一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，属于分析化学技术领域。本发明专利技术采用脱脂棉收集唾液样品、经离心和固相萃取后，采用气相色谱‑质谱联用法测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质。其步骤包括：a.用脱脂棉采集唾液样品，采集完后脱脂棉置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压得到唾液样品，经高速离心后取上清液；b.唾液样品加入内标物，依次经固相萃取柱富集、溶剂洗脱；c.洗脱液浓缩后复溶，过微孔滤膜，然后采用气相色谱‑质谱联用法测定，制作标准曲线，内标法定量。本发明专利技术方法可以有效的用于测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质，方法可行，检出限低，精密度好，准确可靠，具有推广应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学
，具体涉及一种专用于分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法。
技术介绍
吡嗪类和吡啶类物质是食品、烟草等中的重要香味成分。饮食过程中食品中香味成分被口腔唾液选择性溶解吸收，那些被吸收的成分才是刺激人体产生感官感受的物质，决定了食品的风格和风味。目前对食品香味的评价通常以口、鼻、舌、喉等的感知来评价，但很难排除人为主观性以及由此所产生的不确定性。研究测定唾液中吸收溶解的风味成分，则能直接、客观的得到决定食品风味的化学成分数据。进行饮食者唾液中吡嗪类、吡啶类香吃味成分的分析，可为食品、烟草等的香吃味评定提供数据支持，为改善食品风味提供理论依据。目前，关于香精香料、食品、白酒、烟气等样品中吡嗪类和吡啶类物质的测定已有大量的报道，然而唾液样品中吡嗪类和吡啶类物质的测定还未见报道。唾液样品基体复杂，主要成分是水（占99%），但含有多种有机物如黏蛋白、黏多糖、唾液淀粉酶、溶菌酶、免疫球蛋白、血型物质、尿素、尿酸和游离氨基酸等，以及无机物和一些气体分子，被分析成分在唾液中含量极低，还会受到唾液中多种有机成分和无机成分的干扰。因此，开发简单快速、高选择性、高灵敏度、定量准确的唾液中吡嗪类和吡啶类物质的提取和分离测定方法非常迫切。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对目前唾液中吡嗪类和吡啶类物质分离测定的方法未见文献报道的现状，以及现有技术的不足，提供一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，该方法可行，精密度好，检出限低，准确可靠，具有推广应用价值。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤：步骤（1），样品采集：将脱脂棉置于口腔内，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脱脂棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后收集上清液得到唾液样品；步骤（2），萃取：移取唾液样品，向唾液中加入适量内标物吡啶-D5，其加入量为使最终样品复溶溶液中内标物浓度为0.5-5 mg/L（最终样品复溶溶液即为步骤（3）用甲醇复溶后得到的溶液），然后转移至固相萃取柱，吡嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经溶剂洗脱，最后收集洗脱液；其中，固相萃取柱为硅胶固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱；洗脱时采用二氯甲烷对含有内标物的唾液样品进行洗脱；步骤（3），测定：将步骤（2）收集到的洗脱液，经浓缩至近干后，用1-2 mL甲醇复溶，过0.22 μm微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据标准曲线计算目标物含量；所述的浓缩温度为30-40℃；气相色谱条件如下：色谱柱为长度×内径×膜厚为30 m×0.25 mm × 0.25 μm，INNOWAX石英毛细管柱或相当者；载气氦气，纯度≥99. 999 %，恒流模式，流量1.0 mL/min；进样口温度：250℃；分流进样或不分流进样，分流进样时分流比1-30；进样量：1-2 μL；程序升温：初始温度50℃，保持 1 min，然后以5℃/min升温到130℃，再以20 ℃ /min 升温到230℃，保持10 min；质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250℃，离子源温度为180-250℃，电离能量为70 eV，溶剂延迟：4.0 min，选择离子监测模式，离子选择参数见表1。表1 吡嗪类和吡啶类的定量和辅助定性离子进一步，优选的是步骤（1）中的脱脂棉的质量为0.2-2.0 g。进一步，优选的是步骤（1）中唾液离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min。进一步，优选的是步骤（2）中唾液移取量为0.5-10 mL。进一步，优选的是步骤（2）中固相萃取柱填料为200-1000 mg；使用前采用5-10 mL 二氯甲烷、5-10 mL 甲醇和5-15 mL去离子水依次预淋洗。进一步，优选的是步骤（2）中样品转移至固相萃取柱时，控制流速不大于0.5滴/s；洗脱时，加入5-10 mL二氯甲烷洗脱，控制洗脱流速不大于5 mL/min。进一步，优选的是步骤（3）中收集到的洗脱液在30-40℃水浴中减压蒸发浓缩至近干，用1.0-2.0 mL甲醇复溶。减压蒸发时，压力没有具体限制。进一步，优选的是步骤（3）中标准曲线绘制方法如下：配制吡嗪类和吡啶类物质系列标准溶液，浓度为：0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、5 mg/L、10 mg/L，系列标准溶液中加入内标物吡啶-D5，内标物浓度与样品复溶溶液中内标物浓度相同，内标物浓度为0.5-5 mg/L，对系列标准溶液进行气相色谱-质谱联用仪分析，得到标准溶液的总离子流色谱图（如图1所示），根据各物质定量离子峰面积与内标物定量离子峰面积的比值为纵坐标，以各物质浓度与内标物浓度比值为横坐标，作各测定物质的标准曲线。进一步，优选的是所述的吡嗪类物质为2-甲基吡嗪、2,5-二甲基吡嗪、2,6-二甲基吡嗪、2,3-二甲基吡嗪、三甲基吡嗪、四甲基吡嗪；所述的吡啶类物质为吡啶、2-丙基吡啶、3-乙基吡啶、5-乙基-2-甲基吡啶。本专利技术与现有技术相比，其有益效果为：本专利技术方法可以有效的用于测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质，方法可行，前处理简单，操作简便，检测限低，精密度好，准确可靠，具有推广应用价值。以上说明为本专利技术技术方案的概述，为了更清楚的了解本专利技术的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本专利技术的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，现特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。附图说明图1是本专利技术吡嗪类和吡啶类物质混合标准溶液（2.0 mg/L）的总离子流色谱图；图2为烟草吸食者唾液样品的总离子流图；图3为白酒饮用者唾液样品的总离子流图。图中各峰的含义如下：1，6.47 min，吡啶；2，8.32 min，2-甲基吡嗪；3，9.60 min，2,5-二甲基吡嗪；4，9.75 min，2,6-二甲基吡嗪；5，10.18 min，2,3-二甲基吡嗪；6，10.63 min，2-丙基吡啶；7，10.99 min，3-乙基吡啶；8，11.53 min，三甲基吡嗪；9，11.74 min，5-乙基-2-甲基吡啶；10，13.20 min，四甲基吡嗪；IS，6.54 min，吡啶-D5。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的详细描述，但其并不限制本专利技术。本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。实施例1一种分离测定烟草吸食者唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，包括以下步骤：步骤（1），样品采集：将0.2 g脱脂棉置于烟草吸食者口腔内，放置0.3 min后取出，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，于10000 rpm转速下离心时间10 min得到唾液样品。步骤（2），萃取：移取2.0 mL唾液样品于离心管中，加入内标吡啶-D5至内标物浓度为2.0 mg/L；过填料为300 mg的硅胶固相萃取柱，首先本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1），样品采集：将脱脂棉置于口腔内，放置0.2‑5 min后，取出吸收了唾液的脱脂棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后收集上清液得到唾液样品；步骤（2），萃取：移取唾液样品，向唾液中加入内标物吡啶‑D5，内标物加入量为使最终样品复溶溶液中内标物浓度为0.5‑5 mg/L，然后转移至固相萃取柱，吡嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经溶剂洗脱，最后收集洗脱液；其中，固相萃取柱为硅胶固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱；洗脱时采用二氯甲烷对含有内标物的唾液样品进行洗脱；步骤（3），测定：将步骤（2）收集到的洗脱液，经浓缩至近干后，用1‑2 mL甲醇复溶，过0.22 μm微孔滤膜，滤液采用气相色谱‑质谱联用法分析，内标法定量，根据标准曲线计算目标物含量；所述的浓缩温度为30‑40℃；气相色谱条件如下：色谱柱为长度×内径×膜厚为30 m×0.25 mm × 0.25 μm，INNOWAX石英毛细管柱或相当者；载气氦气，纯度≥99.999%，恒流模式，流量1.0 mL/min；进样口温度：250℃；分流进样或不分流进样，分流进样时分流比1‑30；进样量：1‑2 μL；程序升温：初始温度50℃，保持 1 min，然后以5℃/min升温到130℃，再以20 ℃ /min 升温到230℃，保持10 min；质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250℃，离子源温度为180‑250℃，电离能量为70 eV，溶剂延迟：4.0 min，选择离子监测模式。...

【技术特征摘要】
1.一种分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤（1），样品采集：将脱脂棉置于口腔内，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脱脂棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后收集上清液得到唾液样品；步骤（2），萃取：移取唾液样品，向唾液中加入内标物吡啶-D5，内标物加入量为使最终样品复溶溶液中内标物浓度为0.5-5 mg/L，然后转移至固相萃取柱，吡嗪类和吡啶类物质经固相萃取柱吸附，再经溶剂洗脱，最后收集洗脱液；其中，固相萃取柱为硅胶固相萃取柱、氨基固相萃取柱或HLB固相萃取柱；洗脱时采用二氯甲烷对含有内标物的唾液样品进行洗脱；步骤（3），测定：将步骤（2）收集到的洗脱液，经浓缩至近干后，用1-2 mL甲醇复溶，过0.22 μm微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，内标法定量，根据标准曲线计算目标物含量；所述的浓缩温度为30-40℃；气相色谱条件如下：色谱柱为长度×内径×膜厚为30 m×0.25 mm × 0.25 μm，INNOWAX石英毛细管柱或相当者；载气氦气，纯度≥99.999%，恒流模式，流量1.0 mL/min；进样口温度：250℃；分流进样或不分流进样，分流进样时分流比1-30；进样量：1-2 μL；程序升温：初始温度50℃，保持 1 min，然后以5℃/min升温到130℃，再以20 ℃ /min 升温到230℃，保持10 min；质谱条件如下：电离方式为电子轰击源，色谱质谱接口温度为250℃，离子源温度为180-250℃，电离能量为70 eV，溶剂延迟：4.0 min，选择离子监测模式。2.根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于：步骤（1）中的脱脂棉的质量为0.2-2.0 g。3.根据权利要求1所述的分离测定唾液中吡嗪类和吡啶类物质的方法，其特征在于：步骤（1）中唾液...

【专利技术属性】
技术研发人员：司晓喜，刘志华，朱瑞芝，张凤梅，石倩倩，刘春波，申钦鹏，王昆淼，何沛，苏钟璧，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：云南;53