一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂及其制备方法，由酿酒酵母、产朊假丝酵母2株酵母和枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌及沼泽红假单胞菌3株细菌以及植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌2株乳酸菌等七种菌混合组成。各菌种分别单独接种于相应的灭菌培养基中进行活化、制备一级种子液，在二级、三级发酵时按照相近与共生的原则，将2株酵母混合发酵，3株细菌混合发酵，2株乳酸菌混合发酵，再将三者混合扩大培养菌液按1:1:1等体积混合后吸附于灭菌麦麸‑米糠上，再经过固体发酵、低温干燥而制得固体菌剂。本发明专利技术的修复菌剂具有高密度、高活性的优良特性，并且首次提出益生菌菌剂与柠檬、黄芪水提液相复合。具有用量小，使用方法简便的突出特点。

【技术实现步骤摘要】
所属
本专利技术属于微生物发酵技术，特别是一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂及其制备方法。
技术介绍
长期以来，在禽畜养殖业中大量甚至滥用抗生素，不仅使病原微生物产生了抗性，而且严重破坏了禽畜肠道菌群的生态平衡，使禽畜出现免疫抑制，免疫力低下，抗病能力减弱，因此使得病毒性及细菌性感染增多。每年的春、秋季多发性禽流感就是明证。而且，面对病毒性感冒和病毒性肠道疾病，除了个别的可以通过打疫苗预防外，面对不断变异的病毒感染，几乎是束手无策，只能是看着大片的鸡群、大量的猪群死亡。另外，大量使用抗生素不仅会在禽畜产品中残留，而且会造成区域性土壤、水域的污染，直接威胁到人类的生命健康。2013年中国抗生素使用一年达16.2万吨，约占世界用量的一半，其中52％为兽用，48％为人用，超过5万吨抗生素被排放进入水土环境中。复旦大学王和兴等，对2013年采集到的上海地区的586名8至11岁学龄儿童尿样进行研究，其中79.6％的学龄儿童尿液中检出21种抗生素中的一种或几种。所以，禁止在禽畜饲料中添加抗生素是自然法则。经济发达的美国、欧盟等国，早在上个世纪末就发出禁令。我国也在逐步减少或禁止在饲料中添加抗生素。因此，为了发展禽畜生态养殖业，必须寻找能替代抗生素的制剂，用于禽畜的防病治病。目前，国内外研究主要集中于在益生菌、益生元、免疫增强剂、中草药制剂、酶制剂等领域。
技术实现思路
本专利技术目的在于针对上述存在问题，提供一种高密度、高活性的抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂及其制备方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种抗病毒抗病菌
取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂，包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ACCC20037、产朊假丝酵母(Candida utilis)ACCC20060、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC10114,地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ACCC10146、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)ACCC10649、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ACCC10141和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ACCC10534。还包括柠檬、黄芪的水提物。所述的修复菌剂的有效活性菌总菌落数2.0-3.0*1010CFU/g，其中酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ACCC20037和产朊假丝酵母(Candida utilis)ACCC20060为0.5-0.6*1010CFU/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC10114+地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ACCC10146+沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)ACCC10649为0.5-0.6*1010CFU/g，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ACCC10141+鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ACCC10534为1.0-1.8*1010CFU/g。所述抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂的制备方法，将各菌种分别单独活化，接种于相应的灭菌培养基中进行一级种子液扩大培养，在二级、三级发酵时按照相近与共生的原则，将2株酵母混合发酵，3株细菌混合发酵，2株乳酸菌混合发酵，再将三者混合扩大培养菌液按1:1:1等体积混合后吸附于灭菌麦麸-米糠上，再经过固体发酵阶段，最后低温干燥，制得固体菌剂，具体步骤如下：1)将冰箱冷藏保存的各斜面菌种分别单独活化后，分别经摇瓶扩大培养制成一级种子液；2)将上述各菌种的一级种子液分别在灭菌培养基内进行二级混合扩大培养制成二级扩大培养液：产朊假丝酵母与酿酒酵母的二级混合培养条件是：接种量各为5-10wt％、温度30±1℃、搅拌速度200-250r/min、压力0.05MPa，培养时间20-24h，培养基配方，按质量百分比：酵母膏1.0-1.5％，蔗糖3.0-5.0％，蛋白胨
1.0-2.0％，牛肉膏0.5-1.0％，pH值7.2-7.4，余量为水；枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌二级混合培养条件是：接种量各为5-10wt％、温度37±1℃、搅拌速度100-150r/min、压力0.05MPa，培养时间15-20h，培养基配方，按质量百分比：牛肉膏1.0-1.5％，蛋白胨2-2.5％，酵母膏0.2-0.5％，蔗糖0.5-1.0％，氯化钠1.0-1.5％，pH值7.0-7.2，余量为水；植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌的一级种子液在灭菌培养基内进行二级混合扩大培养制成二级扩大培养液，培养条件是：接种量各为5-10wt％，静止培养，50-100r/min每小时间歇搅拌2-5min,温度控制30—37℃，培养时间20-24h，培养基制备：a.鲜柠檬+黄芪粉的水提取液的制备：按质量份数，称取鲜柠檬10份，绞粹，与黄芪粉10份加入到不锈钢提取锅内，加入100份水，加热至90-100℃浸煮30min,三层纱布过滤，浸煮2次，合并滤液，得到柠檬、黄芪水提取液；b.按质量百分比：牛肉膏1.0-1.5％,蛋白胨1.0-1.5％,酵母膏0.5-0.8％,蔗糖3.0-3.5％,醋酸钠0.5-1.0％,磷酸氢二钾0.2-0.4％,柠檬酸铵0.2-0.5％，硫酸镁0.05-0.1％,硫酸锰0.005-0.01％,碳酸钙0.3-0.5％,吐温-80：1毫升/100毫升，余量为步骤a中制备的柠檬、黄芪水提取液，pH值6.2-6.4；3)将上述各菌的二级混合扩大培养液分别在灭菌培养基内进行三级混合扩大培养制成三级扩大培养液：产朊假丝酵母与酿酒酵母三级混合扩大培养条件是：接种量5-10wt％、温度30±1℃、pH值7.2-7.4、搅拌速度200-250r/min、压力0.05MPa，培养时间20-24h，培养基同二级；枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌三级混合扩大培养条件是：接种量5-10wt％、温度37±1℃、pH值7.0-7.2、搅拌速度150-200r/min、压力0.05MPa，培养时间18-20h，培养基同二级；植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌三级扩大培养：接种量5-10wt％，静止培养，
50-100r/min每小时间歇搅拌2-5min,温度控制30—37℃，培养时间20-24h，发酵终止时调整pH值3.8-4.1以增加乳酸菌的稳定性，培养基同二级；4)将上述三类混合菌的三级扩大培养液，按1:1:1等体积混合均匀，得到菌剂混合液；5)将上述菌剂混合液按照质量比0.5:1喷洒于灭菌麦麸-米糠上，边喷洒边搅拌，使菌液均匀地吸附、固化于麦麸-米糠上，经过固体发酵、低温干燥，最后制得固体菌剂；6)将制成的固体菌剂密封于内衬聚乙烯膜的包装袋内，室温保存，防潮、防暴晒。所述菌种活化方法是：把琼脂斜面保存的各菌菌种从冰箱冷藏室取出，放于超净工作台内，在酒精灯火焰旁，分别转接于琼脂平板培养基上，在30-37℃下培养20-30h后，平板上生长出大本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂，其特征在于，包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ACCC20037、产朊假丝酵母(Candida utilis)ACCC20060、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC10114,地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ACCC10146、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)ACCC10649、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ACCC10141和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ACCC10534。

【技术特征摘要】
1.一种抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂，其特征在于，包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ACCC20037、产朊假丝酵母(Candida utilis)ACCC20060、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC10114,地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ACCC10146、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)ACCC10649、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ACCC10141和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ACCC10534。2.根据权利要求1所述的抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂，其特征在于，还包括柠檬、黄芪的水提物。3.根据权利要求1或2所述的抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂，其特征在于，所述的修复菌剂的有效活性菌总菌落数2.0-3.0*1010CFU/g，其中酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ACCC20037和产朊假丝酵母(Candida utilis)ACCC20060为0.5-0.6*1010CFU/g，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC10114+地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ACCC10146+沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)ACCC10649为0.5-0.6*1010CFU/g，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ACCC10141+鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ACCC10534为1.0-1.8*1010CFU/g。4.一种如权利要求1所述抗病毒抗病菌取代抗生素的禽畜肠道生态修复菌剂的制备方法，其特征在于，将各菌种分别单独活化，接种于相应的灭菌培养基中进行一级种子液扩大培养，在二级、三级发酵时按照相近与共生的原则，将2株酵母混合发酵，3株细菌混合发酵，2株乳酸菌混合发酵，再将三者混合扩大培养菌液按1:1:1等体积混合后吸附于灭菌麦麸-米糠上，再经过固体发酵阶段，最后低温干燥，制得固体菌剂，具体步骤如下：1)将冰箱冷藏保存的各斜面菌种分别单独活化后，分别经摇瓶扩大培养制成一级种子液；2)将上述各菌种的一级种子液分别在灭菌培养基内进行二级混合扩大培养制成二级扩大培养液：产朊假丝酵母与酿酒酵母的二级混合培养条件是：接种量各为5-10wt％、温度30±1℃、搅拌速度200-250r/min、压力0.05MPa，培养时间20-24h，培养基配方，按质量百分比：酵母膏1.0-1.5％，蔗糖3.0-5.0％，蛋白胨1.0-2.0％，牛肉膏0.5-1.0％，pH值7.2-7.4，余量为水；枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌和沼泽红假单胞菌二级混合培养条件是：接种量各为5-10wt％、温度37±1℃、搅拌速度100-150r/min、压力0.05MPa，培养时间15-20h，培养基配方，按质量百分比：牛肉膏1.0-1.5％，蛋白胨2-2.5％，酵母膏0.2-0.5％，蔗糖0.5-1.0％，氯化钠1.0-1.5％，pH值7.0-7.2，余量为水；植物乳杆菌与鼠李糖乳杆菌的一级种子液在灭菌培养基内进行二级混合扩大培养制成二级扩大培养液，培养条件是：接种量各为5-10wt％，静止培养，50-100r/min每小时间歇搅拌2-5min,温度控制30—37℃，培养时间20-24h，培养基制备：a.鲜柠檬+黄芪粉的水提取液的制备：按质量份数，称取鲜柠檬10份，绞粹，与黄芪粉10份加入到不锈钢提取锅内，加入100份水，加热至90-100℃浸煮30min,三层纱布过滤，浸煮2次，合并滤液，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：张清敏，
申请(专利权)人：天津蕾檬佰翱科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12