本发明专利技术属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种黄樟离体植株再生的方法。所述的黄樟离体植株再生的方法包含如下步骤：(1)外植体采集，(2)腋芽诱导，(3)增殖培养，(4)生根培养，(5)炼苗与移栽，(6)移栽幼苗管理。本发明专利技术以生长速度快、干型通直、材性优良、樟脑樟油含量高及抗逆性强的成年优良单株为母本，以基部萌枝为外植体，通过基本培养基选择、激素种类、浓度及其配比的筛选，建立其高效的离体植株再生快繁技术，达到增殖芽健壮伸长生长快、增值率高、生根率高、生根苗健壮、移栽成活率高的目的。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种黄樟离体植株再生的方法。
技术介绍
黄樟(Cinnamomum porrectum(Roxb.)Kosterm.)隶属樟科(Lauraceae)樟属(Cinnamomum)，成年树高可达20m，胸径40cm以上。黄樟产自我国广州、广西、福建、江西、湖南、贵州、四川、云南等地。巴基斯坦、印度经马来西亚至印度尼西亚也有黄樟分布。黄樟为常绿乔木，其树姿秀丽，主干明显而通直光滑，生长快速，其胸径年平均生长量比香樟大50％，材积大100％，是优良的速生树种。黄樟木材纹理通直，结构均匀细致，稍重而韧，易于加工，纵切面平滑，干燥后少开裂，且不变性，含油或粘液很丰富，各切面均极油润，耐腐防蛀，且富有香气，是一种贵重木材，也是造船、家具和工艺美术品的绝佳用材。黄樟枝繁叶茂，四季常青，耐修剪，可造型；叶片较大，叶色浓绿，有光泽，秋末时分有部分老叶呈桔红色，较为美观，是优良的园林造景树种，亦可作行道树。黄樟树冠高大，能遮阳蔽日，可滞尘吸音，净化空气，具有优良的生态价值。黄樟的枝叶富含樟脑、樟油，是提制樟脑和蒸取樟油原材料。樟脑有兴奋、强心、消炎、镇痛、抗菌、止咳、促渗等药理作用，多用于医药上，樟油被广泛应用于香料工业、医药卫生等领域，随着现代化工、医药工业的发展进步，人们对天然樟脑、樟油的需求越来越大。黄樟具有良好的材用、观赏、生态和经济价值，近年栽培和造林面积不断扩大。但目前黄樟人工栽培所用苗木都是采用种子苗造林，来自不同种源、家系种子的遗传变异，导致黄樟苗木及其造林后的林分的生长速度、木材质量、精油含量等相差很大，从而影响到林地经营的产量及经济效益。选择优良母本进行组培规模化育苗，实现良种无性化推广是黄樟这一优良树种产业化开发的重要途径。目前，黄樟的组织培养技术未见报道。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种黄樟离体植株再生的方法，该方法具有不定芽诱导快、增殖倍率高、芽粗壮伸长快、生根率高、生根苗根系发达健壮、移栽成活率高等特点。本专利技术的另一目的在于提供上述方法的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种黄樟离体植株再生的方法，包含如下步骤：(1)外植体采集：取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒；(2)腋芽诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽；(3)增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗；(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗；(6)移栽幼苗管理；步骤(1)中所述的黄樟优选为：干型通直圆满、树姿秀丽、生长速度快、富含樟脑和樟油、无病虫害的优良黄樟单株为母本；步骤(1)中所述的黄樟优选为种植时间不小于15年的黄樟；步骤(1)中优选对黄樟进行基部环割以促进基部萌枝；步骤(1)中外植体采集前，优选每隔7～10d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝4～5次；步骤(1)中所述的外植体采集的时间优选为秋季(9～11月)；步骤(1)中所述的外植体优选为：半木质化萌枝去叶后切成带1～2个叶腋的茎段；所述的茎段的长度优选为2～4cm；步骤(1)中所述的消毒的方式优选为：将外植体清洗后，依次用新洁尔灭溶液、乙醇溶液和升汞溶液浸泡消毒并再次清洗；步骤(1)中所述的消毒的方式进一步优选为：①将外植体用水清洗后，用体积分数为0.1％的新洁尔灭溶液刷洗3～7min，
再用无菌水冲洗1～2次；②将步骤①中冲洗后的外植体用体积分数为70～75％的乙醇溶液浸泡20～30s，再用无菌水冲洗1～2次；③将步骤②中冲洗后的外植体加入质量分数为0.05％～0.1％的升汞溶液中浸泡3～10min，其间不断摇动，再用无菌水冲洗5～6次；具体浸泡时间，依据外植体幼嫩程度确定；步骤(2)中所述的消毒后的外植体优选切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再接种到诱导培养基中；步骤(2)中所述的诱导培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.1～1.0mg/L、NAA 0.01～0.1mg/L、蔗糖25～40g/L和卡拉胶7～8g/L，诱导培养基的pH为5.8～6.0；步骤(2)中所述的诱导培养的条件优选为温度为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为8～12h/d；步骤(2)中所述的诱导培养的条件进一步优选为温度为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d；步骤(2)中所述的诱导培养的时间优选为20～30d；步骤(3)中所述的腋芽的高度为不小于2cm；步骤(3)中所述的腋芽优选截成1.0～1.5cm的茎段再转接到增殖培养基上；步骤(3)中所述的增殖培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.5～2mg/L、KT 0.3～1mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L和琼脂5～6g/L，增殖培养基的pH为5.8～6.0；步骤(3)中所述的增殖培养的条件优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为8～12h/d；步骤(3)中所述的增殖培养的条件进一步优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d；步骤(3)中所述的增殖培养的的时间优选为20～30d；步骤(4)中所述的顶芽的长度优选为2.0～3.0cm；步骤(4)中所述的生根培养基包含1/2MH基本培养基以及NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖15～20g/L、琼脂5～6g/L，生根培养基的pH为5.8～6.0；步骤(4)中所述的生根培养的条件优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为8～12h/d；步骤(4)中所述的生根培养的条件进一步优选为25±2℃，光照(60μmol.m-2.s-1)时间为12h/d；步骤(4)中所述的生根培养的时间优选为15～20d；所述1/2MH基本培养基为将MH基本培养基中所含大量元素，包括NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4的用量减半，其余成分不变；所述的MH基本培养基包含如下组分：720mg/L NH4NO3、1800mg/L KNO3、340mg/L CaCl2·2H2O、200mg/L Ca(NO3)2、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.025mg/L CuSO4·5H2O、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2·EDTA·H2O、100mg/L Myo-Insitol(肌醇)、2.0mg/L Glycine(甘氨酸)、0.1mg/L Thiamine·HCl(维生素B1)、0.5mg/L Nicotinic·acid(烟酸)、0.5mg/L Pyridoxine·HCl(维生素B6)，MH基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黄樟离体植株再生的方法，其特征在于包含如下步骤：(1)外植体采集：取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒；(2)腋芽诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽；(3)增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗；(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗；(6)移栽幼苗管理。
【技术特征摘要】
1.一种黄樟离体植株再生的方法，其特征在于包含如下步骤：(1)外植体采集：取黄樟树干基部萌枝，作为外植体，然后消毒；(2)腋芽诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种到诱导培养基进行诱导培养，得到腋芽；(3)增殖培养：将步骤(2)培养得到的腋芽转接到增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖苗；(4)生根培养：从步骤(3)培养得到的增殖苗中切取顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；(5)炼苗与移栽：将步骤(4)培养得到的组培生根苗移到温室炼苗移栽，得到容器苗；(6)移栽幼苗管理。2.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的外植体采集的时间为9～11月。3.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的外植体为：半木质化萌枝去叶后切成带1～2个叶腋的茎段。4.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的诱导培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.1～1.0mg/L、NAA 0.01～0.1mg/L、蔗糖25～40g/L和卡拉胶7～8g/L，诱导培养基的pH为5.8～6.0。5.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的增殖培养基包含MH基本培养基以及6-BA 0.5～2mg/L、KT 0.3～1mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L和琼脂5～6g/L，增殖培养基的pH为5.8～6.0。6.根据权利要求1所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的生根培养基包含1/2MH基本培养基以及NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖15～20g/L、琼脂5～6g/L，生根培养基的pH为5.8～6.0。7.根据权利要求4～6任一项所述的黄樟离体植株再生的方法，其特征在于：所述的MH基本培养基包含如下组分：720mg/L NH4NO3、1800mg/L KNO3、340mg/L...
【专利技术属性】
技术研发人员：邓小梅，白红娟，奚如春，鲁好君，赵帅，陈晓阳，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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