本发明专利技术属医药技术领域，具体涉及一种维吾尔药花锚抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。本发明专利技术的提取物通过如下方法得到：先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100:00，体积比）洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇，100：01-100:06，体积比）洗脱，二氯甲烷：甲醇100：01-100:06洗脱液干燥即得。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属医药
，具体涉及一种维吾尔药花锚抗肿瘤提取物及其组合物的制备方法和其在制备预防及治疗脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤药物中的应用。
技术介绍
本品为龙胆科花锚属植物花锚的全草，学名Halenia corniculata(L.)Cornaz。主要分布于我国东北、华北及陕西等地。花锚为一年生草本,全株高约20-70cm，夏、秋季采收，晾干。中医学认为花锚具有清热、促进伤口愈合等功效，临床用于治疗“协日”和“热”过盛所致疾病。花锚性寒，味甘、苦，具有清热解毒，凉血止血，清热利湿，平肝利胆等作用，可用于胁痛，胃痛，肝炎，胆囊炎，头痛头晕，脉管炎，外伤出血等症状。现在药理学研究证明花锚具有促进肝细胞的再生，加速坏死组织的修复，调节体液免疫的作用。本专利技术通过系统地筛选研究，意外地发现花锚提取物具有显著的抗肿瘤活性，即花锚提取物对脑胶质瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌等恶性肿瘤具有很好的预防及治疗作用，可以应用于癌症的预防和治疗。但是，对其抗肿瘤的有效成分一直不清楚，本专利技术通过系统地筛选研究，发现了花锚的有效提取提取物，可以应用于肿瘤的预防和治疗。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是提供一种花锚提取物。本专利技术还提供了以花锚提取物为主要活性成分的组合物。本专利技术同时提供了花锚提取物及其组合物的制备和在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术是通过如下技术方案实现的：维吾尔药花锚经去离子水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(100：0-100：100)梯度洗脱(二氯甲烷：甲醇，具体比例见表1)，各二氯甲烷：甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100:00，体积比)洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100：01-100:06，体积比)洗脱，二氯甲烷：甲醇100：01-100:06洗脱液干燥后，具有显著地抗肿瘤活性。优选地，先
用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100:00，体积比)洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100:06，体积比)洗脱，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液干燥即得抗肿瘤活性的化合物，可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报道，其100:06洗脱液TLC分析表征如图1，TLC分析条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇＝6:1:1显色方法：香草醛浓硫酸显色。具体，发现过程如下：1、花锚经去离子水超声提取物的制备取维吾尔药花锚20g，经100ml去离子水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0239B 13.3mg，留样0.0348mg，剩余13.2652mg。2、二氯甲烷：甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果取维吾尔药花锚20g，经100ml去离子水超声提取15min，提取液浓缩后，得提取物SN0239B13.3mg，留样0.0348mg，剩余13.2652mg。上柱，甲醇溶解，共用甲醇17ml。上硅胶柱色谱，拌样硅胶500mg,空白硅胶5g,玻璃柱内径1.6cm，二氯甲烷：甲醇系统梯度洗脱(二氯甲烷：甲醇，体积比，见表1)，柱体积11ml，每个梯度洗脱100ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，图3，色谱条件：GF254硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇＝6:1:1，二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇＝3:1:1，显色方法：香草醛浓硫酸显色。表13、抗肿瘤活性筛选方法和结果1)实验条件a)细胞株信息大鼠脑胶质瘤细胞株C6购于中国典型培养物保藏中心细胞库。b)药品及试剂样品无菌条件下，DMSO溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度(DMSO≤1‰)。RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐(MTT)。c)仪器CO2培养箱(SANYO，日本)垂直层流洁净工作台(上海上净净化设备有限公司)倒置生物显微镜(重庆光电仪器有限公司)低/高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)电子天平(奥豪斯仪器有限公司)酶标仪(伯乐生命医学产品有限公司)立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂)鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂)PH计(SARTORIUS，德国)2)实验方法和过程大鼠脑胶质瘤C6细胞株以4000/孔的密度铺于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各组分以DMSO溶解为100mg/mL储存液，保存于-20℃待用。铺板后12h，观察细胞汇合率约为40％，加药，浓度均为100μg/mL，每个组分3个复孔。每板细胞设立二个对照组(培养基+细胞；含0.1％DMSO培养基+细胞)，3个空白孔(只有培养基)。加入药物24小时后，加入20μl四甲基偶氮唑盐化学名为3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，继续培养4小时。完全弃去上清液，加入100μl DMSO，混匀使MTT完全溶解，去气泡。490nm测定OD值。3)实验结果表2结果发现：维吾尔药花锚经去离子水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100:00，体积比)洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100：01-100:06，体积比)洗脱，二氯甲烷：甲醇100：01-100:06洗脱液经回收溶剂，干燥，得到高活性提取物，即为该抗肿瘤的提取物。优选地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100:00，体积比)洗脱，继用二氯甲烷：甲醇混合溶剂(二氯甲烷：甲醇，100:06，体积比)洗脱，二氯甲烷：甲醇100:06洗脱液干燥即得。该活性提取物从未见文献报道，其100:06洗脱液TLC分析表征如图1。4、抗肿瘤有效提取物的提取方法研究1)提取溶剂的种类研究分别用甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂等溶剂提取，并测试提取物的对C6细胞的抗肿瘤活性，结果如下：表3研究结果表明：提取用有机溶剂可以为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶剂、乙醇水混合溶剂。2)提取溶剂的用量研究分别用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/体积比)有机溶剂提取，并测试提取物的抗肿瘤活性，结果如下：表4提取物提取用有机溶剂用量为药材重量的2-50倍(重量/体积比)。3)干燥方法的研究分别用真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法等方法，对得到的抗肿瘤活性提取物进行干燥，以含水量、TLC、活性测试为指标，发现真空干燥法、冷冻干燥法、鼓风干燥、离心干燥、旋蒸干燥法适用于对C6细胞抗肿瘤活性提取物进行干燥，其中，最优为真空干燥法、冷冻干燥法。表5因此，花锚抗肿瘤提取物的制备方法为本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种维吾尔药花锚提取物，其特征为，维吾尔药花锚经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:00的二氯甲烷：甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比100：01‑100:06的二氯甲烷‑甲醇混合溶剂洗脱，二氯甲烷‑甲醇100：01‑100:06洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。
【技术特征摘要】
1. 一种维吾尔药花锚提取物，其特征为，维吾尔药花锚经溶剂超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，先用体积比100:00的二氯甲烷：甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比100：01-100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，二氯甲烷-甲醇100：01-100:06洗脱液经回收溶剂，干燥即为该提取物。2. 如权利要求1所述的维吾尔药花锚提取物，其特征为，先用体积比100:00的二氯甲烷：甲醇混合溶剂洗脱，继用体积比100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱，二氯甲烷-甲醇100:06洗脱液经回收溶剂，干燥。3. 如权利要求1或2所述的维吾尔药花锚提取物，其特征为，所述的提取用溶剂为甲醇、乙醇、水、丙酮、氯仿、甲醇、甲醇水混合溶剂或乙醇水混合溶剂。4. 如权利要求1或3所述维吾尔药花锚提取物，其特征为，先用体积比100:00的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱2-50倍柱体积，继用 体积比100：01-100:06的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱2-50倍柱体积，优选地，先用体积比100:00的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱8...
【专利技术属性】
技术研发人员：王金辉，黄健，吴霁蓂，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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