用于心脏病症的生物标记物制造技术

本发明专利技术一般地涉及用于心脏病症预后和/或诊断的测定法、方法和试剂盒。本发明专利技术还提供例如针对新的类别循环型心肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽生物标记物的结合剂，其用于预测或诊断除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症。此外，本发明专利技术的结合剂可以用来增强心肌钙蛋白在心肌梗死的预后和诊断中的灵敏度和假阳性性能。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般地涉及用于心脏病症预后和/或诊断的方法、测定法和试剂盒。专利技术背景以下包括可以用于理解本专利技术的信息。不承认具体或隐含提到或援引的任何信息、出版物或文件是现有技术，或对当前描述或要求保护的专利技术必需。本说明书中提到的全部出版物和专利均通过完整引用的方式并入本文。检测心肌钙蛋白(cTn)的高度灵敏度(hs)测定法的到来已经显著地改变我们对循环中肌钙蛋白的理解并改变其用于诊断急性心肌梗死的各个方面(MI；Thygesen等人(2012)Circulation 126:2020-2035；Keller等人(2009)N.Eng.J.Med.361:868-877；Reichlin等人(2009)N.Eng.J.Med.361:858-867)。这些测定法已经导致心肌梗死(MI)诊断时间的重大改善，但是这以具有高于第99百分位数准则的升高的肌钙蛋白水平，但是实际上未出现MI的患者人数增加为代价(Reichlin等人(2012)Am.J.Med.125:1205-1213；Thygesen等人(2012)Eur.Heart J.33:2252-2257；Hammerer-Lercher等人(2013)J.Am.Heart Assoc.2(3):e000204.doi:10.1161/JAHA.113.000204)。这造成分析特异性显著降低并且因此已经提出几种基于生物标记物的策略以辅助hscTn测量(Eggers等人(2008)Eur.Heart J.29:2327-2335；Haaf等人(2011)Am.J.Med.124:731-739；Maisel等人(2013)J.Am.Coll.Cardiol.62:150-160；Cullen等人(2013)J.Am.Coll.Cardiol.62:1242-1249)。一项克服这些局限性的潜在策略是考虑产生的总潜在心肌钙蛋白，包括上游可读框肽。上游可读框(uORFs)是由蛋白质中主要编码区上游(5’)的起始密码子和终止密码子定义的氨基酸编码序列。大约40-50％的人和小鼠转录组含有uORF(Calvo等人(2009)Proc.Natl.Acad.Sci.106:7507-7512；Iacono等人(2005)Gene 349:97-105)并且它们的频率低于偶然性期望(Neafsey等人(2007)Mol.Biol.Evol.24:1744-1751)，提示它们处于选择性压力下。然而，uORF在含有转录因子、生长因子、原癌基因及其受体的蛋白质亚组中过度出现(Davuluri等人(2000)Genome Res.10:1807-1816)。除去其复杂性以外，uORF极端多样，在相对于帽和主要ORF AUG的位置、数目/转录物和长度方面变动不定(Calvo等人(2009)Proc.Natl.Acad.Sci.106:7507-7512；Somers等人(2013)Int.J.Biochem.Cell Biol.45:1690-1700)。在哺乳动物细胞中，存在涉及uORF对细胞功能发挥直接翻译作用的有限实验证据并且没有在循环中存在uORF衍生肽的证据。已经记录了单份报告：糖皮质激素受体转录物1A(GR-1A)在其1026bp 5’-UTR中拥有5个uORF起始位点。这些uORF之一编码一种93氨基酸肽，其中所述氨基酸肽在小鼠和人细胞培养物的细胞核、胞质溶胶和质膜中检出并且发现它在促进GR-1A翻译方面发挥作用(Diba等人(2001)J.Cell.Biochem.81:149-161)。申请人在此展示，uORF肽存在于人心肌钙蛋白T(TnT)基因的5’-UTR中并且令人惊讶地提供显示以下情况的首个直接证据：心脏TnTuORF肽的确存在于人循环中并且对其分析定量在心脏病症预后和诊断中及在改善确立的心脏病(包括心肌梗死)生物标记物的灵敏度和假阳性性能方面具有实用性。专利技术概述本文中描述和要求保护的专利技术具有许多属性和实施方案，包括但不限于，这份专利技术概述中阐述或描述或参考的那些。它不意在涵盖一切并且本文中描述和要求保护的专利技术不限于这份专利技术概述中确定的特征或实施方案或受其限制，纳入所述特征或实施方案目的仅在于说明而非限制。本专利技术一般地涉及用于心脏病症预后和/或诊断的测定法、方法和试剂盒。特别地，本专利技术涉及由肌钙蛋白T的上游可读框编码的新类别循环型生物标记物和对这种肽特异的结合剂在用于例如除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症预后和/或诊断的测定法、方法和试剂盒中的用途。在本专利技术的一个方面提供一种预测受试者罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险的方法，所述方法包括：(i)测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平；并且(ii)将TnTuORF肽的测量水平与来自合适对照群体的参考区间比较，其中与对照群体相比，TnTuORF肽的循环水平增加预示罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症，并且另外其中测量步骤包括检测TnTuORF肽和与TnTuORF肽选择性结合的结合剂之间的结合作用。在一个实施方案中，该方法还包括步骤(iii)对受试者执行治疗方案，其中发现与来自对照群体的TnTuORF肽的循环水平相比，受试者具有TnTuORF肽的循环水平增加。在另一个实施方案中，该方法还包括测量来自受试者的第一生物样品中TnTuORF肽的水平并且测量第二生物样品中TnTuORF肽的水平，其中第二生物样品取自与第一生物样品相同的受试者，但在较晚的时间段取得，并且比较第一和第二样品中的TnTuORF肽的水平，其中第一和第二样品之间TnTuORF肽的循环水平增加表明罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险增加。在本专利技术的另一个方面提供一种诊断受试者中罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险的方法，所述方法包括：(i)测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平；并且(ii)将TnTuORF肽的测量水平与来自合适对照群体的参考区间比较，其中与对照群体相比，TnTuORF肽的循环水平增加提示除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症，并且另外其中测量步骤包括检测TnTuORF肽和与TnTuORF肽选择性结合的结合剂之间的结合作用。在一个实施方案中，该方法还包括步骤(iii)对受试者执行治疗方案，其中发现与来自对照群体的TnTuORF肽的循环水平相比，受试者具有TnTuORF肽的循环水平增加。在根据本专利技术任何方面的另一个实施方案中，测量生物样品中的TnTuORF肽可以进行多于一次。例如，可以在涵盖数小时、数天、数周、数月或数年的一段时间进行一次、两次、三次、四次、五次、十次、十五次等测量。在又一个实施方案中，该方法包括测量来自受试者的第一生物样品中TnTuORF肽的水平并且测量第二生物样品中TnTuORF肽的水平，其中第二生物样品取自与第一生物样品相同的受试者，但在较晚的时间段取得，并且比较第一和第二样品中的TnTuORF肽的水平，其中第一和第二样品之间TnTuORF肽的循环水平增加表明除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症和/或除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症持续存在。根本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种预测受试者罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险的方法，所述方法包括：(i)测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平；并且(ii)将TnTuORF肽的测量水平与来自合适对照群体的参考区间比较，其中与对照群体相比，TnTuORF肽的循环水平增加预示罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症，并且另外其中测量步骤包括检测TnTuORF肽和选择性结合TnTuORF肽的结合剂之间的结合作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.11.15 US 61/904,9571.一种预测受试者罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险的方法，所述方法包括：(i)测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平；并且(ii)将TnTuORF肽的测量水平与来自合适对照群体的参考区间比较，其中与对照群体相比，TnTuORF肽的循环水平增加预示罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症，并且另外其中测量步骤包括检测TnTuORF肽和选择性结合TnTuORF肽的结合剂之间的结合作用。2.一种诊断受试者中除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的方法，所述方法包括：(i)测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平；并且(ii)将TnTuORF肽的测量水平与来自合适对照群体的参考区间比较，其中与对照群体相比，TnTuORF肽的循环水平增加提示除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症，并且另外其中测量步骤包括检测TnTuORF肽和选择性结合TnTuORF肽的结合剂之间的结合作用。3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，包括测量来自受试者的第一生物样品中TnTuORF肽的水平并且测量第二生物样品中TnTuORF肽的水平，其中第二生物样品取自与第一生物样品相同的受试者，但在较晚的时间段取得，并且比较第一和第二样品中的TnTuORF肽的水平，其中第一和第二样品之间TnTuORF肽的循环水平增加提示罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险增加或提示除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症和/或除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症持续存在。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中结合一个或多个风险因子的分析进行所述方法，所述风险因子包括心率、血红蛋白浓度、血压、年龄、性别、体重、体力活动水平、包括肥胖症事件、糖尿病事件和心脏事件的事件的家族史和循环型肌钙蛋白T和肌钙蛋白I的水平。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述风险因子包括心率和血红蛋白浓度。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，还包括(iii)对受试者执行治疗方案，其中发现与对照群体中TnTuORF肽的循环水平相比，受试者具有TnTuORF肽的循环水平增加。7.一种监测受试者对用于除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的药物或疗法治疗的反应性的方法，所述方法包括：(i)测量来自受试者的第一生物样品中TnTuORF的水平；(ii)测量来自受试者的第二生物样品中TnTuORF的水平，其中第二生物样品取自相同的受试者；并且(iii)比较第一和第二样品中TnTuORF的测量水平，其中第一和第二样品之间TnTuORF水平的增加表明对用于除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的药物或疗法的治疗反应不良并且其中第一和第二样品之间TnTuORF水平的下降表明对用于除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的药物或疗法的治疗积极反应。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述对照群体是已知其心脏病症的性别和年龄匹配的受试者。9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述参考区间是来自对照群体的平均循环型TnTuORF肽浓度。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述心脏病症选自心房纤颤、心力衰竭、心包炎、神经传导障碍、血管迷走神经性晕厥或这些病症任一个的组合。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述生物样品是体液或心脏组织样品。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述体液选自血液，包括静脉血和动脉血，血浆，血清和间质液。13.根据权利要求1至12任一项所述的方法，其中所述结合剂是抗体或其抗原结合片段。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述抗体选自多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体或其抗原结合片段。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体或其抗原结合片段。16.根据权利要求13至15中任一项所述的方法，其中所述结合剂或抗体被固定至固相。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中所述肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4任一项中给出的氨基酸序列组成。18.测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平的测定法，所述受试者患有除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症或处于患有除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症的风险，所述测定法包含结合剂，所述结合剂与TnTuORF肽选择性结合并且与来自受试者的生物样品中TnTuORF肽结合时可以被定量测量。19.根据权利要求18的测定法，其中所述测定法包括：(i)测量来自受试者的生物样品中肌钙蛋白T上游可读框(TnTuORF)肽的水平；并且(i)将TnTuORF肽的测量水平与来自合适对照群体的参考区间比较，其中与对照群体相比，TnTuORF肽的循环水平增加预示罹患除心肌梗死或不稳定型心绞痛之外的心脏病症...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·A·李，C·J·彭伯顿，
申请(专利权)人：奥塔哥创新有限公司，
类型：发明
国别省市：新西兰;NZ