从油茶叶中提取根皮甙的方法技术

本发明专利技术提供了一种从油茶叶中提取根皮甙的方法。以乙醇溶液为溶剂，对油茶叶进行浸提，得到粗提液；以D101大孔吸附树脂为填料分离，再经硅胶层析分离，最后经DAC色谱柱分离、硅胶层析分离、C18色谱柱分离，即可获得仅含根皮甙的混合物。本发明专利技术首次从山茶属植物中成功提取出了根皮甙，并且该提取方法具有收率高、产品纯度高等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物提取
，尤其是涉及一种从油茶叶中提取根皮甙的方法。
技术介绍
油茶叶为山茶科植物油茶的叶，其富含多种药效成分，尤其是黄酮类化合物、苷类化合物。黄酮类化合物具有多种生物活性，例如心血管系统活性、抗菌及抗病毒活性、抗肿瘤活性、抗氧化自由基活性、镇痛活性、保肝活性等。苷类化合物具有祛痰止咳、抗肿瘤、抗真菌、抑菌及降胆固醇等生物活性。如何从油茶叶中提取出根皮甙等生物活性成分，对深度开发油茶作物极其重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供从油茶叶中提取根皮甙的方法，所述的提取方法首次从油茶叶中成功提取出了根皮甙，并且该提取方法具有收率高、产品纯度高等优点。为解决上述技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：从油茶叶中提取根皮甙的方法，包括以下步骤：A：以乙醇溶液为溶剂，对油茶叶进行浸提，得到粗提液；B：以D101大孔吸附树脂为填料，依次用水、15-25wt％乙醇溶液、75-85wt％乙醇溶液对所述粗提液进行恒定洗脱；C：将所述75-85wt％乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行硅胶层析分离，用10∶1～1∶3的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第一顺序组分；D：采用DAC色谱柱，用55-65％甲醇-水为流动相对所述第一顺序组分进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第二顺序组分；E：对所述第二顺序组分进行硅胶层析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第三顺序组分；F：采用C18色谱柱，以15-25％乙腈-水对所述第三顺序组分进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段。上述提取方法由粗至精的方式从油茶叶中逐步分离出根皮甙的纯净物。以干油茶叶为基准，本专利技术对根皮甙的提取率在10.1mg/kg以上，并且前后产品的纯度均在90％以上。本专利技术所述的流动相(即洗脱所用的液体)的比例均指体积比，流动相中的“％”指非水物质所占的体积百分数，乙醇溶液均指乙醇的水溶液，例如，15-25％乙醇溶液指乙醇体积百分比为15-25％水溶液。55-65％甲醇-水指甲醇体积百分比为55-65％的水溶液。本专利技术所述的恒定洗脱是指流动相的组成比例固定。本专利技术所述的梯度洗脱是指在洗脱过程中不断改变流动相的浓度配比，但起始浓度和终点浓度是固定的，例如步骤C中的梯度洗脱是指：二氯甲烷-甲醇按照起始浓度为9-11∶1、洗脱终点浓度为1∶2.5-3.5的方式进行梯度洗脱。本专利技术所述的DAC色谱柱指轴向动态压缩工业色谱柱。本专利技术所述的提取方法适用于不同种属的油茶叶，尤其适合普通油茶 (Camellia oleifera Abel)，其提取率高。本专利技术所述的提取方法的各个步骤可以进一步改进，例如：步骤A中，浸提所用的溶剂、料液比、温度对粗提液中的杂质含量以及有效成分的提取率都有影响。溶剂优选用40-60％的乙醇-水溶液，更优选50％的乙醇-水溶液。料液比优选为1：2.5-3.5(1g固体：2.5-3.5mL溶剂)，更优选1：2.5-3。浸提温度优选为70-80℃，并且以回流浸提为最佳。采用以上浸提条件能降低粗提液中的杂质含量，提高根皮甙的提取率。另外，为了降低后期分离的难度，在浸提之后可以浓缩干燥粗提液，除去乙醇。步骤B中，每个梯度洗脱所用流动相的体积优选为柱体积的3.5-4.5倍，更优选为4-4.5倍，保证待提取成分能够被充分洗脱出来。所用流动相的浓度优选水、15-20％乙醇溶液、75-80％乙醇溶液。步骤C中，硅胶层析分离为分离手段，色谱分析为评价分离结果的手段，两者互相配合，筛选出含有根皮甙目标提取物的洗脱液。筛选通常为粗筛选，一般是经色谱分析，先将色谱图相似的洗脱液合并，然后与目标提取物的标准品色谱图对比，从中筛选出含有目标提取物的洗脱液，将其合并。当然，也可以不经过合并，直接与目标提取物的标准品色谱图对比来选出有用的洗脱液，这种做法工作量较大，但是结果更精确。所述步骤C中，所用的硅胶的粒径优选为200-300目，所述梯度洗脱优选为：用9-10∶1至1∶2.5-3梯度的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，采用以上进一步优化的条件，可以提高分离度和柱效。在所述步骤C中，所述硅胶层析分离之前还包括：将所述75-85％乙醇溶液洗脱得到的洗脱液浓缩干燥，可以避免乙醇对后续硅胶层析的干扰。另外，所述步骤C中的色谱分析可以是薄层色谱(TLC)、高效液相色谱等任意能用于定性的方法，其中后者更准确。另外，在进行硅胶层析时，为了保证待分离物均匀分散在硅胶之中， 优选将二氯甲烷-甲醇稀释待分离物，同时拌入硅胶，之后再水浴蒸干。经过以上处理后的物质再装入硅胶柱中进行层析。同样，所述步骤D中，经色谱分析可以为：高效液相色谱分析，和/或薄层分析等。所述步骤D中，流动相的浓度优选55-60％甲醇-水时，具有更高的分离度。所述步骤E中，所用的硅胶的粒径优选为200-300目，所述二氯甲烷-甲醇-水的比例优选为90-100:10-12:1，以提高分离度和柱效。所采用的色谱分析可以为高效液相色谱分析、薄层分析等。所述步骤F中，流动相的浓度优选15-20％乙腈-水。在该步骤中即可获得根皮甙的纯净物，只要在色谱分析后，将仅含有根皮甙的流份段合并即可。此处的“仅含”是指根皮甙的含量只要达到提取物的一般纯度即可，在此基础上，可根据生产需求选择进一步提纯。与现有技术相比，本专利技术能达到以下技术效果：(1)首次从油茶叶中提取了出高纯度的根皮甙；(2)由粗到精的提取方式利于提取方法的规模化推广；(3)提取收率高。 附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的80％乙醇洗脱后收集的样品的液相色谱图；图2为实施例1得到的最终流份的1H-NMR谱图；图3为实施例1得到的最终流份的13C-NMR谱图。具体实施方式下面将结合附图和具体实施方式对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，但是本领域技术人员将会理解，下列所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。本专利技术中所述的流动相的比例均指体积比。实施例1第一步：将自然阴干的油茶干燥叶粉碎过60目筛，取20kg分两批用50％乙醇按料液比1∶3在70-80℃加热回流，重复提取2次，每次提取2h，合并所得上清液，过滤获得上清液，减压浓缩至无醇味，得到原体积约一半的粗提液样品，备用。第二步：用工业酒精处理约10L的D101型大孔吸附树脂，用水洗到无醇味，将第一步得到的提取液分两次上样，依次用水、20％乙醇、80％乙醇洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
从油茶叶中提取根皮甙的方法，其特征在于，包括以下步骤：A：以乙醇溶液为溶剂，对油茶叶进行浸提，得到粗提液；B：以D101大孔吸附树脂为填料，依次用水、15‑25wt％乙醇溶液、75‑85wt％乙醇溶液对所述粗提液进行恒定洗脱；C：将所述75‑85wt％乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行硅胶层析分离，用10∶1～1∶3的二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第一顺序组分；D：采用DAC色谱柱，用55‑65％甲醇‑水为流动相对所述第一顺序组分进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第二顺序组分；E：对所述第二顺序组分进行硅胶层析，用90‑110:10‑14:1的二氯甲烷‑甲醇‑水进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第三顺序组分；F：采用C18色谱柱，以15‑25％乙腈‑水对所述第三顺序组分进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段。

【技术特征摘要】
1.从油茶叶中提取根皮甙的方法，其特征在于，包括以下步骤：A：以乙醇溶液为溶剂，对油茶叶进行浸提，得到粗提液；B：以D101大孔吸附树脂为填料，依次用水、15-25wt％乙醇溶液、75-85wt％乙醇溶液对所述粗提液进行恒定洗脱；C：将所述75-85wt％乙醇溶液洗脱得到的洗脱液进行硅胶层析分离，用10∶1～1∶3的二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第一顺序组分；D：采用DAC色谱柱，用55-65％甲醇-水为流动相对所述第一顺序组分进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第二顺序组分；E：对所述第二顺序组分进行硅胶层析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段，命名为第三顺序组分；F：采用C18色谱柱，以15-25％乙腈-水对所述第三顺序组分进行恒定洗脱，分段收集洗脱液，经色谱分析，合并含有根皮甙的流份段。2.根据权利要求1所述的从油茶叶中提取根皮甙的方法，其特征在于，所述步骤A中，浸提的方法为：料液比为1：3，在70-80℃下回流提取，乙醇溶液优选为40-60％的乙醇-水溶液。3.根据权利要求1所述的从油茶叶中提取根皮甙...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹清明，王元清，郑双，兰芳，钟海雁，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43