一种脂肪源干细胞提取制备方法技术

本发明专利技术公开一种脂肪源干细胞提取制备方法，包括下述步骤：获取腹部皮下正常脂肪组织，用PBS冲洗后，再将脂肪组织剪碎，然后用I型胶原酶消化一点时间；消化后，加入PBS混匀过滤，加入含人自体血清的DMEM培养液，放置在培养箱中培养，间隔一定时间用新鲜培养液进行换液一次，细胞从组织块中生长，为原代细胞；当原代细胞达到一定融合度时，再用PBS冲洗，然后加入胰酶和EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整细胞密度，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养，为二代细胞；待二代细胞达到一定融合度时，再加入生理盐水，移至离心管中离心过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。本发明专利技术提取的脂肪源干细胞含有多种生命活性物质，从而增进脂肪来源干细胞的干细胞性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种脂肪源干细胞提取制备方法。
技术介绍
脂肪源性干细胞是一类可以自我更新、繁殖的干细胞,具有一般干细胞的多向分化潜能和稳定的体外多代增殖能力。不仅能在不同诱导因子的作用下分化成为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞等,而且还能分泌一定数量的与细胞成熟有关的细胞因子及多种促进血管生成因子和凋亡因子,并能通过旁分泌作用于成纤维细胞,促进其分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原和纤连蛋白,促进胶原合成,可发挥抗炎、抗氧化、抗衰老、损伤修复等作用。近年来，应用活细胞进行美容成为市场上追捧的热点，特别是干细胞的使用，通过在皱纹、瘢痕和疤痕上直接注射，使得活细胞能在皮肤中分化生长，对皮肤起着填充和修复功能。这些应用活细胞多数来源同源异体的，进入机体内自身免疫系统将对其产生免疫排斥作用，产生的美容效果是较低。脂肪干细胞是一种新的成体干细胞，该细胞增殖能力强，体外培养能保持稳定的生长增殖活性，且具有多项分化潜能，也已被应用到美容治疗中。脂肪干细胞生长的微环境改变，需要一定的时间来适应生长环境，这样脂肪干细胞在体内的增殖和分化为脂肪细胞和成纤维细胞速度较慢。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种脂肪源干细胞提取制备方法。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：一种脂肪源干细胞提取制备方法，该方法包括下述步骤：1)获取腹部皮下正常脂肪组织，用PBS冲洗后，再将脂肪组织剪碎，然后用I型胶原酶消化一点时间；消化后，加入PBS混匀过滤，加入含人自体血清的DMEM培养液，放置在培养箱中培养，间隔一定时间用新鲜培养液进行换液一次，细胞从组织块中生长，为原代细胞；2)当原代细胞达到一定融合度时，再用PBS冲洗，然后加入胰酶和EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整细胞密度，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养，为二代细胞；3)待二代细胞达到一定融合度时，再加入生理盐水，移至离心管中离心过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。步骤1)中，所述的脂肪组织用PBS冲洗5次，将脂肪组织剪碎至1-3mm大小，用质量体积比0.1％I型胶原酶37℃消化60分钟。步骤1)中，所述的培养条件为：在37℃、5％体积浓度的CO2培养箱中孵育，间隔48小时用新鲜培养液进行换液一次。步骤2)中，所述的原代细胞达到75-85％融合度时，用PBS冲洗2-3次，加入0.25％质量浓度的胰酶和0.04％质量浓度的EDTA消化液。步骤2)中，所述的调整细胞密度为1-5×105/ml。步骤3)中，所述的二代细胞达到90％以上融合时，加入生理盐水；1000转离心10分钟，用200目细胞筛过滤。本专利技术的有益效果：本专利技术提取的脂肪源干细胞能够有效满足市场对该细胞的需求，含有多种生命活性物质，可活化皮肤细胞，激活人体自身的“自愈功能”，增强细胞新陈代谢；细胞提取物作为有效成分，从而增进脂肪来源干细胞的干细胞性，由此对美容或整形为目的的脂肪组织的增加有效。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种脂肪源干细胞提取制备方法，首先获取腹部皮下正常脂肪组织80g，将脂肪组织用PBS冲洗5次，并将其剪碎至2mm大小，然后用质量体积比0.1％I型胶原酶37℃消化60分钟；消化后，加入PBS混匀过滤，再加入含人自体血清的DMEM培养液，在37℃、5％体积浓度的CO2培养箱中孵育，间隔48小时用新鲜培养液进行换液一次，此时细胞从组织块中生长为原代细胞；当原代细胞达到80％融合度时，再用PBS冲洗2次，然后加入0.25％质量浓度的胰酶和0.04％质量浓度的EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整其细胞密度为3×105/ml，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养为二代细胞；待二代细胞达到95％以上融合时，再加入生理盐水，移至离心管中离心过滤，1000转离心10分钟，用200目细胞筛过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。实施例2首先获取腹部皮下正常脂肪组织120g，将脂肪组织用PBS冲洗6次，每次5min，并将其剪碎至1mm大小，然后用质量体积比0.2％I型胶原酶38℃消化50分钟；消化后，加入2*PBS混匀过滤，再加入含人自体血清的DMEM培养液，在37℃、5％体积浓度的CO2培养箱中孵育，间隔48小时用新鲜培养液进行换液两次，此时细胞从组织块中生长为原代细胞；当原代细胞达到75％融合度时，再用3*PBS冲洗1次，然后加入0.3％质量浓度的胰酶和0.05％质量浓度的EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整其细胞密度为2×105/ml，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养为二代细胞；待二代细胞达到92％以上融合时，再加入250ml生理盐水，移至离心管中离心过滤，1500转离心8分钟，用220目细胞筛过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。实施例3一种脂肪源干细胞提取制备方法，首先获取腹部皮下正常脂肪组织180g，将脂肪组织用2*PBS冲洗4次，并将其剪碎至4mm大小，然后用质量体积比0.08％I型胶原酶37℃消化65分钟；消化后，加入1*PBS混匀过滤，再加入含人自体血清的DMEM培养液，在37℃、5％体积浓度的CO2培养箱中孵育，间隔48小时用新鲜培养液进行换液一次，此时细胞从组织块中生长为原代细胞；当原代细胞达到82％融合度时，再用1*PBS冲洗2次，然后加入0.25％质量浓度的胰酶和0.08％质量浓度的EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整其细胞密度为5×105/ml，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养为二代细胞；待二代细胞达到94％以上融合时，再加入生理盐水，移至离心管中离心过滤，1000转离心8分钟，用220目细胞筛过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。本专利技术提取的脂肪源干细胞含有多种生命活性物质，可活化皮肤细胞，激活人体自身的“自愈功能”，对衰老的细胞进行补充与调控，激活细胞功能，增加细胞数量，提高细胞活性，改善细胞质量，提高细胞膜物质运输功能和物质交换能力，防止和延缓细胞病变，恢复细胞的正常生理功能，促进真皮层细胞分泌合成胶原纤维、多糖、糖蛋白等功能分子，增强细胞新陈代谢；细胞提 取物作为有效成分，从而增进脂肪来源干细胞的干细胞性，由此对美容或整形为目的的脂肪组织的增加有效。因此，本专利技术的组合物能够增进皮肤饱满感，促进脂肪来源干细胞的再生，恢复损伤的皮下脂肪的功能，从而能够作为用于增进皮肤饱满感的美容或整形用组合物而使用，并且能够作为用于增进皮肤饱满感的皮肤外用剂组合物来使用。在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本专利技术的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。以上公开的本专利技术优选实施例只是用于帮助阐述本专利技术。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该专利技术仅为所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂肪源干细胞提取制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：1)获取腹部皮下正常脂肪组织，用PBS冲洗后，再将脂肪组织剪碎，然后用I型胶原酶消化一点时间；消化后，加入PBS混匀过滤，加入含人自体血清的DMEM培养液，放置在培养箱中培养，间隔一定时间用新鲜培养液进行换液一次，细胞从组织块中生长，为原代细胞；2)当原代细胞达到一定融合度时，再用PBS冲洗，然后加入胰酶和EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整细胞密度，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养，为二代细胞；3)待二代细胞达到一定融合度时，再加入生理盐水，移至离心管中离心过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。

【技术特征摘要】
1.一种脂肪源干细胞提取制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：1)获取腹部皮下正常脂肪组织，用PBS冲洗后，再将脂肪组织剪碎，然后用I型胶原酶消化一点时间；消化后，加入PBS混匀过滤，加入含人自体血清的DMEM培养液，放置在培养箱中培养，间隔一定时间用新鲜培养液进行换液一次，细胞从组织块中生长，为原代细胞；2)当原代细胞达到一定融合度时，再用PBS冲洗，然后加入胰酶和EDTA消化液，待细胞悬浮后，调整细胞密度，再次加入含人自体血清的DMEM培养液培养，为二代细胞；3)待二代细胞达到一定融合度时，再加入生理盐水，移至离心管中离心过滤，取上清液进行浓缩，提取制得脂肪源干细胞。2.根据权利要求1所述的一种脂肪源干细胞提取制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的脂肪组织用PBS冲洗5次，将脂肪组织剪碎至1-3mm大小，用质量体...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽惠恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34