本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药天山堇菜抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤细胞株药物中的应用。维吾尔药天山堇菜经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:17的石油醚：乙酸乙酯洗脱，继用体积比100:20的石油醚：乙酸乙酯洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:20洗脱液干燥后即得；或先用体积比100:25石油醚：乙酸乙酯洗脱，继用体积比100：50的石油醚：乙酸乙酯洗脱，石油醚：乙酸乙酯100：25-100:50，收集100：25-100：50的洗脱液，回收有机溶剂，干燥即得。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种维吾尔药天山堇菜抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防或/和治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。
技术介绍
本品为堇菜科植物天山堇菜，学名Viola tianschanica Maxim.，堇菜科植物Violaceae天山堇菜的全草。分布于新疆等地。主根圆柱状或倒长圆锥形，黄白色。叶基生。根状茎短，垂直，比较粗，根黄色或淡褐色。无地上茎和匍匐枝。蒴果卵形，光滑。花期6–7月，果期7–8月。天山堇菜功效祛风清热；解毒消肿。主感冒发热；疔疮痈肿；淋巴结肿大，眼睛肿痛，肠炎，痢疾等；外敷治疗疮肿毒。本专利技术通过系统地筛选研究，意外地发现天山堇菜提取物具有显著抗肿瘤活性，即天山堇菜提取物对乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤的具有很好的预防及治疗作用，可以应用于癌症的预防和治疗。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种天山堇菜提取物，该提取物具有抗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤的作用。本专利技术还提供了以天山堇菜提取物作为活性成分的药物组合物及其制备方法。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药天山堇菜经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂＝100：0-0：100梯度洗脱(石油醚：乙酸乙酯，具体比例见表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100：0-100:17，体积比)洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:20，体积比)洗脱，石油醚：乙酸乙酯100:20洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性，而其他比例的洗脱部位，没有抗肿瘤活性。即，抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性部位从未见文献报道，其100：20洗脱液的TLC分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：丙酮：乙酸乙酯(6:1:1)
显色方法：香草醛-硫酸显色。或维吾尔药天山堇菜经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱(石油醚：乙酸乙酯，具体比例见表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:25，体积比)洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100：30-100:50，体积比)洗脱，石油醚：乙酸乙酯100：30-100:50，具有显著地抗肿瘤活性，而其他比例的洗脱部位，没有抗肿瘤活性。即，抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性部位从未见文献报道，当石油醚：乙酸乙酯＝100:50时，其TLC分析表征如图2，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：丙酮：乙酸乙酯(6:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。具体，发现过程如下：1、天山堇菜经甲醇超声提取物的制备取维吾尔药天山堇菜20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0020A 2.6915g，留样0.6915g。2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药天山堇菜20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0020A 2.6915g，留样0.6915g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶2g，空白硅胶10g，玻璃柱内径2.0cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱(石油醚：乙酸乙酯，体积比，见表1)，每个梯度洗脱200ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图3。色谱条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：丙酮：乙酸乙酯＝6:1:1，显色方法：香草醛浓硫酸显色。表1梯度(石-乙)体积(mL)编号重量(g)石油醚200SN0020A010.002100:01200SN0020A020.0151100:02200SN0020A030.0135100:03200SN0020A040.0178100:04200SN0020A050.0305100:05200SN0020A060.0185100:06200SN0020A070.0031100:08200SN0020A080.0041100:10200SN0020A090.0048100:12200SN0020A100.0063100:14200SN0020A110.0036100:17200SN0020A120.0024100:20200SN0020A130.0039100:25200SN0020A140.011100:30200SN0020A150.0065100:200200SN0020A160.0086100:100200SN0020A170.02乙酸乙酯200SN0020A18甲醇200SN0020A193、抗肿瘤活性筛选方法和结果1)实验条件a)细胞株信息大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。b)药品及试剂样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度(DMSO≤1‰)。RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐(MTT)。c)仪器CO2培养箱(SANYO，日本)垂直层流洁净工作台(上海上净净化设备有限公司)倒置生物显微镜(重庆光电仪器有限公司)低/高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)电子天平(奥豪斯仪器有限公司)酶标仪(伯乐生命医学产品有限公司)立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)PH计(SARTORIUS，德国)2)实验方法和过程大鼠脑胶质瘤细胞株C6以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各组分以DMSO溶解为100mg/mL储存液，保存于-20℃待用。铺板后12h，观察细胞汇合率约为
40％，加药，浓度均为100μg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组(培养基+细胞；含0.1％DMSO培养基+细胞)，3个空白孔(只有培养基)。加入药物24小时后，加入20μl四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，继续培养4小时。完全弃去上清液，加入100μl DMSO，混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD值。3)实验结果表2结果发现：维吾尔药天山堇菜经有机溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:17，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维吾尔药天山堇菜提取物，其特征为，维吾尔药天山堇菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0‑100:17的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100：20的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用体积比为100：20的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。
【技术特征摘要】
1.一种维吾尔药天山堇菜提取物，其特征为，维吾尔药天山堇菜经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0-100:17的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100：20的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用体积比为100：20的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2.或先用体积比为100:25的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100：30-100:50的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用体积比为100：30-100:50的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。3.如权利要求1所述的维吾尔药天山堇菜提取物，其特征为，提取用溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，优选甲醇或95%乙醇。4.如权利要求1所述的维吾尔药天山堇菜提取物，其特征为，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:20，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯， 100:20，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物； 或用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:25，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:50，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯， 100:50，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。5...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，黄健，焦佳媛，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。