包括聚(酸)膜分离基质的旋转柱及其制造和使用的方法技术

提供了包括聚(酸)膜分离基质的旋转柱。还提供了包括主题装置的试剂盒以及使用所述装置的方法，例如用于样品制备(诸如蛋白质纯化)方案中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2014年2月21日提交的美国临时专利申请序列第61/943,174号和2014年6月4日提交的美国临时专利申请序列第62/007,798号的提交日期的优先权，所述申请的公开内容以引用的方式并入本文中。引言从非均质混合物中纯化出蛋白质通常是使用待纯化蛋白质的物理、化学和电性质的多步骤方法。与纯化相关的重要蛋白质特征是蛋白质的溶解度、电荷、大小和具体结合容量。因此，蛋白质的分离和清除由于这些生物分子的不同的化学和物理性质而特别具有挑战性。此外，从中分离出蛋白质的物质还有所分离的蛋白质的后续应用是多样性的。因此对延伸用于纯化和分离蛋白质的已存在技术感兴趣。概述提供了包括聚(酸)膜分离基质的旋转柱。还提供了包括主题装置的试剂盒以及使用所述装置的方法，例如用于样品制备(诸如蛋白质纯化)方案中。附图简述图1提供了多种旋转柱配置的视图，包括经配置以符合收集管的旋转柱。图2A至图2B提供了与多孔板相容的呈96单元阵列形式的旋转柱阵列以及其封盖和未封盖个别旋转柱的视图。图3描绘了用根据本专利技术的一个实施方案的2型(刷状)膜旋转柱从600μL细胞溶解产物中纯化出的墨绿多管水母GFP(AcGFP)。图4描绘了用根据本专利技术的一个实施方案的2型(刷状)膜旋转柱从900μL细胞溶解产物中纯化出的AcGFP。图5描绘了用根据本专利技术的实施方案的具有呈顶侧向上(向上)或顶侧向下(向下)配置的膜的1型(逐层(LBL))膜旋转柱从200μL细胞溶解产物中纯化出的AcGFP。图6描绘了用根据本专利技术的实施方案的具有呈顶侧向上(向上)或顶侧向下(向下)配置的膜的2型(刷状)膜旋转柱从200μL细胞溶解产物中纯化出的AcGFP。图7描绘了用根据本专利技术的实施方案的具有呈顶侧向上(向上)或顶侧向下(向下)配置的膜的1型(LBL)膜旋转柱纯化出的聚组氨酸标记的泛素(HisU)。图8描绘了用根据本专利技术的实施方案的LBL或刷状膜旋转柱纯化出的HisU。图9描绘了用根据本专利技术的实施方案的具有呈顶侧向上(向上)或顶侧向下(向下)配置的膜的2型(刷状)膜旋转柱从900μL细胞溶解产物中纯化出的AcGFP。图10描绘了使用根据本专利技术的实施方案的具有单层顶侧向下(样品1-d)或双层顶侧向上膜配置的膜旋转柱在细胞溶解缓冲液中使用咪唑从细胞溶解产物中纯化出的AcGFP。图11描绘了用根据本专利技术的实施方案的各种LBL膜从500μL细胞溶解产物中纯化出的紫外GFP(GFPuv)。图12A至图12B描绘了用根据本专利技术的实施方案的各种LBL膜从490μL细胞溶解产物中纯化出的GFPuv。图13A至图13B描绘了用根据本专利技术的实施方案的各种LBL膜从470μL细胞溶解产物中纯化出的GFPuv。定义除非另外定义，否则本文中所使用的所有技术和科学术语都具有与本专利技术所属领域的一般技术人员通常所理解的含义相同的含义。但为了清楚和容易参考起见，以下仍定义某些要素。短语“金属离子亲和性组合物”是指具有与配体/金属离子络合物键接的聚合物基质的物质组合物。本公开的金属离子亲和性组合物可以变化且在一些情况下利用螯合剂，例如能固定金属离子以形成配体/金属离子络合物的配体。本公开的螯合剂可以变化且包括能够充当多齿配体，例如多齿螯合配体、二齿螯合配体、三齿螯合配体、四齿螯合配体、五齿螯合配体、六齿螯合配体等的那些试剂。短语“螯合剂”在本文中与术语“配体”可互换使用。在一些情况下，术语配体是用来指多齿配体与其所键接的中心原子之间的个别相互作用，即，个别键。举例来说，三齿螯合配体可被认为具有三个配体，或与中心原子，例如金属离子形成具有三个配体的结构。此类配体键是可逆的且因此，此类配体/中心原子络合物可以通过改变螯合配体和中心原子所存在的环境条件而缔合和离解。此类络合物的中心原子可以是金属离子(更详细描述于下文中)，且可以因此形成配体/金属离子络合物。在某些情况下，此类配体/金属离子络合物对特定蛋白质或特定蛋白质基序，例如金属离子亲和肽具有亲和力。所述组合物可以带电或不带电。组合物当其配体与金属离子络合时带电。相反，络合物当其配体未络合且不含金属离子时不带电，但可以与金属离子络合。短语“金属离子源”是指包括金属离子的物质组合物，诸如流体组合物。如本文中所使用，术语金属离子是指亲和肽对其具有亲和力且可以用于纯化或固定融合蛋白质的任何金属离子。此类金属离子包括但不限于Ni2+、Co2+、Fe3+、Al3+、Zn2+和Cu2+。如本文中所使用，术语“硬金属离子”是指对氧显示出结合偏好的金属离子。硬金属离子包括Fe3+、Ca2+和Al3+。如本文中所使用，术语“软金属离子”是指对硫显示出结合偏好的金属离子。软金属离子包括Cu+、Hg2+和Ag+。如本文中所使用，术语“中间金属离子”是指络合氮、氧和硫的金属离子。中间金属离子包括Cu2+、Ni2+、Zn2+和Co2+。如本文中所使用，术语“接触”意指使在一起或放在一起。因而，当例如通过使第一个物品与第二个物品彼此相触而使其在一起或放在一起时，第一个物品与第二个物品接触。如本文中所使用的术语“样品”是指流体组合物，其中在某些实施例中，所述流体组合物是水性组合物。如本文中所使用，样品可以是研究实验样品，例如在研究实验室中生成的样品。如本文中所使用，短语“在...存在时”意指事件在对象存在时发生。举例来说，如果两种组分在存在第三组分时得以混合，则所有三种组分被混合在一起。短语“氧化态”是以其常规意义使用，参见例如Pauling,General Chemistry(Dover Publications,NY.)(1988)。术语“亲和肽”、“高亲和力肽”和“金属离子亲和肽”在本文中可互换用于指结合金属离子的肽，诸如富组氨酸或HAT肽。术语“亲和标记的多肽”是指亲和肽例如出于纯化或固定目的而融合的任何多肽，
包括蛋白质。术语“杂聚物”和“共聚物”在本文中可互换用于指来源于至少两个种类的组成单元，即单体的那些聚合物，并且可以定义为不同种类的组成单元如何排列。举例来说，共聚物可以是交替共聚物，其中所述共聚物的各单元与一个或多个不同的单元交替(例如，-X-Y-(X-Y-)n…、-X-Y-Z-(X-Y-Z-)n…等等)。或者，共聚物可以是周期性共聚物，其中所述共聚物的单元以重复顺序排列(例如，-X-X-Y-(X-X-Y-)n…、-X-Y-Z-Z-Y-(X-Y-Z-Z-Y-)n…、-(X-Y-X-Y-Y-X-X-X-X-Y-Y-Y-)n...等等)。周期性共聚物可以是嵌段共聚物，其中一个种类内的组成单元倾向于与相同种类的另一个成员结合(例如，-(X-X-X-X-X-X-)n-(Y-Y-Y-Y-Y-Y-Y-)n…)。共聚物可以是统计共聚物，其中组成单元的顺序遵循统计规则，例如，随机共聚物(例如，沿共聚物链的任何位置具有与整个聚合物中所存在的单体X和Y的相对量成比例的相等的被单体X或单体Y占据的概率的共聚物)、梯度共聚物(例如，占据共聚物中特定位置的单体X的概率向着共聚物的相对端增加或降低的共聚物)等等。构成杂聚物的组成单元的种类数目变化并且可以是任何数值，例如，在一些情况下，所述种类数目可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种旋转柱，其包括：细长空心结构，其具有第一端处的样品入口和第二端处的样品出口；和聚(酸)膜基质，其位于所述细长空心结构中，使得流体必须流过所述聚(酸)膜以从所述第一端横跨所述结构至所述第二端。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.21 US 61/943,174;2014.06.04 US 62/007,7981.一种旋转柱，其包括：细长空心结构，其具有第一端处的样品入口和第二端处的样品出口；和聚(酸)膜基质，其位于所述细长空心结构中，使得流体必须流过所述聚(酸)膜以从所述第一端横跨所述结构至所述第二端。2.根据权利要求1所述的旋转柱，其中所述聚(酸)膜基质包括被吸附至多孔膜载体表面的聚(酸)组件。3.根据权利要求2所述的旋转柱，其中所述聚(酸)组件包括聚(酸)膜或聚(酸)刷。4.根据权利要求3所述的旋转柱，其中所述聚(酸)组件还包括与金属离子络合的金属离子螯合配体。5.根据权利要求4所述的旋转柱，其中所述金属离子螯合配体包括基于天冬氨酸的金属离子螯合配体。6.根据前述权利要求中任一项所述的旋转柱，其中所述细长空心结构是管。7.根据前述权利要求中任一项所述的旋转柱，其中所述聚(...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔治·G·乔克哈兹，撒安坦·米特拉，
申请(专利权)人：宝生物工程美国有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US