本发明专利技术涉及通过确定得自疑似患有结肠直肠癌的患者的生物学样品中白细胞弹性蛋白酶抑制剂肿瘤标记物的存在而体外诊断结肠直肠癌的方法。所述方法可用于结肠直肠癌的早期诊断、筛选、治疗随诊以及预后,以及用于结肠直肠癌的复发诊断。
【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2008年7月10日的第200880025227.4号专利技术名称为“体外诊断结肠直肠癌的白细胞弹性蛋白酶抑制剂测定方法”的中国专利申请的分案申请。本专利技术涉及癌学领域。更特别地,本专利技术提供了通过确定取自患者的生物学样品中白细胞弹性蛋白酶抑制剂(LEI)的存在而体外诊断人类患者中的结肠直肠癌的方法,所述方法可用于早期诊断、筛选、治疗随诊以及预后,还可用于结肠直肠癌的复发诊断。结肠直肠癌(CRC)是主要的公共健康问题。据估计1996年其在世界范围的新发病例为875 000例1。考虑到男女性别,其是最常在西方国家发生的癌症,其通常被分类为癌症所致死亡的前3个主要因素之一。考虑到所有阶段,5年存活率在60%范围内。只有早期诊断才能赋予治愈性治疗的希望。然而,目前还没有血清学筛选检验,也没有早期特异性诊断检验方法。目前在欧洲使用两种不同方法筛选结肠直肠癌:首先,使用临床异常性(paraclinical)检验,其包括检查粪便中是否存在血(Faecal Occult Blood Test-FOBT,例如以名称销售)。已经证实这个技术的临床实用性。当每2年对在50-74岁之间的个体使用该技术时,可以使结肠直肠癌导致的死亡率降低15-20%2。为此,一半以上的人群必须定期参与筛选,且必须对阳性检验事件进行结肠镜检查,任选随后进行适当治疗。然而,这种筛选技术具有如下一些不利之处:·这个检验的主要缺点是其特别是对于腺瘤(癌前异常增生(dysplastic)病变)的灵敏性较差,如果腺瘤较大,将导致1/10的病例发展为癌症。·这个检验也不是非常特异性的。粪便中出现血可以与非肿瘤病变相关:溃疡性结肠炎、痔疮、肛瘘等。在这种情况中,必须进行结肠镜检查,结肠镜检查的缺点在后文描述。·最后,检验难以解释;因此其必须在专业中心由有资格的能胜任的人员诠释。也已经描述了特异于人血红蛋白的免疫学检验(FecaHeme等)。与相比,它们大概有进步,但是基本上还存在相同问题。因此,由Enterix公司销售的InSureTM使得可以检测87%患有CRC的患者,以及47%具有癌前息肉的患者。这是一种检测粪便中人血红蛋白、特别是检测这个分子中的珠蛋白部分的检验方法。第二种筛选方法是在50岁以后对人系统进行结肠镜检查,这样在理论上可以降低由于结肠直肠癌所致死亡率。然而,对于使用内窥镜进行筛选的政策,健康个体对这种检查的可接受性太低而不能降低死亡率(已经建立这个筛选计划的欧洲国家结肠镜检查的顺从水平是大约2%)。结肠镜检查存在并非不显著的结肠穿孔和出血(0.1%)及死亡(1/10 000)的风险,而且对于公共卫生事业也是非常昂贵的。此外,结肠镜检查需要非常严格的预先结肠准备,这在很大程度上解释了顺从性不佳的原因。长久以来已经描述了可以通过免疫测定化验结肠直肠癌的肿瘤标记物。所述肿瘤标记物特别是癌胚抗原(CEA)和CA19-9。CEA用于随诊。由于其灵敏性和特异性不足而不可用于筛选或者早期诊断结肠直肠癌。这是因为该标记物由其它类型癌症及在良性病变中表达。无论如何,通过组合CEA与另一种肿瘤标记物如CA19-9或CA72-4可以增加灵敏性而不丧失其特异性。CA19-9的生理学改变的原因很罕见,但是其它良性病变(肝胆病症、胰腺病症)或者恶性病症可以导致CA19-9增高。因此,单独这个标记物对于诊断也无意义。然而,由于其血清浓度与肿瘤的大小和存在转移瘤相关,因此其也可以用于治疗随诊或者早期证实复发。另外,已经提议可商购的检验,如:由Ambrilia销售,其是一种快速且相对非侵入性CRC的筛选检验。检测患有结肠直肠病变个体的直肠粘液中的缩醛磷脂(是磷脂的一部分的复合脂质),而ColorectAlertMD检测直肠粘液中的一种复合糖,即T-抗原。检验包括将直肠粘液涂于检验条带上,阳性或阴性结果基于Schiff反应。Ambrilia已经研究了1787个个体,证实检测出54%的早期结肠直肠癌病例和49%所有阶段组合病例。COLARIS,由Myriad Genetics销售,是在血液中检测MLH1和MSH2基因突变以筛选遗传性非息肉性结肠癌(HNPCC综合征)。该检验的结果在3周内获得。Myriad使用目前可利用的最灵敏和最特异性的测序技术。该检验成本昂贵。由AMDL销售,是一种筛选各种类型癌症(肺癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等)的检验。因此其对于CRC不具有特异性。该检验的原理是基于双夹心ELISA技术(测定DR-70抗原)。通过酶反应(抗体与生物素或者链霉抗生物素蛋白结合)进行揭示。生色反应表示癌症的存在。本申请人令人惊奇地证实一种新的肿瘤标记物,其由结肠肿瘤释放至癌组织之外,且是这些肿瘤的特征,由此可以在远离肿瘤的生物学样品及在肿瘤自身中检测到。因此,本专利技术第一方面是体外诊断结肠直肠癌的方法,其通过确定取自疑似患有结肠直肠癌的患者的生物学样品、优选远离肿瘤的生物学样品中白细胞弹性蛋白酶抑制剂的存在而进行诊断。本专利技术还涉及这种方法在结肠直肠癌的早期诊断、筛选、治疗随诊及预后中以及在结肠直肠癌的复发诊断中的应用。本专利技术的方法因此可以通过简便的检验方法特异性且早期诊断结肠直肠癌,所述检验方法包括检查取自患者的生物学样品、优选远离潜在肿瘤的生物学样品中白细胞弹性蛋白酶抑制剂的存在。这是因为本申请人出乎意料地揭示了结肠肿瘤不仅分泌白细胞弹性蛋白酶抑制剂,而且特异性释放其至癌组织之外,这在后文详细描述,且其在本专利技术方法的生物学样品中的浓度与在健康人体中确定的参考值相比增加。在远离或非远离肿瘤的生物学样品中确定白细胞弹性蛋白酶抑制剂的存在使得可以推断查找的病变。本专利技术方法的一个优势是可以使用远离潜在肿瘤的样品作为诊断样品,从而可以进行简便且非侵入性诊断,而组织学诊断需要进行侵入性活组织检查。事实上,例如对组织切片进行的组织标记物的研究(免疫组织化学)也许具有预后意义,但是对于筛选或者诊断结肠直肠癌无意义。白细胞弹性蛋白酶抑制剂肿瘤标记物(Swiss Prot No.P30740,也称作LEI、Serpin B1、单核细胞/中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂、M/NEI或EI)在1992年测序3。LEI特异性抑制具有弹性蛋白酶型或者糜蛋白酶型性质的蛋白酶,其通过在SDS作用下形成不可解离的复合物而起抑制作用4。因此LEI抑制由中性粒细胞产生的三种主要的蛋白酶:白细胞弹性蛋白酶、蛋白酶-3和组织蛋白酶G。这些蛋白酶能通过蛋白酶解细胞外或吞噬的底物而使得免疫系统防御生物体。然而,当这些蛋白酶过量时,其可造成炎症反应。因此,LEI在调节和限制细胞蛋白酶诱导的炎症作用中起作用。不过,目前还没有报道过LEI有可能用作癌症的标记物,特别是结肠直肠癌的标记物,以及可在远离肿瘤的样品中对其进行分析。短语“确定肿瘤标记物的存在”是指确定所述蛋白质或者其信使RNA的存在,或者检测其基因上编码或非编码序列中的修饰如甲基化。短语“由结肠肿瘤释放”是指无论机制如何由肿瘤细胞自身或者由邻近的非肿瘤细胞在损伤后的主动或被动分泌或者释放的肿瘤标记物,或者是由肿瘤进展引起的细胞表型的修饰。短语“对其进行本专利技术方法的生物学样品”是指可能含有感兴趣的肿瘤标记物的任何生物学样品。可以提及的非远本文档来自技高网...
【技术保护点】
通过确定得自疑似患有结肠直肠癌的患者的生物学样品中白细胞弹性蛋白酶抑制剂标记物的存在而体外诊断结肠直肠癌的方法。
【技术特征摘要】
2007.07.19 FR 07052021.通过确定得自疑似患有结肠直肠癌的患者的生物学样品中白细胞弹性蛋白酶抑制剂标记物的存在而体外诊断结肠直肠癌的方法。2.权利要求1的方法,特征在于所述生物学样品是远离肿瘤的样品。3.权利要求1或2的方法,特征在于其还包括确定选自如下标记物的至少一种其它肿瘤标记物的存在:埃兹蛋白、酰化氨基酸水解酶1、肝脂肪酸结合蛋白、肠脂肪酸结合蛋白、载脂蛋白AI、载脂蛋白AII和I-丝束蛋白。4.权利要求1-3任一项的方法,特征在于其还包括确定选自如下标记物的至少一种其它肿瘤标记物的存在:β2-微球蛋白、蛋白酶体20S、半乳凝素-3、L-乳酸脱氢酶B链、钙网蛋白、再生胰岛衍生蛋...
【专利技术属性】
技术研发人员:C·博利厄,JP·沙里耶,G·肖凯凯斯狄拉维斯基,O·梅让勒图尔纳,D·罗兰,
申请(专利权)人:生物梅里埃公司,
类型:发明
国别省市:法国;FR
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