一种β-肾上腺素受体激动剂的检测试纸及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种β‑肾上腺素受体激动剂的检测试纸及其制备方法，具体涉及一种β‑肾上腺素受体激动剂的检测试纸，其包括底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向，所述底板上依次组装有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述胶体金垫上含有胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上进一步形成有检测线和对照线，所述检测线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的CL‑BSA划膜制成，所述对照线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的羊抗鼠抗体划膜制成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检测方法，具体涉及一种β-肾上腺素受体激动剂的制备方法。
技术介绍
“瘦肉精”泛指一类具有相似结构的β-肾上腺素受体激动剂(简称β-激动剂，β-Adrenergic agonists)化合物。由于其能够调节支气管扩张和平滑肌松弛，在临床上常被用做平喘药物，治疗呼吸系统疾病。当摄入量较大时对心血管系统和神经系统具有刺激作用，引起心悸、心慌、恶心、呕吐、肌肉颤抖等临床症状。摄入量过大，还会危及生命。自20世纪80年代早期，美国Cyanamid公司的实验证明饲喂β-激动剂—盐酸克伦特罗能够调节动物的生长。在肉用动物生产中，当其应用剂量达治疗量的5～10倍时具有能量重分配(repartitioning)作用，能促进肌肉发育和脂肪分解，提高胴体瘦肉比率，促进动物生长，降低饲养成本。但此类物质会在动物组织中残留，尤以肝脏等内脏器官残留较高，当人们食用了含“瘦肉精”残留的动物内脏和肉品后，常造成急性或慢性食肉中毒，危害消费者的健康安全。到目前为止没有一个国家批准β-激动剂类药物用于动物生产之中，但长期以来一直存在着非法使用，并造成严重的食物中毒事件。因此，在肉用动物中应用“瘦肉精”一直是人们关注的焦点问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术一个方面提供了一种β-肾上腺素受体激动剂的检测试纸，其包括底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向，所述底板上依次组装有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述胶体金垫上含有胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上进一步形成有检测线和对照线，所述检测线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的CL-BSA划膜制成，所述对照线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的羊抗鼠抗体划膜制成。其中，所述胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体通过以下方法制得：取100单位体积的双蒸水煮沸然后加入1单位体积的1％氯金酸溶液，继续煮沸1-10min，然后加入3单位体积的1％的柠檬酸三钠，搅拌至液体颜色由灰色变成黑色再变成紫色，再煮沸至液体颜色变为酒红色，再加双蒸水至100单位体积，获得胶体金溶液；优选地，所述胶体金溶液在520nm和535nm处的吸光值为
0.8-1.0；调节胶体金溶液的pH至8.2；在胶体金溶液中加入盐酸克仑特罗单克隆抗体至盐酸克仑特罗单克隆抗体的浓度为4-8μg/mL(6μg/mL)，混匀后加入10％PEG20000至PEG20000的浓度为1％，获得纯化前的胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体；将胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体以2000r/min，4℃离心20min，弃去沉淀；将上一步所得上清以10000r/min，4℃离心30min，弃去上清；用0.05mol/L的TBS(内含1％BSA，0.05％NaN3)缓冲液溶解沉淀至纯化前的原体积，重复前两步的离心2～3次，将沉淀溶于1/10TBS(内含1％BSA,0.05％NaN3)中至纯化前原体积，4℃保存备用，获得纯化后的胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体。其中，所述胶体金垫是经过是BSA、SDS和Tween-20处理过的，优选地，所述胶体金垫通过如下方法制得：配制胶体金垫处理液：用pH7.4的PBS加入1％的BSA、0.5％的SDS、1％的Tween-20混匀后过滤；把玻璃纤维膜放置于胶体金处理液中浸泡30min，37℃烘干；将胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体以5μL/cm的喷量喷涂于经处理液处理过的玻璃纤维素膜上，烘干；其中，所述样品垫是经过是BSA、SDS和Tween-20处理过的，优选地，所述样品垫通过如下方法制得：配制样品垫处理液：用pH7.4的PBS加入1％的BSA、0.5％的SDS、1％的Tween-20混匀后过滤；把样品垫放置于胶体金处理液中浸泡30min，37℃烘干。其中，设置检测线和对照线的硝酸纤维素膜是将CL-BSA稀释为1mg/mL，羊抗鼠二抗稀释为2mg/mL，并分别以1μL/cm的剂量在硝酸纤维素膜上进行划膜，划膜后烘干。其中，硝酸纤维素膜选自Millipore M-135和玻璃纤维膜选自SB-08。本专利技术的另一个方面提供了前述的检测试纸的制备方法，其包括如下步骤：1)制备胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体：1-1)取100单位体积的双蒸水煮沸然后加入1单位体积的1％氯金酸溶液，继续煮沸1-10min，然后加入3单位体积的1％的柠檬酸三钠，搅拌至液体颜色由灰色变成黑色再变成紫色，再煮沸至液体颜色变为酒红色，再加双蒸水至100单位体积，获得胶体金溶液；优选地，所述胶体金溶液在520nm和535nm处的吸光值为0.8-1.0；1-2)调节胶体金溶液的pH至8.2；在胶体金溶液中加入盐酸克仑特罗单克隆抗体至盐酸克仑特罗单克隆抗体的浓度为4-8μg/mL(6μg/mL)，混匀后加入10％PEG20000至PEG20000的浓度为1％，获得纯化前的胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体；1-3)将胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体以2000r/min，4℃离心20min，弃去沉淀；1-4)将上一步所得上清以10000r/min，4℃离心30min，弃去上清；1-5)用0.05mol/L的TBS(内含1％BSA，0.05％NaN3)缓冲液溶解沉淀至纯化前的原体积，重复前两步的离心2～3次，将沉淀溶于1/10TBS(内含1％BSA,0.05％NaN3)中至纯化前原体积，4℃保存备用，获得纯化后的胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体；2)制备胶体金垫：2-1)配制胶体金垫处理液：用pH7.4的PBS加入1％的BSA、0.5％的SDS、1％的Tween-20混匀后过滤；2-2)把玻璃纤维膜放置于胶体金处理液中浸泡30min，37℃烘干；2-3)将胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体以5μL/cm的喷量喷涂于经处理液处理过的玻璃纤维素膜上，烘干；3)制备样品垫：3-1)配制样品垫处理液：用pH7.4的PBS加入1％的BSA、0.5％的SDS、1％的Tween-20混匀后过滤；3-2)把样品垫放置于胶体金处理液中浸泡30min，37℃烘干；4)制备设置检测线和对照线的硝酸纤维素膜：4-1)将CL-BSA稀释为1mg/mL，羊抗鼠二抗稀释为2mg/mL，并分别以1μL/cm的剂量在硝酸纤维素膜上划膜，划膜后烘干；5)组装：依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水垫粘贴在底板上即得。其中，CL-BAS是通过重氮化法方法获得，具体为：称取CL于反应瓶中，加入盐酸(1mol/L)和双蒸水搅拌溶解，在4℃条件下向上述溶液滴加0.2mol/L的亚硝酸钠溶液，用碘化钾试纸测定至紫红色为止，4℃低速搅拌1h，即为A液；称取BSA，充分溶解于碳酸盐缓冲液(p H 9.0)，即为B液；把A液缓慢滴入B液，4℃反应过夜；用磷酸盐缓冲液透析，取上清为免疫抗原CL-BSA。本专利技术的另一个方面提供了前述的检测试纸在检测沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸克伦特罗、西马特罗、氯丙那林、妥布特罗、喷布特罗、硫酸特布他林及其类似物的应用。附图说明图1.CL金标抗体最适蛋白量测定，1-6抗体浓度分别为1，2，4，5，8，10μg/mL，另设空白对照。图2.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种β‑肾上腺素受体激动剂的检测试纸，其包括底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向，所述底板上依次组装有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述胶体金垫上含有胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上进一步形成有检测线和对照线，所述检测线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的CL‑BSA划膜制成，所述对照线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的羊抗鼠抗体划膜制成。

【技术特征摘要】
1.一种β-肾上腺素受体激动剂的检测试纸，其包括底板，所述底板具有第一端和第二端，并且沿所述第一端向第二端的方向，所述底板上依次组装有样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述胶体金垫上含有胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上进一步形成有检测线和对照线，所述检测线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的CL-BSA划膜制成，所述对照线由能与盐酸克仑特罗单克隆抗体结合的羊抗鼠抗体划膜制成。2.根据权利要求1所述的检测试纸，其中，所述胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体通过以下方法制得：取100单位体积的双蒸水煮沸然后加入1单位体积的1％氯金酸溶液，继续煮沸1-10min，然后加入3单位体积的1％的柠檬酸三钠，搅拌至液体颜色由灰色变成黑色再变成紫色，再煮沸至液体颜色变为酒红色，再加双蒸水至100单位体积，获得胶体金溶液；优选地，所述胶体金溶液在520nm和535nm处的吸光值为0.8-1.0；调节胶体金溶液的pH至8.2；在胶体金溶液中加入盐酸克仑特罗单克隆抗体至盐酸克仑特罗单克隆抗体的浓度为4-8μg/mL(6μg/mL)，混匀后加入10％PEG20000至PEG20000的浓度为1％，获得纯化前的胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体；将胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体以2000r/min，4℃离心20min，弃去沉淀；将上一步所得上清以10000r/min，4℃离心30min，弃去上清；用0.05mol/L的TBS(内含1％BSA，0.05％NaN3)缓冲液溶解沉淀至纯化前的原体积，重复前两步的离心2～3次，将沉淀溶于1/10TBS(内含1％BSA,0.05％NaN3)中至纯化前原体积，4℃保存备用，获得纯化后的胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体。3.根据权利要求1-2任一项所述的检测试纸，其中，所述胶体金垫是经过是BSA、SDS和Tween-20处理过的，优选地，所述胶体金垫通过如下方法制得：配制胶体金垫处理液：用pH7.4的PBS加入1％的BSA、0.5％的SDS、1％的Tween-20混匀后过滤；把玻璃纤维膜放置于胶体金处理液中浸泡30min，37℃烘干；将胶体金标记的盐酸克仑特罗单克隆抗体以5μL/cm的喷量喷涂于经处理液
\t处理过的玻璃纤维素膜上，烘干；4.根据权利要求1-3任一项所述的检测试纸，其中，所述样品垫是经过是BSA、SDS和Tween-20处理过的，优选地，所述样品垫通过如下方法制得：配制样品垫处理液：用pH7.4的PBS加入1％的BSA、0.5％的SDS、1％的Tween-20混匀后过滤；把样品垫放置于胶体金处理液中浸泡30min，37℃烘干。5.根据权利要求1-4任一项所述的检测试纸，其中，设置检测线和对照线的硝酸纤维素...

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊，黄保华，时建立，彭喆，朱晓琳，王金宝，徐绍建，吴晓燕，张玲玲，郑书轩，王莉莉，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37