本发明专利技术公布了一种氧化石墨烯分散固相萃取‑反萃取检测磺胺类药物残留的方法，属于分析化学检测领域。方法包括：（1）提取：称取试样加入乙腈，均质1min，加入无水硫酸钠，振荡、离心后收集上清液旋转蒸发浓缩至干。（2）分散固相萃取：将残渣溶解后转移至15mL离心管中，加入氧化石墨烯，涡旋震荡，进行分散固相萃取；（3）反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液连同氧化石墨烯通过有机相滤器，弃去流出液；然后进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶残渣，进仪器检测。本发明专利技术的有益效果是，利用氧化石墨烯分散固相萃取‑反萃取技术，建立了磺胺类药物残留的检测方法，减少了基质干扰，提高了检测效率，方法快捷、高效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留的方法，尤其是一种基于氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取技术结合液相色谱串联质谱检测食品中磺胺类药物残留的方法，属于分析化学检测领域。
技术介绍
磺胺类药物（sulfonamides，SAS）因具有广谱抗菌、廉价方便等优点而被广泛应用于养殖环节，但其过量使用会在食用动物产品中残留，危害人类健康。世界各国均有关于磺胺类残留的最高限量要求，我国规定磺胺类药物在动物源性食品中的最高残留限量总和为100μg/kg。分散固相萃取技术因其具有快捷、高效、成本低廉等的特点而被广泛使用，其技术核心是在样品提取液中直接加入除水剂和杂质吸附剂，提取液经离心后直接进行仪器分析。目前可以用于分散固相萃取的材料有C18、GCB、PSA、碳纳米管等。氧化石墨烯是一种由天然石墨制备、与碳纳米管结构相似的碳纳米材料，是单原子层厚度的二维结构纳米材料，其比表面积理论上可达2900m2/g，是所有碳纳米材料中比表面积最大的材料。在氧化石墨烯制备过程中，其表面形成了大量的活性基团如羧基、羰基、羟基、环氧基等，因此，氧化石墨烯不仅具有足够大的比表面积，同时还拥有足够高的表面功能基团密度，是一种性能优异的吸附剂。
技术实现思路
本专利技术提供了一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留的方法，包括如下步骤。（1）提取：称取2-5g试样，加入15-30mL乙腈，均质1-3min，再加入无水硫酸钠，振荡提取1-5min后，8000-9000r/min条件下离心6-8min，收集上清液于梨形瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发浓缩至干。（2）分散固相萃取：将步骤（1）中残渣用乙腈-水溶解，转移至15mL离心管中，加入氧化石墨烯，涡旋震荡，进行分散固相萃取。（3）反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液通过有机相滤膜，弃去流出液；然后使用反萃取试剂进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶解，进液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行检测。方法中磺胺类药物包括磺胺嘧啶（sulfadiazine，SDZ）、磺胺甲噁唑（sulfamethoxazole，SMZ）、磺胺间甲氧嘧啶（sulfamonomethoxin，SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（sulfameter，SMT）、磺胺二甲氧嘧啶（sulfadimethoxine，SDM）、磺胺喹噁啉（sulfaquinoxaline，SQX）。步骤（2）所述的氧化石墨烯用量为15mg。步骤（2）分散固相萃取时间为2min。步骤（3）所述的反萃取试剂为含氨5%的乙腈。步骤（3）所使用的反萃取试剂体积为5mL。步骤（3）仪器检测所使用的液相色谱-串联质谱配有电喷雾离子源（ESI）。检测时的色谱条件为：色谱柱：Poroshell 120 EC-C18，3.0×100mm，2.7μm；柱温：30℃；进样体积：5μL；流动相：A为甲醇；B为0.1%甲酸水；流速：0.3mL/min。流动相梯度洗脱程序：0-1min，10-30%A；1-3min，30-80%A；3-7min，80%A；7-9min，80-10%A；9-10min，10%A。检测时的质谱条件为：离子源：喷射流离子聚焦电喷雾离子源；扫描模式：正离子模式；检测方式：多反应监测；干燥气温度：350℃；干燥气流速：10L/min；雾化气压力：45psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；毛细管电压：4000V；碰撞气：高纯氮；各离子对驻留时间均为40ms。表1 磺胺类药物的质谱参数。本专利技术的有益效果是，利用氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取技术，建立了简便、快速的磺胺类药物残留检测方法，减少了基质干扰，回收率高，提高了检测效率，所建立的方法快捷、高效、实用性强。附图说明图1是本专利技术所涉及磺胺类药物的多反应监测（MRM）图。其中，1. 磺胺嘧啶；2.磺胺甲噁唑；3. 磺胺对甲氧嘧啶；4. 磺胺间甲氧嘧啶；5. 磺胺喹噁啉；6. 磺胺二甲氧嘧啶。具体实施方式以鸡肉检测为例来说明本专利技术。仪器设备：美国Agilent公司1290-6460液相色谱-串联质谱仪，配有喷射流离子聚焦电喷雾离子源（AJS-ESI）；德国IKA公司GM200型高速均质机；日本东京理化MMV-1000W型振荡器；日本Hitachi公司CR22GⅢ型高速冷冻离心机；瑞士Buchi公司R215型旋转蒸发仪；德国IKA公司MS3型涡旋混匀器。材料与试剂：氧化石墨烯由济宁利特纳米技术有限责任公司提供；乙腈为色谱纯；无水硫酸钠（650℃灼烧4h，冷却后贮存于干燥器中，备用）、氨水为分析纯；实验用水为超纯水。标准品：磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉，均购自德国Dr公司，纯度均在98%以上。样品前处理。提取：称取5g试样（精确至0.01g）于50ml离心管中，加入15mL乙腈，均质1min，再加入10g无水硫酸钠，振荡提取1min后，在4℃，9000r/min条件下离心8min，重复操作一次，合并提取液，加入10mL乙腈饱和的正己烷，振荡，静置分层，将乙腈层转移至梨形瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发浓缩至干。残渣用1mL乙腈-水溶液（10+90，体积比）溶解，待净化。净化：将残渣溶解液转移至含有15mg氧化石墨烯的15mL离心管中，涡旋2min，将溶液连同氧化石墨烯过0.22μm有机相滤器，弃去流出液，氧化石墨烯留在滤器内；然后使用5mL含5%氨水的乙腈进行反萃取，收集反萃取液至15mL离心管中，氮气吹干后用1mL流动相溶解，过0.22μm有机相滤膜，上机检测。液相色谱条件。色谱柱：Poroshell 120 EC-C18，3.0×100mm，2.7μm。柱温：30℃。进样体积：5μL。流动相：A为甲醇、B为0.1%甲酸水。流动相梯度洗脱程序：0-1min，10-30%A；1-3min，30-80%A；3-7min，80%A；7-9min，80-10%A；9-10min，10%A。流速：0.3mL/min。质谱条件。离子源：喷射流离子聚焦电喷雾离子源。扫描模式：正离子模式。检测方式：多反应监测。干燥气温度：325℃。干燥气流速：10L/min。雾化气压力：45psi。鞘气温度：350℃。鞘气流速：11L/min。毛细管电压：4000V。碰撞气：高纯氮。各离子对驻留时间均为40ms。表2 磺胺类药物的质谱参数。方法评价。为避免基质效应的影响，采用基质加标的方式配制标准溶液进行上机测定，浓度分别为5、10、50、100、300、500μg/L。实验结果表明，在5～200μg/L浓度范围内，6种磺胺的线性关系良好，定量限可达5μg/kg。准确称取5 g（精确至0.01g）样品，分别准确添加50μL、100μL、150μL 1.00 mg/L三个水平的6种磺胺混合标准品溶液，在优化实验条件下进行前处理并上机测定，每个水平平行测定6次，计算回收率和精密度。其平均回收率为77%～96%，精密度10~15%。所述实施例仅仅是本专利技术的一个优选的实施例，并不是对本专利技术的范围进行限定。基于本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种氧化石墨烯分散固相萃取‑反萃取检测磺胺类药物残留的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）提取：称取2‑5g试样，加入15‑30mL乙腈，均质1‑3min，再加入无水硫酸钠，振荡提取1‑5min后，8000‑9000r/min条件下离心6‑8min，收集上清液于梨形瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发浓缩至干；（2）分散固相萃取：将步骤（1）中残渣用乙腈‑水溶解，转移至15mL离心管中，加入氧化石墨烯，涡旋震荡，进行分散固相萃取；（3）反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液通过有机相滤器，弃去流出液，氧化石墨烯留在滤器内；然后使用反萃取试剂进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶解，进液相色谱‑串联质谱（LC‑MS/MS）进行检测。
【技术特征摘要】
1.一种氧化石墨烯分散固相萃取-反萃取检测磺胺类药物残留的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）提取：称取2-5g试样，加入15-30mL乙腈，均质1-3min，再加入无水硫酸钠，振荡提取1-5min后，8000-9000r/min条件下离心6-8min，收集上清液于梨形瓶中，在40℃水浴中旋转蒸发浓缩至干；（2）分散固相萃取：将步骤（1）中残渣用乙腈-水溶解，转移至15mL离心管中，加入氧化石墨烯，涡旋震荡，进行分散固相萃取；（3）反萃取及检测：将分散固相萃取后的溶液通过有机相滤器，弃去流出液，氧化石墨烯留在滤器内；然后使用反萃取试剂进行反萃取，收集反萃取液，氮气吹干，用流动相溶...
【专利技术属性】
技术研发人员：倪永付，
申请(专利权)人：中华人民共和国济宁出入境检验检疫局，
类型：发明
国别省市：山东;37
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