本发明专利技术提供了两种大环内酯类新化合物及其制备方法与应用，所述大环内酯类新化合物的结构式如下：本发明专利技术的化合物是由冰城链霉菌突变菌株Streptomyces bingchenggensis BC‑120‑4经培养和液体发酵，发酵液经过滤后，用甲醇浸提，乙酸乙酯萃取，浓缩后硅胶柱层析，RP‑18柱层析后所得到的化合物。本发明专利技术的化合物具有较强的杀螨杀线虫活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农药
，具体涉及一类具有杀虫活性的大环内酯类抗生素，及其制备方法。
技术介绍
米尔贝霉素是日本三共公司以二斑叶螨为试虫，从微生物发酵液中分离得到的具有抗虫活性的代谢产物。经过大量的实验研究，1983米尔贝霉素A3/A4(A3/A4＝3:7)被用作杀螨剂。1990年，1％的米尔贝霉素乳油(milbeknock)在日本被批准作为杀螨剂用于茶叶、茄子。1993年，1％的米尔贝霉素乳油(koromite)用作桃、梨、草莓、茄子、西瓜、花卉的杀虫剂也被日本批准使用。由于其高效的杀虫能力和低毒特性，米尔贝霉素已在日本、欧美等多个国家推广使用。因此开发高效低毒、易降解、无污染的米尔贝霉素类杀虫药具有重要的应用价值。冰城链霉菌Streptomyces bingchenggensis是本实验室从土壤中分离得到的米尔贝霉素产生菌。与其它米尔贝霉素产生菌Streptomyces hygroscopicus subsp.aureolacrimosus和Streptomyces griseochromogenes一样，冰城链霉菌Streptomyces bingchenggensis除了产生米尔贝霉素A3/A4外，还产生其它米尔贝霉素系列化合物及其它的次级代谢产物。通过对Streptomyces bingchenggensis进行常温常压等离子诱变，我们获得了一株米尔贝霉素A3/A4高产菌株Streptomyces bingchenggensis BC-120-4(Hai-Yan Wang,Ji Zhang,Yue-Jing Zhang,Bo Zhang,Chong-Xi Liu,Hai-Rong He,Xiang-Jing Wang,Wen-Sheng Xiang.Combined application of plasma mutagenesis and gene engineering leads to 5-oxomilbemycins A3/A4 as main components from Streptomyces bingchenggensis[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2014,98:9703-9712)。因此，对该突变菌株发酵代谢产物的分离纯化可以发现新型、更高生物活性的米尔贝霉素结构类似物，为米尔贝霉素生物合成机制的研究提供新的视角，也为新型米尔贝霉素的药物开发提供丰富的实验材料。本专利技术主要涉及由冰城链霉菌突变菌株(Streptomyces bingchenggensis BC-120-4)得到的新的米尔贝霉素类化合物，及它们的制备方法和应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一类具有强杀虫活性的大环内酯类化合物。本专利技术的另一个目的是提供这类大环内酯类化合物的制备方法。本专利技术提供的两种新大环内酯类化合物的分子结构分别如下：上述大环内酯类新化合物的制备方法是：将冰城链霉菌突变菌株经斜面培养、种子培养、摇瓶发酵及分离纯化而得。所述的冰城链霉菌突变菌株为Streptomyces bingchenggensis BC-120-4。所述的斜面培养为：培养基组成：葡萄糖10-12g/L，麦芽糖3-4g/L，酵母抽提粉3-4g/L，K2HPO4·3H2O 0.5-0.6g/L，MgSO4·7H2O 0.5-0.6g/L，NaCl 0.5-0.6g/L，KNO3 1.0-1.2g/L，琼脂粉20-25g/L，pH 7.0-7.2，用去离子水配制，于121℃下灭菌20min。接菌后置于28℃培养箱中，培养8-9天。所述的种子培养为：种子培养基组成：葡萄糖5-6g/L，麦芽糊精5-6g/L，可溶性淀粉1.0-1.2g/L，酵母粉5-6g/L，牛肉膏1.0-1.2g/L，酪蛋白胨1.0-1.2g/L，pH 7.0-7.2，用蒸馏水配制，于121℃下灭菌20min。向菌种斜面上加入10ml无菌水，用已灭菌的接种环刮下孢子制成孢子悬液，使其浓度为107-108c.f.u.ml-1，然后取2ml孢子悬液接种于种子培养摇瓶中，种子摇瓶装液量为25ml/250ml，置于250rpm旋转式摇床，28℃培养46-52h。所述的摇瓶发酵为：发酵培养基组成(g/L)：葡萄糖10-12，乳糖25-30，棉籽饼粉25-30，CaCO3 0.3-0.4，pH 7.0-7.2，用蒸馏水配制，于121℃下灭菌20min。按8％(V/V)接种量，将种子液接入到1L发酵摇瓶中，发酵摇瓶的装液量为100ml/L。置于250rpm旋转式摇床，28℃发酵培养7-8天。所述的分离和提纯的方法为：发酵液经100～200目筛网过滤后，滤渣用3-4倍体积甲醇提取，提取液浓缩后用等体积乙酸乙酯萃取3-4次，将萃取液浓缩后依次进行硅胶柱层析和RP-18柱层析后，得到两种白色粉末状化合物1和化合物2。所述的硅胶柱层析用到的填料是100～200目的硅胶，流动相为石油醚:乙酸乙酯＝100:0-50:50(V/V)进行梯度洗脱，流速为10-20ml/min，依次收集洗脱液，薄层层析(TLC)检测合并相同组分。所述的RP-18柱层析使用混合溶剂，即甲醇:水＝80:20-95:5(V/V)进行梯度洗脱，流速为3-5ml/min，依次收集洗脱液，薄层层析(TLC)检测合并相同组分。本专利技术得到了两个新的大环内酯类化合物，新化合物对朱砂叶螨及松材线虫的杀虫活性与商品化杀虫剂milbemycin A3/A4活性相当，可用于杀虫剂的开发。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作详细说明：实施例11、发酵(1)发酵菌种：发酵菌种是冰城链霉菌突变菌株，该菌株是公开于Hai-Yan Wang,Ji Zhang,Yue-Jing Zhang,Bo Zhang,Chong-Xi Liu,Hai-Rong He,Xiang-Jing Wang,Wen-Sheng Xiang.Combined application of plasma mutagenesis and gene engineering leads to 5-oxomilbemycins A3/A4as main components from Streptomyces bingchenggensis[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2014,98:9703-9712的冰城链霉菌Streptomyces bingchenggensis BC-120-4。(2)斜面培养：培养基组成(g/L)：葡萄糖10，麦芽糖3，酵母抽提粉3，K2HPO4·3H2O0.5，MgSO4·7H2O 0.5，NaCl 0.5，KNO3 1，琼脂粉20，pH 7.0，用去离子水配制，于121℃下灭菌20min。接菌后置于28℃培养箱中，培养8天。(3)种子培养：种子培养基组成(g/L)：葡萄糖5，麦芽糊精5，可溶性淀粉1，酵母粉5，牛肉膏1，酪蛋白胨1，pH 7.0，用蒸馏水配制，于121℃下灭菌20min。向菌种斜面上加入10ml无菌水，用已灭菌的接种环刮下孢子制成孢子悬液，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种大环内酯类新化合物，其特征是：其结构式为：
【技术特征摘要】
1.一种大环内酯类新化合物，其特征是：其结构式为：2.一种大环内酯类新化合物，其特征是：其结构式为：3.一种权利要求1或2所述的大环内酯类新化合物的制备方法，其特征是：将冰城链霉菌突变菌株经发酵及分离纯化而得。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征是：所述的冰城链霉菌突变菌株为Streptomyces bingchenggensis BC-120-4；发酵前需对菌株进行斜面培养、种子培养。5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征是：所述的斜面培养为：斜面培养基组成：葡萄糖10-12g/L，麦芽糖3-4g/L，酵母抽提粉3-4g/L，K2HPO4·3H2O 0.5-0.6g/L，MgSO4·7H2O 0.5-0.6g/L，NaCl 0.5-0.6g/L，KNO3 1.0-1.2g/L，琼脂粉20-25g/L，pH 7.0-7.2，用去离子水配制，灭菌，接菌后置于28℃培养箱中，培养8-9天，将培养得到的孢子用无菌水配置成107-108c.f.u.ml-1的孢子悬液备用。6.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征是：所述的种子培养为：种子培养基组成：葡萄糖5-6g/L，麦芽糊精5-6g/L，可溶性淀粉1.0-1.2g/L，酵母粉5-6g/L，牛肉膏1.0-1.2g/L，酪蛋白胨1.0-1.2g/L，pH 7.0-7.2，用蒸...
【专利技术属性】
技术研发人员：向文胜，王继栋，张继，李建宋，王相晶，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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