本发明专利技术涉及一种检测18种高危型HPV核酸的探针，包括以下序列的探针：寡核苷酸序列SEQ ID No：1～15；寡核苷酸序列SEQ ID No：46；寡核苷酸序列SEQ ID No：49；寡核苷酸序列SEQ ID No：52；寡核苷酸序列SEQ ID No：55。本发明专利技术还涉及一种检测18种高危型HPV核酸的引物和试剂盒。本发明专利技术提供的检测引物、探针与试剂盒在可对HPV16、18和58型进行分型，可以更好的罹患宫颈癌风险的提示效果。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设计核酸检测技术，特别涉及一种检测18种高危型HPV核酸的引物、探针及试剂盒。
技术介绍
HPV是一种嗜上皮性病毒。根据HPV致癌风险性大小，可将引起高度宫颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasia，CIN)从而导致宫颈癌发生的HPV称为高危型HPV(high-risk HPV，HR-HPV)。2004年出版的《The Health Professional's HPV handbook》指出高危型HPV有18种，分别为HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82。目前国内临床主要的HPV检测方法有荧光PCR法、杂交捕获法、基因芯片法。现有荧光PCR法产品有以下三大缺点：1、现有荧光定量PCR检测试剂多数不对HPV16、HPV18分型。2、现有可对HPV16、HPV18具体分型的荧光定量PCR专利不可实现同时区分中国人群宫颈癌样本中检出率明显较高的HPV58和实现对导致宫颈癌的18种HPV高危型(HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)进行检测。3、现有可同时对HPV16、HPV18与HPV58具体分型的荧光定量PCR检测试剂均不能实现仅需单管检测，致使检测通量低且操作繁琐难以满足对大规模筛查要求。而杂交捕获法缺点是：无内标、检测时间长(DNA分解45min、DNA-RNA杂交60min、抗体捕获60min、化学发光30min、计算机判读15min一次实验一般要5～6小时)、灵敏度过低(3.5×105copies/mL)、操作复杂、检测基因型少无法具体分型(仅13种高危型)且需要特定昂贵的仪器，成本高，和其检测外的高危型和低危型如HPV6、11等存在交叉反应，会出现假阳性结果。PCR-反向点杂交法、液态芯片法等基因芯片法类产品虽然能对HPV具体分型，且检测基因型相对多，但其缺点是不能实现实时检测，需要扩增后产物分析操作，耗时长(4h以上)、易存在PCR产物污染、操作复杂、不能满足临床宫颈癌大量筛查的需求。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：提供一种可具体区分HPV16、HPV18与HPV58的检测18种高危型HPV核酸的引物、探针及试剂盒。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种检测18种高危型HPV核酸的探针，包括以下序列的探针：与HPV26型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、59型、66型、68型、73型和82型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：1～15；与HPV16型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：46；与HPV18型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：49；与HPV58型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：52；与人类β-actin基因的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：55。本专利技术还提供了一种检测18种高危型HPV核酸的引物，包括以下序列的引物：与HPV26型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、59型、66型、68型、73型和82型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：16～45；与HPV16型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：47～48；与HPV18型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：50～51；与HPV58型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：53～54；与人类β-actin基因的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：56～57。本专利技术还提供了一种检测18种高危型HPV核酸的试剂盒，包括反应液，所述反应液包括检测18种高危型HPV核酸的探针和引物，所述探针包括寡核苷酸序列SEQ ID No：1～15、SEQ ID No：46、SEQ ID No：49、SEQ ID No：52和SEQ ID No：55，所述引物包括寡核苷酸序列SEQ ID No：16～45、SEQ ID No：47～48、SEQ ID No：50～51、SEQ ID No：53～54和SEQ ID No：56～57。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术的检测引物、探针与试剂盒能够全面覆盖国际公认和宫颈癌密切相关的18种高危型HPV(HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82型)，同时对中国人群风险度最高的3种高危型HPV(HPV16、18和58型)分型，比现有试剂盒更好的提示罹患宫颈癌的风险，更适合中国人群宫颈癌筛查；(2)本专利技术的检测方法只需要单一反应管，检测时间不超过1.5h，具有快速、简便和高通量的优点，特别适用于大样本检测。附图说明图1为本专利技术实施例的第一组15种高危型HPV在ABI Prism 7500上的检测结果的扩增曲线；图2为本专利技术实施例的第二组HPV16在ABI Prism 7500上的检测结果的扩增曲线；图3为本专利技术实施例的第三组HPV18在ABI Prism 7500上的检测结果的扩增曲线；图4为本专利技术实施例的第四组HPV58在ABI Prism 7500上的检测结果的扩增曲线；图5为本专利技术实施例的第五组人类β-actin基因在ABI Prism 7500上的检测结果的扩增曲线；图6为本专利技术实施例的含第一组至第五组的DNA在ABI Prism 7500上的检测结果的扩增曲线。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图详予说明。本专利技术最关键的构思在于：设计出可检测18种高危型HPV核酸且同时可具体区分HPV16、HPV18与HPV58的引物和探针序列。请参阅图1至图6，本专利技术提供了基于Taqman探针法的实时荧光PCR技术的15+3种高危型HPV的检测引物与探针，包括：(1)具有仅与15种高危型HPV即HPV26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、59、66、68、73、82的基因序列互补配对的寡核苷酸。其中SEQ ID No：1～15为探针，SEQ ID No：16～45为引物。(2)具有仅与HPV16的基因序列互补配对的寡核苷酸。其中，SEQ ID No：46为探针，SEQ ID No：47～48为引物。(3)具有仅与HPV18的基因序列互补配对的寡核苷酸。其中，SEQ ID No：49为探针，SEQ ID No：50～51为引物。(4)具有仅与HPV58的基因序列互补配对的寡核苷酸。其中，SEQ ID No：52为探针，SEQ ID No：53～54为引物。(5)具有仅人类β-actin基因的基因序列互补配对的寡核苷酸。其中，SEQ ID No：55为探针，SEQ ID No：56～57为引物。其中，上述每组探针的5’端分别标记最大发射光波长为510～518nm、538～560nm、563～583nm、600nm～610nm、640～670nm和705～715nm中的报告基团的其中一种，并且每组之间相互不本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测18种高危型HPV核酸的探针，其特征在于，包括以下序列的探针：与HPV26型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、59型、66型、68型、73型和82型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：1‑15；与HPV16型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：46；与HPV18型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：49；与HPV58型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：52；与人类β‑actin基因的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：55。
【技术特征摘要】
1.一种检测18种高危型HPV核酸的探针，其特征在于，包括以下序列的探针：与HPV26型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、59型、66型、68型、73型和82型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：1-15；与HPV16型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：46；与HPV18型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：49；与HPV58型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：52；与人类β-actin基因的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：55。2.根据权利要求1所述的检测18种高危型HPV核酸的探针，其特征在于，每组探针分别在5’端标记报告基团，并在3’端标记淬灭基团；所述报告基团的最大发射光波长为510-518nm、538-560nm、563-583nm、600nm-610nm、640-670nm和705-715nm中的任意一种，每组探针标记的报告基团的最大发射光波长不同；所述淬灭基团的吸收光波长为380-550nm、470-560nm、480-580nm、550-650nm和620-730nm中的任意一种。3.根据权利要求2所述的检测18种高危型HPV核酸的探针，其特征在于，所述报告基团为6-FAM、TET、HEX、JOE、VIC、TAMRA、NED、ROX、Texas Red、LC Red610、Cy3、Cy3.5、LC Red640、Cy5、Cy5.5、Quasar670、Quasar705、LC Red705或Alexa Fluor680，所述淬灭基团为ECLIPSE、DABCYL、TAMRA、BHQ1、BHQ2或BHQ3。4.一种检测18种高危型HPV核酸的引物，其特征在于，包括以下序列的引物：与HPV26型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、53型、56型、59型、66型、68型、73型和82型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：16～45；与HPV16型的基因序列互补配对的寡核苷酸序列SEQ ID No：47～48；与H...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡泽加，杨勇贤，田洁，陈永娟，王晓辉，卢舟宇，
申请(专利权)人：亚能生物技术深圳有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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