从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法技术

本发明专利技术涉及从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，属于化学提取技术领域。本发明专利技术从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法包含下列步骤：S1利用蛤蜊制备含牛磺酸的清液；S2将所述清液除蛋白；S3将所述步骤S2的产品进行分离纯化。本发明专利技术的有益效果为：原料无毒性，易获取，不存在环境污染的问题。且工艺操作简单，产量大。获得的牛磺酸晶体相对于化学合成法产出的具有更高的生物活性。也在一定程度上促进了蛤蜊的深加工，缓解了鲜食蛤蜊过剩和运输困难的情况。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物提取
，特别是一种从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法。
技术介绍
牛磺酸因1827年首先在牛胆汁中发现而得名。它是名贵中药牛黄的主要成分，又称牛胆碱、牛胆酸或牛胆素。牛磺酸作为一种重要的生物活性物质，一种含硫的非蛋白质氨基酸，在人体中起着极其重要的作用。自发现以来，牛磺酸作为人体必需的氨基酸营养条件，越来越受到人们的重视。牛磺酸在人体中的分布十分广泛，牛磺酸能促进大脑发育，神经传导的调度，支持正常的心脏，肝脏的功效，内分泌，牛磺酸视网膜系统，特殊的生理和药理作用，具有广泛的应用在医药和食品行业。牛磺酸生产主要有天然物中提取、化工合成和微生物发酵三种方法。陆地动物肝脏中含有较丰富的牛磺酸，特别是牛的胆汁中的含量高。海洋动物体内含有较多的牛磺酸。由于牛磺酸在天然生物中较分散、量少，所以人们工业获取牛磺酸主要还是要靠化工合成。自从1950年世界各国开始进行人工合成牛磺酸的研究，牛磺酸的合成工艺将近十多种，其中二氯乙烷法、乙醇胺法等化学合成法已工业化。另外据日本专利报道，可用发酵法制取牛磺酸。牛磺酸的生产厂家主要集中在日本、美国、欧洲等发达国家和地区，其产量在迅速增加。牛磺酸在水产品中含量非常丰富，且以游离的形式存在，如：墨鱼、章鱼、青花鱼、虾、牡蛎、蛤蜊等。尤其真蛸类和甲壳类海产品中牛磺酸的含量最多，如：沙虫干、牡蛎和翡翠贻贝中含量也不少于10000mg/kg，马氏珠母贝中含量将近13000mg/kg，而章鱼体内含天然牛磺酸更是高达16000mg/kg，从海产品中提取牛磺酸的工艺简单而无污染，并且用水产品的下脚料提取牛磺酸又具有环保的意义，前景非常好。自1950年初以来，在世界上开始人工合成牛磺酸。目前，国内外市场上使用的牛磺酸有化学合成的牛磺酸和天然牛磺酸，但其中多为化学合成法生产。虽然合成法牛磺酸价格低廉，但存在原料毒性大，工艺操
作复杂，环境污染等问题。随着人民生活水平的提高和绿色化学的进展，人们越来越提倡使用天然提取的牛磺酸。因此，从天然产物中提取牛磺酸成为市场迫切需求，具有很大的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，将牛磺酸通过除蛋白、脱色、分离纯化等方法从蛤蜊中提取。本专利技术解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，包含下列步骤：S1利用蛤蜊制备含牛磺酸的清液；S2将所述清液除蛋白；S3将所述步骤S2的产品进行分离纯化。优选地，所述步骤S1包含下列步骤：S1.1将蛤蜊清洗去壳取出蛤蜊肉；S1.2将蛤蜊肉放入到组织捣碎机中匀浆；S1.3将匀浆后蛤蜊肉称重并用3倍质量的水稀释；S1.4调节pH值；S1.5放入恒温培养箱里进行水提取；S1.6将水提取产物进行过滤，取滤液。优选地，所述步骤S2包含下列步骤：S2.1除酸性蛋白；S2.2除碱性蛋白。优选地，所述步骤S2.1除酸性蛋白采用盐酸将所述步骤S1产物的pH调至3.5，然后在4500r/min下离心20分钟，并收集上清液。优选地，所述步骤S2.2除碱性蛋白采用氢氧化钠将所述步骤S2.1的产物的pH调至10，在4500r/min下离心20分钟，收集上清液。优选地，所述步骤S3的具体步骤为：S3.1调节所述步骤S2产物的pH到4.5；S3.2将所述步骤S3.1的产物注入强酸性阳离子树脂交换柱，并采用蒸馏水进行洗脱；S3.3收集吸光度最高峰值0.55左右的部分流出液。优选地，所述步骤S2与所述步骤S3之间存在对所述步骤S2产物进行脱色的步骤。优选地，所述脱色步骤具体包含：向所述步骤S2的产物中加入活性炭进行脱色。优选地，向每100mL所述步骤S2的产物中加入2～3g活性炭。本专利技术的优点和积极效果是：原料无毒性，易获取，不存在环境污
染的问题。且工艺操作简单，产量大。获得的牛磺酸晶体相对于化学合成法产出的具有更高的生物活性。也在一定程度上促进了蛤蜊的深加工，缓解了鲜食蛤蜊过剩和运输困难的情况。附图说明图1为牛磺酸的标准曲线图；图2为牛磺酸标准品红外光谱图；图3为实验提取牛磺酸的红外光谱图；图4为牛磺酸标准品核磁共振氢谱图；图5为牛磺酸样品品核磁共振氢谱图。具体实施方式下面结合附图、通过具体实施例对本专利技术作进一步详述。以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本专利技术的保护范围。实施例中所述实验方法如无特殊说明，均为常规方法；如无特殊说明，所述试剂和器材，均可从商业途径获得。实验试剂实验仪器标准曲线回归方程的确定在7个10.0mL的容量瓶中依次分别加入1.0mmol/L牛磺酸标准液0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL,加蒸馏水定容并摇匀,各取1.0mL,加入体积比为2:3的甲醛-乙酰丙酮1.0mL作为显色剂,8mL 1.0mol/L醋酸钠,置于100℃的水浴中加热15min,冷却至室温,于400nm波长下测定吸光度A,得到牛磺酸标准曲线数据数据表(如表1所示)。根据表1提供的数据获得标准曲线(如图1所示),计算其回归方程式。本专利技术所使用的牛磺酸显色原理为：在醋酸钠存在下,牛磺酸与乙酰丙酮和甲醛经加热反应生成N-取代基2,6-二甲基3,5-二乙酰基1,4二氢吡啶配合物。该配合物显黄色,其吸光度与牛磺酸含量在一定范围内成正比,最大吸收波长为390～400nm。表1牛磺酸标准曲线数据实施例1步骤1：含牛磺酸清液的制备蛤蜊经清洗去壳后，取出蛤蜊肉。将取出的蛤蜊肉放入到组织捣碎机中匀浆，将经过匀浆的蛤蜊肉放到电子天平上称重并用3倍质量的水稀释后调节pH值至中性，将匀浆液放入60℃恒温培养箱里静置进行恒温提取，利用水循环抽滤机对匀浆液进行过滤，取滤液。步骤2：除蛋白除酸性蛋白：采用5％的盐酸将滤液的pH调至3.5，然后在4500r/min下离心20分钟，并收集上清液。除碱性蛋白：采用5％的氢氧化钠将已经去除酸性蛋白的上清液的pH调至10，在4500r/min下离心20分钟，收集上清液。步骤3：脱色向收集的上清液中加入适量的活性炭进行脱色，优选方案为每100mL加入2～3g，将过滤后的溶液pH用5％HCl调节至4.5，待用。步骤4：分离纯化吸取8.0mL收集的溶液注入732型强酸性阳离子树脂交换柱，并采用蒸馏水进行洗脱，洗脱速度在2mL/min,收集吸光度最高峰值0.55左右的部分流出液。步骤5：提取量的测定采用甲醛-乙酰丙酮法测定牛磺酸的提取量。取1mL流出液或其稀释液，加1mol/L醋酸钠溶液8mL，加入1mL甲醛-乙酰丙酮(V:V＝2:3)作为显色剂，配制10mL溶液，在100℃水浴中保温15分钟，冷却至室温，在400nm波长处测定吸光度，通过牛磺酸标准溶液吸收曲线(如图1所示)，确定牛磺酸的提取量。步骤6：检测结晶采用紫外分光光度法检测含有牛磺酸的组分，将其放到4℃冰箱中放置2h，得到牛磺酸粗品结晶。将粗品重新溶解于水，过滤后，再加入无水乙醇，放置于4℃重结晶，将固液进行分离，如此结晶，再反复重结晶，即可得到纯的牛磺酸晶体。单因素实验取4支洁净的干燥试管，于每支试管中放入洗脱后所获得的清液2mL，在测得的最适温度45摄氏度下将溶液调至pH5.5，分别提取4h、6h、12h后，用紫外分光光度计测其400nm的吸光值。表2考本文档来自技高网...

【技术保护点】
从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，其特征在于，包含下列步骤：S1利用蛤蜊制备含牛磺酸的清液；S2将所述清液除蛋白；S3将所述步骤S2的产品进行分离纯化。

【技术特征摘要】
1.从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，其特征在于，包含下列步骤：S1利用蛤蜊制备含牛磺酸的清液；S2将所述清液除蛋白；S3将所述步骤S2的产品进行分离纯化。2.根据权利要求1所述的从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，其特征在于，所述步骤S1包含下列步骤：S1.1将蛤蜊清洗去壳取出蛤蜊肉；S1.2将蛤蜊肉放入到组织捣碎机中匀浆；S1.3将匀浆后蛤蜊肉称重并用3倍质量的水稀释；S1.4调节pH值；S1.5放入恒温培养箱里进行水提取；S1.6将水提取产物进行过滤，取滤液。3.根据权利要求1所述的从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，其特征在于，所述步骤S2包含下列步骤：S2.1除酸性蛋白；S2.2除碱性蛋白。4.根据权利要求3所述的从蛤蜊中提取天然牛磺酸的方法，其特征在于，所述步骤S2.1除酸性蛋白采用盐酸将所述步骤S1产物的pH调至3.5，然后在4500r/min下离心20分钟，并收集上清液。5.根据权利要求3所述的从蛤蜊中提取天然牛磺酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：马金龙，于克春，刘璇，孙垚，严鑫，
申请(专利权)人：大连民族大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21