一种快速测定饲料用纤维素酶酶活力的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速测定饲料用纤维素酶酶活力的方法。该测定饲料用纤维素酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉加入到含有待测饲料用纤维素酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所述待测饲料用纤维素酶的酶活力。该方法既可以快速检测饲料用纤维素酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快速检测饲料用纤维素酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本发明专利技术的方法对纤维素酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用纤维素酶的研究、生产和应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及饲料领域中一种快速测定饲料用纤维素酶酶活力的方法。
技术介绍
纤维素酶是目前饲料工业中应用很广的单体酶，也是一种很成熟的饲料酶，约占整个饲料酶产值的15％左右。在动物饲料中添加适量纤维素酶可提高饲料利用率,在促进动物生长、减少粪便排放、改善生态环境和防治动物疾病等方面均有明显效果,且在很大程度上避免了因添加抗生素、激素和高铜等物质所产生的负面影响,具有明显的经济效益和环保意义。随着纤维素酶在饲料中的广泛应用，对纤维素酶酶活力评价方法的需求也越来越迫切。长期以来，纤维素酶酶活力的分析测定一直是饲料工业领域中很有争议的话题，现有分析方法所提供的分析数据的实用性和重复性都不理想。目前，纤维素酶的酶活力评价主要以羧甲基纤维素钠(简称CMC钠盐)为底物，所用羧甲基纤维素钠纯度高而且易溶于水，但是饲料成分相对比较复杂，其中含有的天然的纤维素基本上都是不溶于水的高聚化合物，而且这些化合物通常与饲料原料中的其他成分(木质素、葡聚糖和木聚糖等)相互交联在一起，组成结构复杂的聚合体，因此纯化的羧甲基纤维素钠不能模拟纤维素酶在体内作用时所面对的复杂底物成分。动物饲养试验虽然直观，可靠性也比较好，但是试验的时间太长(至少需要2个月)，成本很高，在实际生产过程中很难推广，与科研过程中的快速分析要求相差甚远。另外，纤维素酶还有很多同工酶，它们对酸碱环境的适应性、对温度的耐受性以及对动物消化道环境的抗逆性都有差异，用目前标准的实验室分析方法是很难区别的，而实际生产应用却很需要这些数据。因此，探索并建立一种更为科学、客观和简便评价纤维素酶酶活力的体外检测方法是迫切需要的。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何快速、更符合实际地测定饲料用纤维素酶的酶活力。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种测定饲料用纤维素酶酶活力的方法。本专利技术所提供的一种测定饲料用纤维素酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉加入到含有待测饲料用纤维素酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所述待测饲料用纤维素酶的酶活力。上述方法中，所述用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉是将植物的茎粉碎得到的粉。所述用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉中秸秆颗粒的粒径可为370-850μm。上述方法中，所述含有待测饲料用纤维素酶的液体可为含有待测饲料用纤维素酶的缓冲溶液或含有待测饲料用纤维素酶的离体动物消化液。所述含有待测饲料用纤维素酶的缓冲溶液可用所述待测饲料用纤维素酶和醋酸-醋酸钠缓冲溶液配制，所述含有待测饲料用纤维素酶的离体动物消化液可用所述待测饲料用纤维素酶和所述离体动物消化液配制。所述离体动物消化液具体可为离体动物胃液，所述离体动物胃液具体可为离体牛瘤胃液。上述方法中，所述酶解反应液中，所述纤维素酶的浓度可为0.164-0.167mg/mL，具体可为0.164mg/mL或0.167mg/mL；所述秸秆粉的浓度可为16.4-16.7mg/mL，具体可为16.4mg/mL或16.7mg/mL；所述纤维素酶与所述秸秆粉的质量比可为1：100。上述方法中，所述酶解反应的反应温度可为37-39.5℃，具体可为37℃。上述方法中，所述酶解反应液的pH值可为5.5-6.8，具体可为5.5或6.8；所述酶解反应时间可为30-240min，具体可为：30-100min、100-240min、30min、60min、90min、100min、120min、150min、180min、210min或240min。上述方法中，所述可溶解物的质量可按照公式3获得，所述公式3为：可溶解物质量＝秸秆粉总质量-残留物质量；所述秸秆粉总质量为用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉的干重；所述残留物质量为将所述纤维素酶酶解反应后的溶液在相对离心力为500g条件下离心3min获得的酶解反应后的残留物干重；所述可溶解物的质量以干重计。上述方法中，所述用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉可按照下述用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉的制备方法制备。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了上述用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉的制备方法。本专利技术所提供的用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉的制备方法，包括如下步骤：将植物的茎粉碎，得到粒径为370-850μm的粉，该粉即为所述用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉。上文中，所述秸秆可为成熟农作物的茎，如成熟玉米的茎、成熟高粱的茎、成熟水稻的茎和成熟小麦的茎。本专利技术所提供的上述方法在鉴别饲料用纤维素酶酶活力中的应用也属于本专利技术的保护范围。实验证明，本专利技术的测定饲料用纤维素酶酶活力的方法能够直观、简便，客观全
面地测定饲料用纤维素酶的酶活力。本专利技术的测定饲料用纤维素酶酶活力的方法，以秸秆颗粒粒径范围为370-850μm的秸秆粉为底物，既可以快速检测饲料用纤维素酶在缓冲溶液中的酶活力，又可以快速检测饲料用纤维素酶在离体动物消化液中的酶活力。饲料生产企业和养殖户可以参照本专利技术的方法对纤维素酶的酶活力进行分析和比较，适用于饲料用纤维素酶的研究、生产和应用。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中的纤维素酶A为武汉新华扬生物有限公司的饲用纤维素酶，纤维素酶B为济南诺能生物科技有限公司的产品(CS10000)，纤维素酶C为北京盛世嘉明科技开发有限公司的产品(NXE10000)，纤维素酶D为南京添嘉生物科技有限公司的纤维素酶。实施例1、用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉的制备取成熟的玉米秸秆200kg，去掉叶和根，留下茎杆，用粉碎机粉碎，得到秸秆粉。将秸秆粉第一次经20目筛筛分，收集过20目筛的秸秆粉过筛物，获得秸秆粉第一次过筛物56kg。将秸秆粉第一次过筛物再用40目筛子第二次筛分，保留粒径在20目至40目之间的秸秆粉颗粒，该秸秆粉颗粒即为用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉，其重量为16kg。该用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉的颗粒粒径为370-850μm，将该用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉分装在密闭的容器中，保持干燥和低温环境。实施例2、饲料用纤维素酶在醋酸-醋酸钠缓冲溶液中的酶活力测定醋酸-醋酸钠缓冲溶液的配制：在10000mL蒸馏水中加入9.0mL冰醋酸和69.70g无水醋酸钠，搅拌10min，使醋酸钠彻底溶解得到醋酸-醋酸钠缓冲溶液，该醋酸-醋酸钠缓冲溶液中醋酸根离子的浓度为0.1mol/L，pH值为5.5。含有饲料用纤维素酶A的缓冲溶液的配制：向烧杯中加入1.000g粉状饲料用纤维素酶A，然后加入50mL上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液，磁力搅拌10min后转移到100mL容量瓶中，并用上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至100mL，配置成质量百分浓度为1％的饲料用纤维素酶A的缓冲溶液。取8个1000mL的三角瓶，依次编号为1、2、3、4、5、6、7和8，分别向每个三角瓶中加入600mL上述醋酸-醋酸钠缓冲溶液，再向每个三角瓶中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定饲料用纤维素酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉加入到含有待测饲料用纤维素酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所述待测饲料用纤维素酶的酶活力。

【技术特征摘要】
1.一种测定饲料用纤维素酶酶活力的方法，包括如下步骤：将用于测定饲料用纤维素酶酶活力的秸秆粉加入到含有待测饲料用纤维素酶的液体中，获得酶解反应液；将所述酶解反应液进行酶解反应，测定所述酶解反应产生的可溶解物的质量，得到所述待测饲料用纤维素酶的酶活力。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反应的反应温度为37-39.5℃。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋慧，
申请(专利权)人：北京晟亚育达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11