胺型胺,邻氨基苯甲酸,邻氨基苯甲酸甲酯,邻氨基苯甲酰胺;邻苯二胺;4-氨基苯甲酸;3,4-二氨基苯甲酸;肼,N-甲基肼,N-苯肼,甲基酰肼,2,4-二硝基苯基酰肼,脲,尿囊素,咪唑啉酮,苯巴比妥,甘脲,双缩脲,半胱胺,半胱氨酸,谷胱甘肽,亚硫酸氢钠,对巯基苯甲酰胺,丙二酰胺,草酰胺,乙酰乙酰胺,草酰胺,焦谷氨酸,琥珀酰胺,乙二胺-N,N’-二乙酰乙酰胺,N-(2-乙基己基)乙酰乙酰胺,N-(3-苯丙基)乙酰乙酰胺,聚酰胺;聚酰胺酯,山梨糖醇,己二醇,葡萄糖,纤维素,羟基香茅醇,双甲酮,抗坏血酸,戊二酮,2-丁酮,环己酮,2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮,2-戊酮,5,5-二甲基-1,3-环己二酮,脱氢乙酸,1,3-二羟基丙酮二聚体,没食子酸甲酯,没食子酸乙酯,没食子酸丙酯,焦棓酚,水杨酰胺;水杨酰苯胺;4,5-二羟基-2,7-萘二磺酸,柠康酸,马来酸酐,2,3-二甲基马来酸酐,1(E)-2-丁烯二酸二甲酯,2-硫烷基丁-2-烯二酸,丁-2-烯二酸,(E)-3-硝基丙-2-烯酸酯或盐,(E)-2,3-二氘化丁-2-烯二酸,(Z)-2-甲氧基丁-2-烯二酸,(Z)-2-过氧羟基丁-2-烯二酸,2-甲氧基丁-2-烯二酸,(Z)-2-氟丁-2-烯二酸酯,4-氧代戊-2-烯酸,(E)-2,3-二氯丁-2-烯二酸,二氯马来酸,(Z)-2-碘代丁-2-烯二酸,(E)-2,3-二氘化丁-2-烯二酸,(Z)-2-羟基-3-甲基丁-2-烯二酸,2,3-二氘化丁-2-烯二酸,(E)-3-硝基丁-2-烯酸,丁-2-烯二酸酯或盐,(E)-4-氯-4-氧代丁-2-烯酸酯或盐,(E)-2,3-二氟丁-2-烯二酸酯或盐,(E)-4-羟基-4-氧代丁-2-烯酸酯或盐,氢富马酸酯或盐,(Z)-2-烷基硫丁-2-烯二酸,2,3-二氟富马酸,(E)-4-羟基-2-甲基-4-氧代丁-2-烯酸酯或盐,一氟富马酸酯或盐,氟代富马酸,(Z)-2-氯丁-2-烯二酸,2-过氧羟基丁-2-烯二酸,过氧马来酸,2-氯-3-甲基丁-2-烯二酸,2-氯-3-甲基丁-2-烯二酸,2-丁烯二酸,[(E)-3-羧基-1-羟基亚丙-2-烯基]氧鎓,(E)-2-甲基丁-2-烯二酸酯或盐,2-甲基富马酸酯/盐,柠康酸,2,3-二氯马来酸,3,4-二氯-5-羟基呋喃-2(5H)-酮,3-氯羰基丙烯酸乙酯,(E)-4-氧代戊-2-烯酸乙酯,[(Z)-3-羧基丙-2-烯酰]氧鎓,(Z)-丁-2-烯二酸,马来酸二甲酯,富马酸二甲酯;活性碳,氧化铝;二氧化硅;胺官能化的二氧化硅;滑石;沸石;或多官能有机物,其中既具有伯胺或仲胺基团又具有羧酸、酚、酰胺、羟基、脲、酯或巯基基团,至少其中之一会与醛反应;环糊精;或上述化合物的各种组合。9.如权利要求1所述的方法,其中,所述溶液还包含约0.1%至约5%的非离子表面活性剂,所述非离子表面活性剂去除石蜡包埋样品中的石蜡并增强抗原修复后的荧光强度。10.如权利要求9所述的方法,其中,所述非离子表面活性剂是聚西托醇1000,鲸蜡硬脂醇,鲸蜡醇,椰油酰胺二乙醇胺,椰油酰胺单乙醇胺,癸基葡糖苷,IGEPAL CA-630,异鲸蜡醇聚醚-20,月桂基葡糖苷,NP-40,Nonidet P-40,壬苯醇醚-9,壬苯醇醚,月桂酸单甘油酯,八乙二醇单十二烷基醚,油醇,泊洛沙姆,泊洛沙姆407,聚甘油聚蓖麻油酸酯,聚山梨酸酯,脱水山梨醇单硬脂酸酯,脱水山梨醇三硬脂酸酯;硬脂醇;Triton X-10;吐温80;辛基-、癸基、十二烷基-吡喃葡萄糖苷或-麦芽糖苷或脱氧胆酸。11.如权利要求1所述的方法,其中,所述溶液还含有稳定剂,所述稳定剂选自防腐剂,抗真菌剂,抗细菌剂,染料,颜料,阴离子洗涤剂,金属盐,抗氧化剂或其组合。12.如权利要求11所述的方法,其中,所述抗氧化剂是浓度约2mM至约400mM的谷胱甘肽。13.一种制剂,其于溶液中包含选自以下所述的化合物:氨基乙醇,N-甲基氨基乙醇,2-(羟甲基)哌啶,2-(羟甲基)吡咯烷,N-苄基氨基乙醇,亚氨基(二乙醇),2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇;丝氨酸,苏氨酸,壳聚糖,三(羟甲基)氨基甲烷,精氨酸,赖氨酸,甘氨酸,组氨酸,5-羟色氨酸,肌肽,胍,吗啉,2-(羟甲基)哌啶,氨,碳酸铵,羟胺,O-烷基化羟胺,N-烷基化羟胺,O,N-烷基化羟胺,羟甲基胺,甲氧基胺,二丁胺,三亚乙基四胺,苄胺,噻苯咪唑,苯并三唑,三唑,二氢吲哚,苯并胍胺,3,4-二氨基苯甲酸,4-氨基苯甲酸甲酯,苯胺;1-氨基-2-吲哚;聚氧化烯胺;聚酰胺型胺,邻氨基苯甲酸,邻氨基苯甲酸甲酯,邻氨基苯甲酰胺;邻苯二胺;4-氨基苯甲酸;3,4-二氨基苯甲酸;肼,N-甲基肼,N-苯肼,甲基酰肼,2,4-二硝基苯基酰肼,脲,尿囊素,咪唑啉酮,苯巴比妥,甘脲,双缩脲,半胱胺,半胱氨酸,谷胱甘肽,亚硫酸氢钠,对巯基苯甲酰胺,丙二酰胺,草酰胺,乙酰乙酰胺,草酰胺,焦谷氨酸,琥珀酰胺,乙二胺-N,N’-二乙酰乙酰胺,N-(2-乙基己基)乙酰乙酰胺,N-(3-苯丙基)乙酰乙酰胺,聚酰胺;聚酰胺酯,山梨糖醇,己二醇,葡萄糖,纤维素,羟基香茅醇,双甲酮,抗坏血酸,戊二酮,2-丁酮,环己酮,2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮,2-戊酮,5,5-二甲基-1,3-环己二酮,脱氢乙酸,1,3-二羟基丙酮二聚体,没食子酸甲酯,没食子酸乙酯,没食子酸丙酯,焦棓酚,水杨酰胺;水杨酰苯胺;4,5-二羟基-2,7-萘二磺酸,柠康酸,马来酸酐,2,3-二甲基马来酸酐,1(E)-2-丁烯二酸二甲酯,2-硫烷基丁-2-烯二酸,丁-2-烯二酸,(E)-3-硝基丙-2-烯酸酯或盐,(E)-2,3-二氘化丁-2-烯二酸,(Z)-2-甲氧基丁-2-烯二酸,(Z)-2-过氧羟基丁-2-烯二酸,2-甲氧...
【专利技术属性】
技术研发人员:J·埃里克森,C·福勒特,S·巴克,W·莫里,
申请(专利权)人:休斯敦大学系统,
类型:发明
国别省市:美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。