用于评估妊娠糖尿病的方法和试剂技术

本发明专利技术涉及在妊娠糖尿病和/或相关障碍和/或病症的评估中用于确定糖化CD59的水平的测定、诊断、试剂盒和测定组分。一些试剂盒包括能够结合CD59上的捕获表位的捕获抗体，其中所述捕获表位可以缺乏赖氨酸残基41号(K41)。试剂盒还可以包括能够结合CD59上的检测表位的检测抗体。此类检测表位可以包括糖化K41。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】政府支持本专利技术在政府支持下在由美国国立卫生研究院授予的批准号DK095429-01下完成，名称为“作为妊娠糖尿病的新颖生物标志物的糖化CD59”。美国政府在本专利技术中可以具有某些权力。专利技术背景糖尿病表征为升高的血糖水平。血糖水平的持续升高可通过称为糖化的过程影响蛋白质。糖化是葡萄糖与蛋白质的非酶促附接，并且被认为是引起糖尿病受试者组织损伤的主要病理生理学机制。糖化涉及葡萄糖和/或其他还原糖与蛋白中的氨基基团的反应，导致席夫碱或醛亚胺的形成。这种不稳定的加合物可以通过阿马多利(Amadori)重排发生互变异构现象生成更稳定的酮胺。已经在糖尿病受试者中鉴定了不同的糖化蛋白，这些不同的糖化蛋白包括白蛋白、血红蛋白以及其他。取决于所影响的一个或多个氨基基团的位置，糖化蛋白的功能可以是受损的。例如，血红蛋白的β-链的氨基-末端糖化产生了糖化的血红蛋白(HbA1c)，其中对2,3-二磷酸甘油酸的响应性降低并且氧亲和力增加。凝血系统(抗凝血酶III)的主要凝血酶抑制剂的糖化降低了其针对肝素的亲和力，并且已经假定促成与糖尿病有关的血液高凝状态。某些蛋白的蛋白“糖化”程度的测量可以是有价值的临床工具，用以提供比短期指标(如直接测量血糖水平)更稳定的血糖控制指标，最终有助于改进治疗的功效。诸位专利技术人之前已经显示，CD59的K41糖化与异常血糖水平相关，并且在K41处的糖化干扰CD59的正常活性(美国专利6,835,545；美国专利7,049,082；和美国专利7,439,330；这些专利中的每个的全部内容通过引用结合在此)。然而，针对改进的检测和诊断糖尿病病症的方法仍然存在需要。具体而言，某些患者群体可从此类改进的方法中受益。一种此类患者群体包括孕妇，这些孕妇处于发展妊娠糖尿病的风险中。专利技术概述在一些实施例中，本专利技术提供了用于确定受试者样品中GCD59浓度的试剂盒。此类受试者样品可以从妊娠的受试者获得。试剂盒可任选地包括一种或多种内部对照品。一些试剂盒包括能够与CD59上的捕获表位结合的捕获抗体，其中所述捕获表位可缺失赖氨酸残基41号(K41)。试剂盒还可包括能够与CD59上的检测表位结合的检测抗体。此类检测表位可包括糖化K41。本专利技术的试剂盒还可以包括蛋白标准品。在一些情况下，试剂盒可以包括包装和其使用说明。在一些实施例中，捕获表位可以包括与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％一致性的氨基酸序列。在一些情况下，捕获表位可以包括与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少85％一致性的氨基酸序列。可以使用捕获抗体肽抗原生产在此披露的捕获抗体，该捕获抗体肽抗原包括与SEQ ID NO:2的氨基酸序列的至少70％一致性。可以使用捕获抗体肽抗原生产其他捕获抗体，该捕获抗体肽抗原包括与SEQ ID NO:4的氨基酸序列的至少85％一致性。可以使用捕获抗体肽抗原生产另外的捕获抗体，该捕获抗体肽抗原包括选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:3-6组成。捕获抗体肽抗原可以包括一个或多个非天然氨基酸。此类捕获抗体肽抗原可以包括SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列。在一些情况下，捕获抗体肽抗原可以是环状的。在一些实施例中，检测表位可以包括糖化K41，该糖化K41包括选自下组的化学结构，该组由下文所呈现的结构I-VII组成。检测表位可以包括与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少70％一致性的氨基酸序列。可以使用检测抗体肽抗原生产检测抗体，该检测抗体肽抗原包括选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:9-11组成。本专利技术的蛋白标准品可以包括替代化合物，所述替代化合物包括：捕获结构域，其中所述捕获结构域与所述捕获抗体结合；以及检测结构域，其中所述检测结构域与所述检测抗体结合。替代化合物的捕获结构域可以包括选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:2-8。替代化合物的检测结构域可以包括选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:9-11。检测结构域可以进一步包括糖化的赖氨酸残基。此类糖化的赖氨酸可以包括选自下组的化学结构，该组由下文所呈现的结构I-VII组成。替代化合物可以包括由接头连接的检测结构域和捕获结构域。此类接头可以包括聚乙二醇。接头可以包括根据下文多呈现的结构VIII的结构。在一些实施例中，本专利技术的试剂盒可以包括用于还原受试者样品的一种或多种还原剂。此类还原剂可以包括硼氢化钠。在一些情况下，硼氢化钠可以作为还原剂溶液的部分提供。此类溶液可以包括水和/或一种或多种有机溶剂。在一些实施例中，有机溶剂可以选自：三乙二醇二甲醚、四乙二醇二甲醚和2-甲氧基乙醚。硼氢化钠可以按从约0.1M至约10M的浓度存在于还原剂溶液中。本专利技术的抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。单克隆抗体可以源自小鼠或兔细胞。抗体还可以包括一种或多种可检测标记。可以将二级检测抗体连接到辣根过氧化物酶(HRP)上。包括此类抗体的试剂盒可以包括用于比色定量的HRP底物。本专利技术的方法可以包括用于确定来自妊娠受试者的一种或多种样品中的GCD59浓度的方法，该方法包括在一个或多个妊娠窗期间从妊娠受试者获得一种或多种样品，并且使用在此描述的试剂盒确定GCD59的浓度。根据此类方法的样品可以包括选自下组的体液样品，该组由以下各项组成：血液、尿、粘液、羊水和唾液。一些样品可以包括至少一种血液样品和一种或多种其他体液样品的组合。根据一些方法，可以使用单一血液样品。根据一些方法，妊娠窗可以包括妊娠的从约20至约36周。在一些情况下，可以在葡萄糖激发后取样。在一些实施例中，本专利技术提供了诊断受试者中妊娠糖尿病(GDM)的方法，所述方法包括在一个或多个妊娠窗期间从受试者获得一种或多种样品，使用试剂盒确定此类样品中GCD59的浓度，并且如果GCD59的浓度大于预定的截止值(cut-off value)则提供GDM的诊断。在一些情况下，此类方法可以在无需消耗限制和/或需求的情况下进行。根据此类方法的样品可以包括选自下组的体液样品，该组由以下各项组成：血液、尿、粘液、羊水和唾液。一些样品可以包括至少一种血液样品和一种或多种其他体液样品的组合。根据一些方法，可以使用单一血液样品。根据一些方法，妊娠窗可以包括妊娠的从约20至约36周。在一些情况下，GDM的诊断可以包括选自下组的GDM亚类的诊断，该组由以下各项组成：A1类、A2类、B类、C类、D类、F类、R类、H类和T类。根据本专利技术的一些方法，受试者中的GDM诊断可以通过如下来进行：在一个或多个妊娠窗期间从受试者获得一种或多种样品，使用试剂盒来确定GCD59的浓度，将GCD59的浓度与该受试者的一种或多种其他分析的结果进行比较，并且基于该比较，提供GDM的诊断。其他分析可以包括选自下组的一种或多种生物标志物的水平，该组由以下各项组成：胰岛素、葡萄糖、和除GCD59外的糖化蛋白。其中此类生物标志物包括血糖水平，此类水平可以包括禁食血浆葡萄糖水平或随机血浆葡萄糖水平。另外的分析可以包括选自下组的测试，该组由以下各项组成：葡萄糖激发测试、口服葡萄糖耐量测试(OGTT)、空腹血糖测试、随机血糖测试、食后2小时血糖测试、血红蛋白A1c(HbA1c)测试、果糖胺测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用来确定受试者样品中GCD59浓度的试剂盒，所述受试者样品获得自妊娠受试者，其中所述试剂盒可任选地包括一种或多种内部对照品，并且其中所述试剂盒进一步包括：捕获抗体，该捕获抗体能够与在CD59上的捕获表位结合，其中所述捕获表位并不包括赖氨酸残基41号(K41)，检测抗体，该检测抗体能够与在CD59上的检测表位结合，所述检测表位包括糖化K41，和蛋白标准品。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.03 US 61/911,306;2014.02.28 US 61/945,860;1.一种用来确定受试者样品中GCD59浓度的试剂盒，所述受试者样品获得自妊娠受试者，其中所述试剂盒可任选地包括一种或多种内部对照品，并且其中所述试剂盒进一步包括：捕获抗体，该捕获抗体能够与在CD59上的捕获表位结合，其中所述捕获表位并不包括赖氨酸残基41号(K41)，检测抗体，该检测抗体能够与在CD59上的检测表位结合，所述检测表位包括糖化K41，和蛋白标准品。2.如权利要求1所述的试剂盒，进一步包括还原剂。3.如权利要求2所述的试剂盒，其中所述还原剂是硼氢化钠。4.如权利要求2所述的试剂盒，其中所述还原剂是在有机溶剂中。5.如权利要求4所述的试剂盒，其中所述有机溶剂包括三乙二醇二甲醚、四乙二醇二甲醚、或2-甲氧基乙醚。6.如权利要求5所述的试剂盒，其中所述有机溶剂包括2-甲氧基乙醚。7.如权利要求4-6中任一项所述的试剂盒，其中所述还原剂是硼氢化钠。8.如权利要求7所述的试剂盒，其中所述硼氢化钠以从约0.1M至约10M的浓度存在于所述有机溶剂中。9.如权利要求8所述的试剂盒，其中所述硼氢化钠以0.5M的浓度存在于2-甲氧基乙醚中。10.如权利要求1-9中任一项所述的试剂盒，进一步包括包装及其使用说明。11.如权利要求1-10中任一项所述的试剂盒，其中所述捕获表位包括与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少70％一致性的氨基酸序列。12.如权利要求11所述的试剂盒，其中所述捕获表位包括与SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少85％一致性的氨基酸序列。13.如权利要求12所述的试剂盒，其中使用捕获抗体肽抗原产生所述捕获抗体，该捕获抗体肽抗原包括与SEQ ID NO:2的氨基酸序列的至少70％一致性。14.如权利要求13所述的试剂盒，其中使用捕获抗体肽抗原产生所述捕获抗体，该捕获抗体肽抗原包括与SEQ ID NO:4的氨基酸序列的至少85％一致性。15.如权利要求13所述的试剂盒，其中使用捕获抗体肽抗原产生所述捕获抗体，该捕获抗体肽抗原包括选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:3-6组成。16.如权利要求15所述的试剂盒，其中所述捕获抗体肽抗原包括一种或多种非天然氨基酸。17.如权利要求16所述的试剂盒，其中所述捕获抗体肽抗原包括SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8的氨基酸序列。18.如权利要求15-17中任一项所述的试剂盒，其中所述捕获抗体肽抗原是环状的。19.如权利要求18所述的试剂盒，其中所述包括糖化K41的检测表位包括选自下组的化学结构，该组由结构I-VII组成。20.如权利要求19所述的试剂盒，其中所述检测表位包括与SEQ ID NO:9的氨基酸序列具有至少70％一致性的氨基酸序列。21.如权利要求20所述的试剂盒，其中使用检测抗体肽抗原产生所述检测抗体，该检测抗体肽抗原包括选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:9-11组成。22.如权利要求1-21中任一项所述的试剂盒，其中所述蛋白标准品包括替代化合物，所述替代化合物包括：捕获结构域，其中所述捕获结构域与所述捕获抗体结合，和检测结构域，其中所述检测结构域与所述检测抗体结合。23.如权利要求22所述的试剂盒，其中所述捕获结构域包括选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:2-8组成。24.如权利要求22或23所述的试剂盒，其中所述检测结构域包括选自下组的氨基酸序列，该组由SEQ ID NO:9-11组成。25.如权利要求24所述的试剂盒，其中所述检测结构域包括糖化K5残基。26.如权利要求25所述的试剂盒，其中所述糖化K5残基包括选自下组的化学结构，该组由结构I-VII组成。27.如权利要求22-26中任一项所述的试剂盒，其中所述检测结构域和所述捕获结构域是通过接头连接的。28.如权利要求27所述的试剂盒，其中所述接头包括聚乙二醇。29.如权利要求28所述的试剂盒，其中所述接头包括如下结构：30.如权利要求22-29中任一项所述的试剂盒，其中所述捕获抗体和所述检测抗体各自独立地是单克隆抗体或多克隆抗体。31.如权利要求30所述的试剂盒，其中所述捕获抗体是小鼠单克隆抗体。32.如权利要求30或31所述的试剂盒，其中所述检测抗体是源自小鼠或兔细胞的单克隆抗体。33.如权利要求30-32中任一项所述的试剂盒，其中这些抗体各自可以独立地包括一种或多种可检测标记。34.如权利要求30-33中任一项所述的试剂盒，进一步包括二级检测抗体。35.如权利要求34所述的试剂盒，其中所述二级检测抗体包括一种或多种可检测标记。36.如权利要求35所述的试剂盒，其中所述二级检测抗体连接到辣根过氧化物酶(HRP)上。37.如权利要求36所述的试剂盒，包括用于比色定量所述二级检测抗体的HRP底物。38.一种用于确定来自妊娠受试者的一种或多种样品中的GCD59浓度的方法，该方法包括：a.在一个或多个妊娠窗期间，从所述妊娠受试者获得所述一种或多种样品，并且b.使用如权利要求1-37中任一项所述的试剂盒来确定GCD59的浓度。39.如权利要求38所述的方法，其中所述一种或多种样品是在葡萄糖激发后取得。40.如权利要求38或39所述的方法，其中所述一种或多种样品是体液样品，这些体液样品选自下组，该组由以下各项组成：血液、尿、粘液、羊水和唾液。41.如权利要求40所述的方法，其中所述一种或多种样品包括至少一种血液样品和一种或多种其他体液样品的组合。42.如权利要求41所述的方法，包括单一血液样品。43.如权利要求38-42中任一项所述的方法，其中所述一个或多个妊娠窗包括妊娠的从约20至约36周。44.如权利要求43所述的方法，其中所述一个或多个妊娠窗包括妊娠的第24周。45.一种诊断受试者中的妊娠糖尿病(GDM)的方法，该方法包括：a.在一个或多个妊娠窗期间，从所述受试者获得一种或多种样品，b.使用如权利要求1-37中任一项所述的试剂盒来确定所述一种或多种样品中GCD59的浓度，并且c.如果GCD59的所述浓度大于预定的截止值，则提供GDM的诊断。46.如权利要求45所述的方法，其中所述方法并不包括消耗限制和/或需求。47.如权利要求45或46所述的方法，其中所述GDM的诊断包括选自下组的GDM亚类的诊断，该组由以下各项组成：A1类、A2类、B类、C类、D类、F类、R类、H类和T类。48.如权利要求45-47中任一项所述的方法，其中所述一种或多种样品是在葡萄糖激发后取得。49.如权利要求45-48中任一项所述的方法，其中所述一种或多种样品是体液样品，这些体液样品选自下组，该组由以下各项组成：血液、尿、粘液、羊水和唾液。50.如权利要求49所述的方法，包括单一血液样品。51.如权利要求45-50中任一项所述的方法，其中所述一个或多个妊娠窗包括妊娠的从约20至约36周。52.如权利要求51所述的方法，其中所述一个或多个妊娠窗包括妊娠的第24周。53.一种在受试者中诊断GDM的方法，该方法包括：a.在一个或多个妊娠窗期间，从所述受试者获得一种或多种样品，b.使用根据权利要求1-37中任一项所述的试剂盒来确定所述一种或多种样品中GCD59的浓度，c.将GCD59的所述浓度与所述受试者的一种或多种其他分析的结果进行比较，并且d.基于GCD59的所述浓度和所述受试者的一种或多种其他分析的所述结果提供GDM的诊断。54.如权利要求53所述的方法，其中一种或多种其他分析的所述结果包括选自下组的一种或多种生物标志物的水平，该组由以下各项组成：胰岛素、葡萄糖、和除GCD59外的糖化蛋白。55.如权利要求54所述的方法，其中所述一种或多种生物标志物包括葡萄糖。56.如权利要求55所述的方法，其中该葡萄糖的水平包括大于126mg/dl的空腹血浆葡萄糖水平或大于200mg/dl的随机血浆葡萄糖水平。57.如权利要求53所述的方法，其中所述一种或多种其他分析包括选自下组的测试，该组由以下各项组成：葡萄糖激发测试、口服葡萄糖耐量测试(OGTT)、空腹血糖测试、随机血糖测试、食后2小时血糖测试、血红蛋白A1c(HbA1c)测试、果糖胺测试和1,5-脱水葡萄糖醇测试。58.如权利要求53-57中任一项所述的方法，其中所述GDM的诊断包括选自下组的GDM亚类的诊断，该组由以下各项组成：A1类、A2类、B类、C类、D类、F类、R类、H类和T类。59.如权利要求53-58中任一项所述的方法，其中所述一个或多个妊娠窗包括妊娠的从约20至约36周。60.如权利要求59所述的方法，其中所述一个或多个妊娠...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·乔雷夫，约瑟·阿尔伯特·哈普林，
申请(专利权)人：哈佛大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国;US