本发明专利技术公开了用于甲状腺癌诊断的miRNA生物标志物及检测试剂盒，所述microRNA生物标志物由如下microRNA组成：hsa‑miR‑193b‑3p、hsa‑miR‑384、hsa‑miR‑145‑5p、hsa‑miR‑424‑5p和hsa‑miR‑143‑3p。本发明专利技术将甲状腺癌与癌旁组织表达差异明显(差异表达量大于2个fold，RT‑PCR中CT值小于30)的5种miRNA hsa‑miR‑193b‑3p、hsa‑miR‑384、hsa‑miR‑424‑5p、hsa‑miR‑145‑5p及hsa‑miR‑143‑3p进行血清学表达分析，结果表明这5种miRNA在血清中稳定表达，血清miRNA的表达与组织具有很好的一致性，hsa‑miR‑193b‑3p、hsa‑miR‑384和hsa‑miR‑145‑5p表达下调，hsa‑miR‑424‑5p和hsa‑miR‑143‑3p表达上调。这5种miRNA可以作为甲状腺癌诊断的生物标志物，且联合诊断的灵敏度与特异性显著高于单一miRNA诊断的灵敏度和特异性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，涉及用于人甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物及检测试剂盒。
技术介绍
甲状腺癌是常见的内分泌腺恶性肿瘤，占癌症发病率的2.59％，包括甲状腺乳头状癌(PTC)，甲状腺滤泡癌(FTC)、甲状腺未分化癌(ATC)和甲状腺髓样癌(MTC)，前三者起源于滤泡上皮细胞，后者起源于滤泡旁细胞，其中PTC约占甲状腺癌的80％。目前，甲状腺癌的发病机制尚未清楚，通过对甲状腺癌病因及发生发展机制的研究，对于提高其诊断率、指导治疗及改善预后具有重要的临床意义。MicroRNA(miRNA)是最新发现的长约18-25个核苷酸的非编码小分子RNA，在进化上高度保守，数量约占基因组的1％，现已普遍认为miRNA与人类疾病的发生有密切的联系，其发现为人们在基因水平认识癌症提供了新思路。MiRNA在转录或转录后水平负调控蛋白质编码基因的表达：通过与其靶基因mRNA非完全互补或近似完全互补结合，导致mRNA降解或抑制其翻译。人类基因组约30％的基因受miRNA调控，在细胞的生长、增殖、分化和凋亡等多方面发挥着重要的生物调节作用。研究已证实miRNA的异常调控与肿瘤形成及进展关系密切。MiRNA的靶基因多数是参与转录、信号转导、肿瘤发生等生物学效应的基因。随着miRNA与癌症关系的不断深入研究，发现miRNA并不只是参与了癌症形成的初期阶段，还涉及到疾病病情变化、对药物的敏感性、患者预后等等多方面。随后基于miRNA的癌症基因治疗顺势登上舞台，凸显出很大的研究价值。目前，用于人甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物研究较少，尚无可靠的microRNA生物标志物用于诊断人甲状腺癌。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供用于甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物及检测试剂盒。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：用于人甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物，包括：hsa-miR-193b-3p、hsa-miR-384、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-424-5p和hsa-miR-143-3p；所述hsa-miR-193b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述hsa-miR-384的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述hsa-miR-145-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述hsa-miR-424-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述hsa-miR-143-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。进一步地，所述microRNA生物标志物为人血清microRNA生物标志物。一组人甲状腺癌诊断用microRNA引物、探针的组合，包括hsa-miR-193b-3p引物、探针，hsa-miR-384引物、探针，hsa-miR-145-5p引物、探针，hsa-miR-424-5p引物、探针，hsa-miR-143-3p引物、探针；所述引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物；hsa-miR-193b-3p的反转录引物序列如SEQ ID NO.6所示，定量PCR前引物序列如SEQ ID NO.7所示，定量PCR后引物序列如SEQ ID NO.16所示；hsa-miR-384的反转录引物序列如SEQ ID NO.8所示，定量PCR前引物序列如SEQ ID NO.9所示，定量PCR后引物序列如SEQ ID NO.16所示；hsa-miR-145-5p的反转录引物序列如SEQ ID NO.10所示，定量PCR前引物序列如SEQ ID NO.11所示，定量PCR后引物序列如SEQ ID NO.16所示；hsa-miR-424-5p的反转录引物序列如SEQ ID NO.12所示，定量PCR前引物序列如SEQ ID NO.13所示，定量PCR后引物序列如SEQ ID NO.16所示；hsa-miR-143-3p的反转录引物序列如SEQ ID NO.14所示，定量PCR前引物序列如SEQ ID NO.15所示，定量PCR后引物序列如SEQ ID NO.16所示；各microRNA探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示。一种人甲状腺癌的肿瘤诊断试剂盒，包括如上所述的microRNA引物、探针的组合。进一步地，所述的人甲状腺癌的肿瘤诊断试剂盒还包括逆转录酶、缓冲液、dNTPs、MgCl2、DEPC水、Taq酶以及标准品和/或对照品。本专利技术的优点：本专利技术将甲状腺癌组织与配对的癌旁组织表达差异明显(差异表达量大于2个fold，RT-PCR中CT值小于30)的5种miRNAhsa-miR-193b-3p、hsa-miR-384、hsa-miR-424-5p、hsa-miR-145-5p及hsa-miR-143-3p进行血清学表达分析，结果表明这5种miRNA在血清中稳定表达，血清miRNA的表达与组织具有很好的一致性，hsa-miR-193b-3p、hsa-miR-384和hsa-miR-145-5p表达下调，hsa-miR-424-5p和hsa-miR-143-3p表达上调。这5种miRNA可以作为甲状腺癌诊断的生物标志物，且联合诊断的灵敏度与特异性显著高于单一miRNA诊断的灵敏度和特异性。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。尽管参照较佳实施例对本专利技术作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如教科书和实验指南中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1：甲状腺癌组织差异性miRNA的筛选1对象和方法1.1标本来源在取得患者知情同意后，收集江苏省人民医院2013年5月-2014年9月经病理证实为甲状腺癌患者手术后标本8对，包括癌组织标本以及配对的距离癌组织3厘米以上范围的癌旁组织，所有患者在术前均未接受过化疗和放疗。1.2主要仪器设备台式离心机：EppendorfMini spin(美国)Eppendorfcentrifuge 5810R(美国)核酸浓缩仪：Eppendorfconcentrator 5301(美国)紫外分光光度计：DU640、天平(Beckman公司产品)紫外交联仪：GS GENE LINKER UV Chamber(BIO-RAD公司产品)水浴锅(Memert公司产品)杂交盒、芯片、芯片扫描仪：LuxScan-10K/A(Capitalbio公司产品)水平摇床：TDK-2(北京通达科技有限公司)；凝胶成像分析仪：GDS-7600(UPV产品)超净工作台(Memert公司产品)；实时荧光PCR仪：ABI PRISM7500(美国)1.3主要实验试剂Trizol、糖原(Invitrogen公司)；T4RNA连接酶(NEB公司)；Control RNA(Capitalbio公司)；5P’-C-U-Cy3-3’5P’-C-U-Cy5-3’(Dharmacon公司)；Ambion’s miRNA Isolation Kit(Ambion公司)；EDPC、甲酞胺、澳酚蓝(Sigma公司)；20×SSC、10％SDS(PIERCE本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于人甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物，其特征在于包括：hsa‑miR‑193b‑3p、hsa‑miR‑384、hsa‑miR‑145‑5p、hsa‑miR‑424‑5p和hsa‑miR‑143‑3p；所述hsa‑miR‑193b‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述hsa‑miR‑384的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述hsa‑miR‑145‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述hsa‑miR‑424‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述hsa‑miR‑143‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
【技术特征摘要】
1.用于人甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物，其特征在于包括：hsa-miR-193b-3p、hsa-miR-384、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-424-5p和hsa-miR-143-3p；所述hsa-miR-193b-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述hsa-miR-384的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述hsa-miR-145-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述hsa-miR-424-5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述hsa-miR-143-3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。2.根据权利要求1所述的用于人甲状腺癌诊断的microRNA生物标志物，其特征在于：所述microRNA生物标志物为人血清microRNA生物标志物。3.人甲状腺癌诊断用microRNA引物、探针的组合，其特征在于：包括hsa-miR-193b-3p引物、探针，hsa-miR-384引物、探针，hsa-miR-145-5p引物、探针，hsa-miR-424-5p引物、探针，hsa-miR-143-3p引物、探针；所述引物包括反转录引物、定量PCR前引物和定量PCR后引物；hsa-miR-193b-3p的反转录引物序列如SEQ ID NO.6所示，定量...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔学俊，
申请(专利权)人：崔学俊，
类型：发明
国别省市：河南;41
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