本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药广枣抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。所述的提取物通过如下方法获得：先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:0-100:12，体积比）洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14-100:17，体积比）洗脱，洗脱得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:14-100:17，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提取物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种维吾尔药广枣抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在制备预防及治疗肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤药物中的应用。
技术介绍
本品为漆树科植物南酸枣，学名Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill的干燥成熟果实。主要分布于我国南部名地。南酸枣果实含有丰富的营养成分，在产地都有生食其果的习惯，是食品生产的好原料，干果实入药名为广枣，为维吾尔习用药材。南酸枣鲜果实可用于食滞腹痛；果核用于烧烫伤；树皮入药有解毒收敛、止血止痛之效，外用治大面积水火烧烫伤。广枣性平，味甘、酸，具有养心，安神，抗心肌缺血，保护心功能等作用，可用于气滞血瘀，胸痹作痛，心悸气短，心神不安等症状。现在药理学研究证明广枣具有诱导白血病细胞系K562和K562/A02细胞凋亡的功效。本专利技术在深入地研究广枣的抗癌活性时意外地发现，广枣除了具有诱导白血病细胞凋亡的功效外，亦具有很好的乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤的预防及治疗作用，该活性提取物及其组合物有望应用到多种癌症的预防和治疗上。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种提取物。本专利技术还提供了以提取物为主要活性成分的组合物。本专利技术同时提供了广枣提取物及其组合物的制备和在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶(SiO2)柱分离，上样后的硅胶柱，用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱(石油醚：乙酸乙酯，比例见表1)，各石油醚：乙酸乙酯比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:0-100:12，体积比)洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:14-100:17，体积比)洗脱，洗脱得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:14-100:17，体积比)
洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提取物，而其他比例的洗脱组分，不具有抗肿瘤活性。特别地，优选先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比)洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比)洗脱，洗脱得到的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比)，洗脱液石油醚：乙酸乙酯＝100:14-100:17的部分为本专利技术的抗肿瘤活性的提取物，可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其薄层谱色谱(TLC)分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮(3:1:1)显色方法：香草醛-硫酸显色。具体，发现过程如下：1、广枣经甲醇超声提取物的制备取维吾尔药广枣20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0217A116.3mg，留样6.4mg，剩余109.9mg，石油醚-乙酸乙酯系统洗脱。2、石油醚：乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药广枣20g，经100ml甲醇超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0217A116.3mg，留样6.4mg，剩余109.9mg。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶500mg，空白硅胶5g，玻璃柱内径1.6cm，石油醚：乙酸乙酯系统梯度洗脱(条件见表1)，柱体积12.5ml，每个梯度洗脱100ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：乙酸乙酯梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，图3，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：石油醚：乙酸乙酯：丙酮(6:1:1)，显色方法：香草醛-硫酸显色。表13、抗肿瘤活性筛选方法和结果1)实验条件a)细胞株信息人乳腺癌细胞株MCF7购于中国典型培养物保藏中心细胞库。b)药品及试剂样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度(DMSO≤1‰)。RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐(MTT)。c)仪器CO2培养箱(SANYO，日本)垂直层流洁净工作台(上海上净净化设备有限公司)倒置生物显微镜(重庆光电仪器有限公司)低/高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)电子天平(奥豪斯仪器有限公司)酶标仪(伯乐生命医学产品有限公司)立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)PH计(SARTORIUS，德国)2)实验方法和过程人乳腺癌细胞株MCF7以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各组分以DMSO溶解为100mg/mL储存液，保存于-20℃待用。铺板后12h，观察细胞汇合率约为40％，加药，浓度均为100μg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组(培养基+细胞；含0.1％DMSO培养基+细胞)，3个空白孔(只有培养基)。加入药物24小时后，加入20μl
四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，继续培养4小时。完全弃去上清液，加入100μl DMSO，混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD值。3)实验结果表2结果发现：本专利技术的最优方案为：维吾尔药广枣经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比)洗脱，继用石油醚：乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比)洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比)洗脱的洗脱液经回收有机溶剂，干燥，得到的高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。该抗肿瘤活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1。4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究1)提取溶剂的种类研究分别用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等有机溶剂提取，并测试提取物对MCF7细胞的抗肿瘤活性，结果如下：表3研究结果表明：提取用溶剂可以为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2)提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取，并测试提取物对MCF7细胞的的抗肿瘤活性，结果如下：表4提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。3)干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对MCF7细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维吾尔药广枣提取物，其特征为，维吾尔药广枣经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0‑100:12的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:14‑100:17的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用体积比为100:14‑100:17的石油醚‑乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。
【技术特征摘要】
1. 一种维吾尔药广枣提取物，其特征为，维吾尔药广枣经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比为100:0-100:12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，继用体积比100:14-100:17的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，用体积比为100:14-100:17的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2. 如权利要求1所述的维吾尔药广枣提取物，其特征为，提取用溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂，优选甲醇或95%乙醇。3. 如权利要求1所述的维吾尔药广枣提取物，其特征为，先用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:12，体积比）洗脱，继用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚：乙酸乙酯，100:17，体积比）洗脱，用石油醚-乙酸乙酯混合溶剂（石油醚-乙酸乙酯， 100:17，体积比）洗脱的洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。4. 如权利要求1所述的维吾尔药广枣提取物，其特征为，先用体积比为100:0-100:12的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂2-50倍洗脱，继用体积比100:14-100:17的石油醚-乙酸乙酯混合溶剂2-50倍洗脱，优选先用体积比为100:0-100:...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，黄健，吴霁蓂，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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