一种双孢蘑菇内生菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种双孢蘑菇内生菌及其应用，双孢蘑菇内生菌为赖氨酸芽孢杆菌，命名为赖氨酸芽孢杆菌SCAU1，保藏编号为CCTCCM2016106。本发明专利技术从双孢蘑菇中分离出的功能内生菌，不仅促进植物生长、抑制植物病原真菌和病原细菌的生长且具备高效纤维素降解能力，可用于“肥药兼效型”微生物肥料的制作，改善土壤理化性质，促进植物生长；连续三次盆栽实验显示SCAU1发酵液经清水稀释后，采用灌根方式对玉米苗表现出明显的促生作用，能够明显提高玉米苗期的根数、根长、株高、叶片数量和叶面积；以烤烟为供试植物，进行SCAU1的大田实验，结果显示能提高烤烟云87团棵期的茎粗、株高、叶面积系数，提高了烤烟的产量和钾含量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种双孢蘑菇内生菌及其应用。
技术介绍
内生菌是一类生长于活体植物组织中的特殊微生物，在植物中普遍存在，且能够产生与宿主相同或相似的生物活性物质。从内生菌中筛选活性高的菌株为寻找新型生物活性物质及开发具有应用功能的微生物菌剂开辟了一条新的道路。食用菌是美食良药兼用的大型真菌，目前有关食用菌内生菌报道极少。双孢蘑菇(Agaricus bisporus)在分类学上属于真菌界(Fungi)、真菌门(Eumycota)、担子菌亚门(Basidiomycotina)、担子菌纲(Basidiomycetes)、伞菌目(Agaricales)、伞菌科(Agaricaceae)、蘑菇属(Agaricus)，它营养丰富，味道鲜美，色白质嫩，富含蛋白质、多糖等营养成分，是一种受世界各国人民喜爱的“健康食品”，具有很好地保健功能。双孢蘑菇是世界上人工栽培时间最长，栽培规模最广，栽培效益最好的“三最”大宗食用菌，也是一类以纤维素为主要碳源，栽培过程需要覆土才能扭结出菇的大型真菌。以双孢蘑菇为分离源，进行内生细菌的分离并鉴定分离菌株的功能对于挖掘新的
微生物菌种资源应用于新型复合微生物菌剂的开发具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种双孢蘑菇内生菌及其应用，通过综合评价筛选食用菌内部细菌的功能特性，旨在解决当前微生物肥料生产菌种单一、菌株优良性状退化、菌剂产品环境适应性较弱等问题。本专利技术是这样实现的，一种双孢蘑菇组织内细菌，所述双孢蘑菇内生菌为赖氨酸芽孢杆菌，命名为赖氨酸芽孢杆菌SCAU1，保藏编号为CCTCCM2016106。该菌具有较广泛的抗菌作用，同时能促进植物生长，兼具“肥药”双效功能，使用该菌制成的微生物肥料对于在农业种植业中减少化学肥料和农药施用具有重要意义。本专利技术的另一目的在于提供一种所述双孢蘑菇内生菌的分离方法，所述分离方法选取未开伞的双孢蘑菇子实体，进行赖氨酸芽孢杆菌的分离。本专利技术的另一目的在于提供一种所述双孢蘑菇内生菌的鉴定方法，所述鉴定方法包括：对赖氨酸芽孢杆菌SCAU1进行抗菌活性、IAA产生量、溶磷特性、产纤维素酶特性进行分析。本专利技术的另一目的在于提供一种利用所述双孢蘑菇内生菌制备的发酵液。进一步，所述制备方法包括：将筛选得到的赖氨酸芽孢杆菌SCAU1活化后接种于LB肉汤培养液中，30℃，120r/min的恒温摇床中培养，培养36h后，作为种子液以1:1比例加入含有葡萄糖的
LB肉汤培养基，30℃，120r/min的恒温摇床中培养36h使其活菌数达到10亿以上，取出备用。本专利技术的另一目的在于提供一种利用所述双孢蘑菇内生菌制备的赖氨酸芽孢杆菌SCAU1液体菌剂。本专利技术的另一目的在于提供一种所述发酵液在玉米盆栽的应用。进一步，将按50-200比例稀释的SCAU1菌株的发酵液采用灌根的方式进行玉米苗的接菌处理。本专利技术的另一目的在于提供一种所述发酵液在烤烟的应用。进一步，将按50-200比例稀释SCAU1菌株发酵液，在烤烟苗移栽时，将SCAU1进行烤烟灌根处理。本专利技术提供的双孢蘑菇内生菌及其应用，从双孢蘑菇中分离出特异内生菌，不仅可以促进植物的生长，还可以抑制植物病原真菌和细菌的生长，且具备高效纤维素降解能力，可用于抗病促生型多功能微生物肥料的制作，改善土壤理化性质，促进植物生长；连续三次盆栽实验显示SCAU1发酵液经清水稀释后，采用灌根的方式对玉米苗表现出明显的促生作用，能够明显提高玉米苗期的根数、根长、株高、叶片数量和叶面积；以烤烟为供试植物，进行SCAU1的大田实验，结果显示该菌能提高烤烟云87团棵期的茎粗、株高、叶面积系数，提高烤烟的产量和钾含量。本专利技术的赖氨酸芽孢杆菌，具有较广泛的抗菌作用，同时能促进植物生长，具有“肥药”兼效功能，使用该菌制成的发酵菌剂对于在农业种植业中减少化学肥料和农药施用具有重要意义；菌株具有广泛的抗菌活性，高效纤维素降解能力，同时产
生IAA，对植物具有明显的促进生长作用，表现出多重生物学功能。该菌制作的生物肥料能够促进玉米和烤烟等植物的生长，同时促进烤烟品质。对于在农业生产中“减肥减药”具有潜在应用价值。附图说明图1是本专利技术实施例提供的双孢蘑菇内生菌的制备方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图对本专利技术的应用原理作详细的描述。本专利技术实施例的双孢蘑菇内生菌，经形态、生理、分子鉴定为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)，命名为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)SCAU1，该菌株已于2016年3月11日湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCCM2016106。如图1所示，本专利技术实施例的双孢蘑菇内生菌的制备方法包括以下步骤：S101：双孢蘑菇子实体选择，采集田间露地栽培的双孢蘑菇，品种为川农蘑菇3号，子实体菇型正常、无病虫害、八分成熟；S102：双孢蘑菇内生细菌的分离，取新鲜双孢蘑菇样品，利用97％
酒精表面消毒。用无菌解剖刀去掉子实体表皮，用无菌镊子取绿豆大小的内部组织，接于NB和ISP4培养基平板中，以最后一遍的洗涤水作对照，以检测表面消毒是否彻底；S103：在28℃倒置培养4-5d，根据菌落大小、形态和色泽等表观特征挑取单菌落并进行划线纯化。通过分离，共获得46株菌落形态各不相同的菌株。下面结合具体实施例对本专利技术的应用原理作进一步的描述。(一)赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)SCAU1菌株筛选1、双孢蘑菇子实体选择采集田间露地栽培的双孢蘑菇，品种为川农蘑菇3号，子实体菇型正常、无病虫害、八分成熟。2、双孢蘑菇内生细菌的分离取步骤1中的新鲜双孢蘑菇样品，利用97％酒精表面消毒。用无菌解剖刀去掉子实体表皮，用无菌镊子取绿豆大小的内部组织，接于NB和ISP4培养基平板中，以最后一遍的洗涤水作对照，以检测表面消毒是否彻底。在28℃倒置培养4-5d，根据菌落大小、形态和色泽等表观特征挑取单菌落并进行划线纯化。通过分离，共获得46株菌落形态各不相同的菌株。3、内生细菌产吲哚乙酸(IAA)测定将步骤2中的46株菌培养到对数期，取菌液50μl于含0.5g/L色氨酸的牛肉膏液体培养基中(约3ml)中，重复3次，28℃ 140r/min振荡
培养1.5天，取50μl于洗净的白瓷板中，加100μl显色剂，25℃下避光30min，如果出现粉红色，表明产生IAA，以没有接菌的含0.5g/L色氨酸的牛肉膏液体培养基为对照。将产吲哚乙酸的内生细菌继续在含0.5g/L色氨酸的牛肉膏液体培养基中培养24-48h后，8000r/min离心5min，取上清液2ml加入4ml Salkowski显色剂，25℃下避光30min后，530nm下测定吸光度值。以空白培养基作对照，并以IAA的标准样品对应的光密度做标准曲线，计算IAA的产量(mg/L)。46株菌中有36株产生IAA，产量大于4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双孢蘑菇内生菌，其特征在于，所述双孢蘑菇内生菌为赖氨酸芽孢杆菌，命名为赖氨酸芽孢杆菌SCAU1，保藏编号为CCTCCM2016106。

【技术特征摘要】
1.一种双孢蘑菇内生菌，其特征在于，所述双孢蘑菇内生菌为赖氨酸芽孢杆菌，命名为赖氨酸芽孢杆菌SCAU1，保藏编号为CCTCCM2016106。2.一种如权利要求1所述双孢蘑菇内生菌的分离方法，其特征在于，所述分离方法选取未开伞的双孢蘑菇子实体，进行赖氨酸芽孢杆菌的分离。3.一种如权利要求1所述双孢蘑菇内生菌的鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括：对赖氨酸芽孢杆菌SCAU1进行抗菌活性、IAA产生量、溶磷特性、产纤维素酶特性进行分析。4.一种利用如权利要求1所述双孢蘑菇内生菌制备的发酵液。5.如权利要求4所述的发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将筛选得到的赖氨酸芽孢杆菌SCAU1活化后接种于LB肉汤培养液中，30℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：辜运富，陈小敏，陈强，张小平，余秀梅，赵珂，谢强，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51