针对H7N9亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及针对H7N9亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体、其抗原结合片段，和它们的应用。所述抗体是由存在于抗体轻链和重链基因可变区中的互补决定区(CDR)特异性基因序列决定的，并在原核和真核细胞中获得有效表达的特异性结合H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的抗体。利用此抗体CDR区或部分或全基因，可在原核和真核细胞及任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体，可用于制备预防或治疗H7N9亚型禽流感病毒相关疾病的制剂。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术属于生物
，具体涉及针对H7N9亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体、其抗原结合片段，和它们的应用。
技术介绍
：据报道，禽流感病毒是感染鸟类的流感病毒，通常不会感染人类。然而，1997年我国香港首次报告了人类感染禽流感病例。这种高致病性禽流感病毒为H5N1亚型，截止2013年12月10日已造成全球15个国家和地区共648例病例报告，其中384例死亡。随后，H9N2等多个禽流感病毒亚型也相继被发现具有感染人类的能力。特别是2013年3月，我国上海和安徽两地第一次发现人感染新型H7N9亚型禽流感病毒病例。目前H7N9疫情仍处于散发状态，截止2014年10月2日已至少确诊453例病例，其中175例死亡。病毒囊膜表面的跨膜糖蛋白血凝素蛋白(HA)和神经氨酸酶蛋白(NA)是流感病毒的主要免疫原性抗原。HA识别靶细胞表面受体并与受体相结合，具有与宿主细胞膜融合活性，能够诱导机体产生保护性中和抗体。由于HA基因突变而引起的HA抗原变异往往会导致免疫失败和变异毒株流行，流感病毒频繁并且持续的发生抗原性变异，目前尚无有效的针对H7N9等新型禽流感病毒的疫苗，也没有特效的治疗药物。作为一类新型特异性抗病毒感染的生物工程制剂，抗体在抗感染治疗及紧急被动免疫预防方面一直扮演着重要的角色。因此，研制特异性针对H7N9亚型禽流感病毒的抗体，用于紧急预防和治疗是十分必要和可行的。通过抗体分子基因水平的重组可获得多种多样的特异性鼠源、人源化及全人源抗体，使对单克隆抗体的研究有了突破性进展并越来越显示出其重要意义及实际应用前景。上世纪80年代末90年代初兴起的噬菌体抗体基因库技术兴起和整个基因工程抗体技术研究领域的发展，使当今世界全人源单克隆抗体及
新结构抗体的开发研究取得很大进展并已由基础研究阶段步入实质性应用研究和开发阶段。含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白用以预防和治疗传染病已历史悠久。而全人源单克隆抗体的发展，给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和远大前景。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护机体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明，如抗甲肝病毒、汉坦病毒、RSV病毒、SARS病毒、亨尼帕病毒、埃博拉病毒等单克隆抗体可以在体内100％保护动物免受病毒攻击(2)。我们相信特异性单克隆抗体，及其抗原结合片段，对人感染H7N9亚型禽流感应当具有良好的预防和治疗效应。因此，研发高效、特异性的抗H7N9亚型禽流感病毒的抗体意义重大。这些抗体可以用于人感染H7N9亚型禽流感的预防和治疗。与本专利技术相关的现有技术有：1.Gao,R.et al.Human infection with a novel avian-origin influenza A(H7N9)virus.N Engl J Med 368,1888-97(2013).2.Dimitrov,D.S.Therapeutic antibodies,vaccines and antibodyomes.MAbs 2,347-56(2010).3.Ying,T.et al.Exceptionally potent neutralization of Middle East respiratory syndrome coronavirus by human monoclonal antibodies.J Virol 88,7796-805(2014).。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供针对H7N9亚型禽流感病毒的全人源单克隆抗体及应用，具体涉及特异性结合H7N9亚型禽流感病毒血凝素蛋白的全人源单克隆抗体。本专利技术的全人源单克隆抗体包括克隆m826和克隆m827。本专利技术还公开了所述抗体的抗原结合片段，双特异性抗体，及与效应分子的偶联物。本专利技术公开的抗体和组合物可以用于，比如说，人感染H7N9亚型禽流感的预防和治疗。在本专利技术的一些实施方式中，单克隆抗体，或抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列和/或重链可变区的氨基酸序列，包含至少一个(比如三个)克隆m826或克隆m827的轻链和/或重链可变区的互补决定区(CDR)。本专利技术中，m826轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；m826重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；m826轻链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；m826轻链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；m826轻链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；m826重链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；m826重链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；m826重链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；m827轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；m827重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；m827轻链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；m827轻链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；m827轻链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；m827重链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示；m827重链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；m827重链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。此外，本专利技术还公开了编码这些单克隆抗体，抗原结合片段，双特异性抗体，及偶联物的核酸。在本专利技术的一些实施方案中，公开了包含这些核酸的载体，及包含这些载体的宿主细胞。在进一步的实施方案中，公开了包含这些单克隆抗体，抗原结合片段，双特异性抗体，偶联物，核酸，和载体的药用组合物。在本专利技术其它实施方案中，所述的单克隆抗体，抗原结合片段，双特异性抗体，偶联物，核酸，和载体被用来检测，预防，或治疗H7N9亚型禽流感。更具体的，本专利技术提供了一种全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，其特征在于，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:1的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:2的26-33位，51-58位，和/或97-110位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:9的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:10的26-33位，51-58位，和/或97-110位氨基酸残基，其中，所述的单克隆抗体或抗原结合片段特异性结合H7N9亚型禽流感病毒。本专利技术中，所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:1的27-32位，50-52位，和89-97位氨基酸，及抗体的重链可
变区含有SEQ ID NO:2的26-33位，51-58位，和97-110位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:9的27-32位，50-52位，和89-97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:10的26-33位，51-58位，和97-110位氨基酸残基。本专利技术中，所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其中：所述的轻链可变区的氨基酸序本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，其特征在于，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:1的27‑32位，50‑52位，和/或89‑97位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:2的26‑33位，51‑58位，和/或97‑110位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:9的27‑32位，50‑52位，和/或89‑97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:10的26‑33位，51‑58位，和/或97‑110位氨基酸残基，其中，所述的单克隆抗体或抗原结合片段特异性结合H7N9亚型禽流感病毒。

【技术特征摘要】
1.一种全人源单克隆抗体，或抗原结合片段，其特征在于，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:1的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:2的26-33位，51-58位，和/或97-110位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:9的27-32位，50-52位，和/或89-97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:10的26-33位，51-58位，和/或97-110位氨基酸残基，其中，所述的单克隆抗体或抗原结合片段特异性结合H7N9亚型禽流感病毒。2.按权利要求1所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其包含：抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:1的27-32位，50-52位，和89-97位氨基酸，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:2的26-33位，51-58位，和97-110位氨基酸；或抗体的轻链可变区含有SEQ ID NO:9的27-32位，50-52位，和89-97位氨基酸残基，及抗体的重链可变区含有SEQ ID NO:10的26-33位，51-58位，和97-110位氨基酸残基。3.按权利要求1或2所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中：所述的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少90％的相同性，且所述的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少90％的相同性；或所述的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:9具有至少90％的相同性，且所述的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:10具有至少90％的相同性。4.按权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中的单克隆抗体或抗原结合片段是全人源的。5.按权利要求1-4中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中的单克隆抗体为IgG。6.权利要求1-4中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段，其特征在于，其中抗原结合片段是scFv,Fv,Fab或F(ab)2。7.一种双特异性抗体，含有权利要求1-6中任一项所述的单克隆抗体或抗原结
\t合片段。8.权利要求1-6中任一项所述的单克隆抗体或抗原结合片段，或权利要求7所述的双特异性抗体，与一种效应分子偶联。9.权利要求8所述的偶联物，其中的效应分子是可检测标记。10.权利要求9所述的偶联物，其中的可检测标记是荧光标记，放射性标记，亲和素，生物素，或酶。11.权利要求8所述的偶联物，其中的效应分子是毒素或化疗剂。12.权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：应天雷，姜世勃，陆路，贺彪，孙志武，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31