本发明专利技术涉及医疗技术领域。茶氨酸为茶叶的特征性氨基酸，能抑制人胰腺癌、宫颈癌、胃癌和乳腺癌等癌细胞的生长和侵袭，在体内能显著抑制肿瘤的生长，其抑制效果超过抗癌药物环磷酰胺等；作用机制涉及到下调抑制肿瘤生长、侵袭和转移密切相关的受体、信号传导调控蛋白和激酶水平及核因子与DNA结合，同时，上调抑癌蛋白和细胞周期抑制蛋白等因子；茶氨酸能直接抑制组蛋白脱乙酰酶和组蛋白转甲基酶EZH2的活性以及炎症因子NF‑κB与DNA的结合。此外，茶氨酸能与6‑氟‑4‑羟基香豆素(X)协同成倍提高对这些肿瘤细胞生长和侵袭的抑制，其活性超过环磷酰胺等。本发明专利技术提供了茶氨酸及其与X协同在预防和治疗肿瘤、炎症、心脑血管和免疫缺陷等疾病中的新用途。
【技术实现步骤摘要】
本申请是《茶氨酸等在制备具有预防和治疗癌症等疾病的产品中的应用》的分案申请，原申请的申请日为2012年4月28日，申请号为201210138933.8。
本专利技术涉及医疗
，具体涉及茶氨酸及其与6-氟-4-羟基香豆素混合物在制备预防和治疗肿瘤、炎症和心脑血管病及免疫缺陷等疾病抑制剂中的应用。
技术介绍
人胰腺癌、宫颈癌、胃癌和雌激素受体阴性的人乳腺癌等恶性肿瘤的非正常生长、侵袭和转移是导致每年数以万记患者死亡的重要原因，其发病也保持一定的水平，已经成为严重危害人类健康的重大疾病。由于临床化疗和放疗的毒副作用，限制了对其有效的防治。茶氨酸(又名谷氨酰乙胺)为茶叶中一种表明其品质优劣的特征性氨基酸，由于是无毒副作用的食品成分，使其成为无限制用量的食品添加剂，香豆素也证明在每日7克食用无毒副作用，使其得以广泛用于食品工业,研究表明：茶氨酸能够增高抗癌药物在肿瘤中的浓度而协同增效治疗人卵巢癌(Sadzuki et al.,Toxicol Lett.123:159-67,2001)。我们先前的实验证明茶氨酸有抑制肝癌和肺癌的作用(Liu，et al.,Cytotechnology 59:211-217,2009；Zhang et al.Biosci Biotechnol Biochem.2002,66(4):711-6.)。组蛋白转甲基酶EZH2抑制剂和蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂如SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)，valproic acid,和sodium butyrate等已经在美国进行了I期或II期血液和实体肿瘤临床试验,EZH2和HDAC在多种人的癌症
包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、宫颈癌、肠癌和肝癌等恶性肿瘤中过度表达，美国对其作用抗癌药物靶点进行了大量的研究，这些EZH2抑制剂和HDAC抑制剂被广泛应用于各种肿瘤疾病的治疗中，被认为是应用前景较好的潜在的新型抗癌药物(Yamaguchi et al.,Cancer Sci.,10:355-62,2010；Denis,et al.,Clin Exp Metastasis 25:183–189,2008；Kelly et al.,Nat Clin Pract Oncol 2:150–157,2005；Martínez-Iglesias et al.,Clin Transl Oncol.10:395-8,2008)。核蛋白因子NF-κB被认为是促进多种肿瘤和炎症及心脑血管、免疫缺陷病等疾病的蛋白因子，正成为防治这类疾病的重要药物靶点(Ishii et al.,J Clin Biochem Nutr.50:91-105,2012)。高水平的受体VEGFR、EGFR和c-Met、非正常高表达的肿瘤信号传导相关的蛋白因子K-Ras,H-Ras，Akt，Cyclin D1,β-catenin和Bcl-2与多种肿瘤发生和恶化发展相关，而上调肿瘤抑制蛋白p53，p21，E-cadherin，Caspase3，Bax和胞浆细胞色素C水平显示了对多种癌细胞生长、侵袭和(或)转移的抑制作用(Cengel,et al.,Neoplasia 9:341-8,2007；Huang et al.,Biochem Pharmacol.77:794-803,2009；Prasad et al.,Oncology.73:112-7,2007)，因此，这些癌症相关因子成为潜在的防治癌症的重要药物靶点，能够有效地影响这些蛋白因子表达水平和活性的化合物具有广泛防治癌症的应用前景。本专利技术提供的茶氨酸具有显著的影响上述一系列蛋白因子的水平和活性，在制备预防和治疗肿瘤、炎症、心脑血管疾病和免疫缺陷病等疾病抑制剂的应用中应该有广阔的前景。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供茶氨酸及其与6-氟-4-羟基香豆素混合物在制备预防和治疗肿瘤的炎症及心脑血管等疾病抑制剂中的应用。2、本专利技术提供茶氨酸在制备组蛋白转甲基酶EZH2抑制剂中的应用。3、本专利技术提供茶氨酸在制备组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂中的应用。4、本专利技术提供茶氨酸在制备促肿瘤、炎症和心脑血管病及免疫缺陷等疾病相关的因子NF-κB抑制剂中的应用。5、本专利技术提供茶氨酸在制备肿瘤、炎症和心脑血管病及免疫缺陷等疾病相关的因子VEGFR，EGFR,c-Met,K-Ras,H-Ras，Akt,Cyclin D1,β-catenin,Bcl-2/Bax抑制剂和上调p53，p21，E-cadherin,Caspase3,胞浆与线粒体细胞色素C之比激活剂中的应用。6、茶氨酸(theanine)和6-氟-4-羟基香豆素(6-Fluoro-4-hydroxycoumarin)的化学结构式如下：7、茶氨酸(编号：660981)和6-氟-4-羟基香豆素(编号：543748)可购自美国Sigma公司(网址：http://www.sigmaaldrich.com)，Sigma公司提供的化合物库中的化合物。8、细胞系和细胞培养：人胰腺癌PANC-1和人宫颈癌Hela(epitheloid carcinoma Hela)购于美国American Type Culture Collection。PANC-1和Hela细胞分别用DMEM和RPMI-1640培养液培养；9、仪器设备：二氧化碳培养箱：3111型，美国Thermo公司；倒置荧光显微镜：TE2000-U型，日本Nikon公司。倒置显微镜：CKX31型，日本Olympus公司；台式高速
冷冻离心机：5810R型，德国Eppendorf公司；微量加样器：德国Eppendorf公司；细胞培养塑料平板(96孔)：BD公司；酶标仪：SYNERGY HT型，美国BIO-TEK公司；制冰机：XB 70型，GRANT公司。具体实施方式下面结合实例及附表对本专利技术进行详细描述。(一)实施例1：茶氨酸及其与6-氟-4-羟基香豆素混合物体外抑制癌细胞生长抑制实验：实验采用MTT法测试茶氨酸及其与6-氟-4-羟基香豆素混合物在体外条件下对癌细胞生长的抑制作用。步骤如下：1、主要试剂、细胞系和仪器:人胰腺癌PANC-1和人宫颈癌Hela细胞系和仪器如上所述。RPMI1640和DMEM培养液：Hyclone公司；已灭活胎牛血清：Hyclone公司；胰蛋白酶(trypsin)：Amersco公司；0.4％台盼蓝：Sigma公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)：Sigma公司；2、实验步骤:(1)用0.25％的胰蛋白酶消化对数生长期的癌细胞，制成单细胞悬液，调整细胞浓度为5×104/mL，以100μl每孔接种于96孔培养板；(2)将培养板移入37℃，5％CO2饱和湿度培养箱中培养24h；加入茶氨酸16-1000μM/L、6-氟-4-羟基香豆素或茶氨酸与6-氟-4-羟基香豆素混合物(1-1000μM/L)，或阳性药物对照(环磷酰胺CTX)，其终浓度为16-1500μM/L。设对照孔(只加细胞悬液200μl)和无药物空白对照孔(含溶媒0.01％DMSO)，每组均设8个复孔，置37℃，5％CO2饱和湿度培养箱内培养；(3)分别于加药48h、72h后取出96孔板，小心吸弃原本文档来自技高网...
【技术保护点】
茶氨酸在制备下调促肿瘤、炎症和心脑血管病及免疫缺陷病相关的因子VEGFR，EGFR,c‑Met,K‑Ras,H‑Ras，Akt,Cyclin D1,β‑catenin和Bcl‑2/Bax蛋白水平和上调p53，p21，E‑cadherin,Caspase3及胞浆细胞色素C蛋白水平中的应用。
【技术特征摘要】
1.茶氨酸在制备下调促肿瘤、炎症和心脑血管病及免疫缺陷病相关的因子VEGFR，EGFR,c-Met,K-Ras,H-Ras，Akt,Cyclin ...
【专利技术属性】
技术研发人员：张国营，
申请(专利权)人：张国营，
类型：发明
国别省市：山东;37
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