抗CD40抗体的沉默的Fc变体制造技术

本发明专利技术涉及抗CD40抗体的沉默的Fc变体和组合物，和使用所述抗体治疗病理性功能障碍的方法，例如自身免疫和炎性病症，和/或预防或降低移植时的移植物排斥风险。

【技术实现步骤摘要】
本申请为2011年11月14日提交的、专利技术名称为“抗CD40抗体的沉默的Fc变体”的PCT申请PCT/EP2011/070058的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2013年5月15日，申请号为201180054907.0。本专利技术涉及抗CD40抗体的沉默的恒定区片段(Fc)变体和组合物和所述抗体用于治疗病理性病症(例如自身免疫病和炎性病症)和/或用于预防或降低移植时的移植物排斥风险的用途的方法。虽然一些免疫抑制治疗可用于治疗自身免疫病，但是，在大部分患者群体中，仍然存在对更有效和更安全的药物的大量未满足的需求。例如，尽管已经报道了B细胞耗尽/抑制疗法如利妥昔单抗(Rituximab)和贝利木单抗(Belimumab)在类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、综合症和多发性硬化中的功效，但这些疗法仅在一部分患病个体中有效，并且利妥昔单抗还伴随有进行性多灶性脑白质病的风险。此外，通常有多种其他的白细胞类型参与这些自身免疫病的病理学，例如巨噬细胞、树突状细胞和T细胞，因此，靶向额外的细胞类型或抑制其功能的关键性免疫学途径的疗法干预具有益处。考虑到CD40-CD154在这些细胞类型的激活和功能中的多种免疫学相关作用，抗CD40抗体可能给予患上述自身免疫病的患者超过现有疗法目前所提供的疗法益处。此外，CD40-CD154相互作用在肠炎性病症(例如克罗恩病和溃疡性结肠炎)中的关键作用，以及CD40途径与多种罕见病症(例如自身免疫性血管炎、寻常型天疱疹和ITP)的病理学的机制关联，都突出了抗CD40抗体在这些适应征中的潜在价值。目前在实体器官移植后使用的现有免疫抑制物提供了优秀的短期功效。在5％–20％的接受者中，在新生期(de novo period)中观察到急性排斥(取决于器官、患者群体和方案)，而对于任何情况，在新生期内由于急性排斥而失去的移植物的比例都低于5％。目前，尚未满足的关键需求是患者对免疫抑制的耐受性和移植物的长期存活。在肾移植后，33％患者在5年内死亡和/或失去其移植物；移植接受者的平均死亡年龄是58岁。钙依赖磷酸酶抑制剂(CNI)仍然是绝大部分移植患者的主要免疫抑制疗法。尽管与CNI相关的肾毒性和心血管发病是慢性同种异体移植肾病和具有有功能的移植物的患者死亡的驱动因素之一，备选的原发性免疫抑制尚不能取代CNI。总而言之，长期的移植免疫抑制仍然存在改良的空间。经移植的肾脏的B细胞介导的免疫学破坏可导致低下的长期结果，并且医学界已逐渐认识到对靶向B细胞排斥的新活性剂的需求。Chir12.12是完全人源化的、非激动剂型抗CD40抗体(IgG1，κ)，其阻断CD154(也称为CD40配体；CD40L)介导的白细胞活化，并可以在体外介导人白细胞和B细胞淋巴瘤的抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)(参见WO2006/073443)。WO2005/044306还描述了抗CD40拮抗剂抗体，包括特别是用于治疗自身免疫病症和炎性病症的Chir12.12。此外，当在食蟹猕猴(Macaca fascicularis)(食蟹猴(Cynomolgus monkeys))中作为单一疗法给药时，Chir12.12有效的延迟了肾同种异体移植排斥[Li等人(2008)Transplantation；86(1):10-15]。然而，Chir12.12还可以在非人灵长类(NHP)中介导外周B细胞耗尽。预测具有沉默的ADCC活性的抗CD40 mAb相对于亲代抗CD40抗体具有改良的安全性谱，并且特别地更加适合非癌症适应征(例如自身免疫病)和用于移植情况。因此，本专利技术提供了Fc沉默的抗CD40单克隆抗体，所述抗体保留了亲代抗CD40抗体Chir12.12的非激动性、CD40L阻断特性。特别地，本专利技术提供了包含针对靶CD40多肽(SEQ ID NO:28)的抗体的抗原结合部分的分离的抗体或蛋白质，其特征在于所述抗体或蛋白质a.以10nM或更低的KD结合CD40多肽，和b.包含沉默的IgG Fc区。在一个实施方案中，所述抗体或蛋白质以50ng/ml或更低的IC50抑制CD40L诱导的信号传递。在另一个实施方案中，根据本专利技术的分离的抗体或蛋白质没有或具有低的关于CD40信号传递的激动剂活性。在另一个实施方案中，根据本专利技术的抗体或蛋白质包含选自SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19的氨基酸序列的沉默的IgG Fc区。在另一个实施方案中，本专利技术分离的抗体或蛋白质包含分别与Chir12.12的VH(SEQ ID NO:9)和Chir12.12抗体的VL(SEQ ID NO:10)具有至少60、70、80、90、95、96、97、98、99或100百分比序列同一性的重链(VH)和轻链(VL)可变区。根据本专利技术的抗体的具体实例是：-包含SEQ ID NO:11的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:12的轻链氨基酸序列的mAb1，-包含SEQ ID NO:13的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:14的轻链氨基酸序列的mAb2，或-包含SEQ ID NO:15的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:16的轻链氨基酸序列的mAb3。根据本专利技术的分离的抗体或蛋白质可用作药物。特别地，其适合用于治疗自身免疫病症、炎性病症和/或预防或降低移植中的移植物排斥风险。根据本专利技术的分离的抗体或蛋白质特别可用于治疗多发性硬化、系统性红斑狼疮、综合症、类风湿关节炎、移植排斥和移植物抗宿主疾病。本专利技术还涉及药物组合物，所述药物组合物包含与至少一种可药用的赋形剂、稀释剂或载剂组合的根据本专利技术的上述抗体或蛋白质。所述药物组合物还可以包含其他活性成分。本专利技术还涉及根据本专利技术的抗体或蛋白质的冻干物或液体制剂。本专利技术还涉及编码根据本专利技术的抗体或蛋白质的分离的核酸，以及包含选自SEQ ID NO:22至27的至少一种核酸的相应的克隆或表达载体。本专利技术还涉及包含一个或多个如上文定义的克隆或表达载体的宿主细胞。本专利技术还提供了用于生产本专利技术的抗体或蛋白质的方法，包括培养上文定义的宿主细胞，纯化和回收所述抗体或蛋白质。为了更便于理解本专利技术，首先定义一些术语。详细的说明书全文还提供了其他定义。术语“免疫应答”指例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由上述细胞或肝脏生产的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，所述作用导致选择性破坏、消灭或从人体中清除侵入的病原体、感染了病原体的细胞或组织、癌细胞或，在自身免疫病或病理性炎症的情况下，正常的人细胞或组织。“信号传导途径”或“信号传递活性”指一般由蛋白质-蛋白质相互作用(如生长因子与受体的结合)起始的生物化学的因果关系，导致信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分。一般而言，传递涉及在一系列导致信号传导的反应中的一种或多种蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特异性磷酸化。倒数第2个过程通常包括细胞核事件，导致基因表达的改变。除非另外提及，术语CD40指人CD40，例如SEQ ID NO:28中定义的。术语“抗体”在本文中包括完整的抗体和任何抗原结合片段(即，“抗原结合部分”)或其单链。天然存在的“抗体”是包含通过二硫键相互连接的至少两条重链(H)和两条轻本文档来自技高网...

【技术保护点】
针对靶CD40多肽的分离的抗体，特征在于所述抗体包含SEQ ID NO:13的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:14的轻链氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2010.11.15 US 61/413,5671.针对靶CD40多肽的分离的抗体，特征在于所述抗体包含SEQ ID NO:13的重链氨基酸序列和SEQ ID NO:14的轻链氨基酸序列。2.权利要求1的分离的抗体，其中所述靶CD40多肽由SEQ ID NO:28组成。3.权利要求1的分离的抗体，其中所述抗体或蛋白质以50ng/ml或更低的IC50抑制CD40L诱导的信号传递。4.权利要求1至3中任一项的分离的抗体，其中所述抗体没有或有很低的关于CD40信号传递的激动剂活性。5.根据权利要求1至3中任一项的分离的抗体在制备针对自身免疫病症和/或炎性病症的药物中的用途。6.根据权利要求1至3中任一项的分离的抗体在制备用于预防或降低移植中移植物排斥的风险的药物中的用途。7.根据权利要求4的用途，其中所述药物针对多发性硬化、...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·厄塞，J·拉什，K·文森特，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH