本发明专利技术公开了一种复合微生态制剂的制备方法及其应用，将处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，添加低聚木糖和β‑葡聚糖混匀，以脱脂乳为基本基质，添加海藻糖制备悬浮液，真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。所得的复合微生态制可以抑制石斑鱼、半滑舌鳎体内有害致病菌的生长，促进石斑鱼、半滑舌鳎的生长，提高水产幼苗存活率和长期存活率，提高幼苗存活率30%以上，提高生长期存活率10%‑20%，可以有效地改善养殖水体微环境，帮助水产生物对营养物质进行消化吸收。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物制剂领域，具体涉及一种复合微生态制剂的制备方法及其应用。
技术介绍
微生态制剂包括含有活菌和/或死菌及其组分和产物的制剂，可经口或其他黏膜途径投放，旨在改善黏膜表面微生物或酶的动态平衡，或用于刺激特异性或非特异性免疫机制。随着抗生素药物在养殖业的禁止使用，开发抗生素药物替代品应用于养殖业逐渐成为关注热点。芽孢杆菌具有保湿性强、有机质分解力强、抑菌灭害力强等特点，又能产生丰富的代谢生成物，如多种有机酸、消化酶等，可抑制有害菌、病原菌等有害微生物的生长繁殖，改善养殖水体微环境，帮助水产生物对营养物质进行消化吸收。将芽孢杆菌应用于水产养殖行业是解决抗生素污染问题的一个有效方案。经过修饰鱼类抗菌肽hepcidin和两栖动物抗菌肽maginin所组成的融合蛋白抗菌肽酵母是一种具有抗菌、免疫功能并以基因工程构建的新型饲料添加剂。将芽孢杆菌和抗菌肽酵母复合发酵制成的微生态制剂运用到水产养殖业替代抗生素将具有重大的经济和社会意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种复合微生态制剂的制备方法及其应用。所得的复合微生态制可以抑制石斑鱼、半滑舌鳎体内有害致病菌的生长，促进石斑鱼、半滑舌鳎的生长，提高水产幼苗存活率和长期存活率，提高幼苗存活率30%以上，提高生长期存活率10%-20%，可以有效地改善养殖水体微环境，帮助水产生物对营养物质进行消化吸收。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种复合微生态制剂的制备方法，具体包括以下步骤：（1）芽孢杆菌和抗菌肽酵母的培养：将芽孢杆菌和抗菌肽酵母种子分别从试管斜面培养基中接种到接有液体培养基的锥形瓶，置于摇床中，摇床转速150-250r/min，于25℃下培养3天；（2）将步骤（1）中处于对数期的芽孢杆菌及抗菌肽酵母分别接种到发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25℃，发酵时间为48h；（3）将步骤（2）所得的处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，加入低聚木糖和β-葡聚糖混匀，低聚木糖和β-葡聚糖在混合液中浓度均为2.0g·L-1，继续添加20wt%脱脂乳作为基本基质，并添加5wt%海藻糖，搅拌均匀后得到悬浮液，将所得悬浮液真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。步骤（1）中所述的液体培养基的配方为：蛋白胨5g、酵母粉1g、磷酸高铁0.01g和蒸馏水1L；pH值7.6-7.8，121℃灭菌15-20min。步骤（2）中的发酵培养基的配方为：可溶性淀粉3-3.5g、蛋白胨10-12g、酵母膏3-5g、KH2PO4 1.5-4g、KHPO4 2-4g、MgSO4 0.1-1g、ZnCl2 1-3g、蒸馏水1L；pH值7.4-7.6，121℃灭菌15-20min。根据本专利技术的制备方法制得的复合微生态制剂应用于石斑鱼、半滑舌鳎养殖中。芽孢杆菌具有优良的产酶能力，且在低温条件下，产酶能力没有明显下降。添加芽孢杆菌的饲料可以显著增加石斑鱼、半滑舌鳎的体重。抗菌肽酵母表达抗菌肽含量大于200μg/g，是一种蛋白质含量高、营养丰富、富含动物抗菌肽的绿色无污染酵母饲料添加剂。本专利技术制备的复合微生态制剂，复合发酵后菌株浓度达到5×109CFU/mL以上，干燥后产品中活菌数达1亿以上，抗菌肽酵母菌、粗蛋白≥30%、抗菌肽含量>200μg/g，适宜饵料粒径在4-20μm左右；将芽孢杆菌与抗菌肽酵母混合，能起到功能性协同作用，能够有效的促进石斑鱼、半滑舌鳎的生长。本专利技术的有益效果在于：本专利技术所得的复合微生态制剂用于水产养殖饲料直接投入养殖水体中，可以抑制石斑鱼、半滑舌鳎体内有害致病菌的生长，促进石斑鱼、半滑舌鳎的生长，提高水产幼苗存活率和长期存活率，提高幼苗存活率30%以上，提高生长期存活率10%-20%，可以有效地改善养殖水体微环境，帮助水产生物对营养物质进行消化吸收。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术做进一步说明，但本专利技术不仅仅限于这些实施例。实施例1一种复合微生态制剂的制备方法，具体包括以下步骤：（1）芽孢杆菌和抗菌肽酵母的培养：将芽孢杆菌和抗菌肽酵母种子分别从试管斜面培养基中接种到接有液体培养基的锥形瓶，置于摇床中，摇床转速150r/min，于25℃下培养3天；（2）将步骤（1）中处于对数期的芽孢杆菌及抗菌肽酵母分别接种到发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25℃，发酵时间为48h；（3）将步骤（2）所得的处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，加入低聚木糖和β-葡聚糖混匀，低聚木糖和β-葡聚糖在混合液中浓度均为2.0g·L-1，继续添加20wt%脱脂乳作为基本基质，并添加5wt%海藻糖，搅拌均匀后得到悬浮液，将所得悬浮液真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。步骤（1）中所述的液体培养基的配方为：蛋白胨5g、酵母粉1g、磷酸高铁0.01g和蒸馏水1L；pH值7.6，121℃灭菌20min。步骤（2）中的发酵培养基的配方为：可溶性淀粉3g、蛋白胨10g、酵母膏3g、KH2PO4 1.5g、KHPO4 2g、MgSO4 0.1g、ZnCl2 1g、蒸馏水1L；pH值7.6，121℃灭菌15min。实施例2一种复合微生态制剂的制备方法，具体包括以下步骤：（1）芽孢杆菌和抗菌肽酵母的培养：将芽孢杆菌和抗菌肽酵母种子分别从试管斜面培养基中接种到接有液体培养基的锥形瓶，置于摇床中，摇床转速200r/min，于25℃下培养3天；（2）将步骤（1）中处于对数期的芽孢杆菌及抗菌肽酵母分别接种到发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25℃，发酵时间为48h；（3）将步骤（2）所得的处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，加入低聚木糖和β-葡聚糖混匀，低聚木糖和β-葡聚糖在混合液中浓度均为2.0g·L-1，继续添加20wt%脱脂乳作为基本基质，并添加5wt%海藻糖，搅拌均匀后得到悬浮液，将所得悬浮液真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。步骤（1）中所述的液体培养基的配方为：蛋白胨5g、酵母粉1g、磷酸高铁0.01g和蒸馏水1L；pH值7.7，121℃灭菌18min。步骤（2）中的发酵培养基的配方为：可溶性淀粉3.2g、蛋白胨11g、酵母膏4g、KH2PO4 2.5g、KHPO4 3g、MgSO4 0.6g、ZnCl2 2g、蒸馏水1L；pH值7.5，121℃灭菌18min。实施例3一种复合微生态制剂的制备方法，具体包括以下步骤：（1）芽孢杆菌和抗菌肽酵母的培养：将芽孢杆菌和抗菌肽酵母种子分别从试管斜面培养基中接种到接有液体培养基的锥形瓶，置于摇床中，摇床转速250r/min，于25℃下培养3天；（2）将步骤（1）中处于对数期的芽孢杆菌及抗菌肽酵母分别接种到发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25℃，发酵时间为48h；（3）将步骤（2）所得的处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，加入低聚木糖和β-葡聚糖混匀，低聚木糖和β-葡聚糖在混合液中浓度均为2.0g·L-1，继续添加20wt%脱脂乳作为基本基质，并添加5wt%海藻糖，搅拌均匀后得到悬浮液，将所得悬浮液真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。步骤（1）中所述的液体培养基的配方为：蛋白胨5g、酵母粉1g、磷酸高铁0.01g和蒸馏水1L；pH值7.8，121℃灭菌20min。步骤（2）本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）芽孢杆菌和抗菌肽酵母的培养：将芽孢杆菌和抗菌肽酵母种子分别从试管斜面培养基中接种到接有液体培养基的锥形瓶，置于摇床中，摇床转速150‑250r/min，于25℃下培养3天；（2）将步骤（1）中处于对数期的芽孢杆菌及抗菌肽酵母分别接种到发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25℃，发酵时间为48h；（3）将步骤（2）所得的处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，加入低聚木糖和β‑葡聚糖混匀，低聚木糖和β‑葡聚糖在混合液中浓度均为2.0g·L‑1，继续添加20wt%脱脂乳作为基本基质，并添加5wt%海藻糖，搅拌均匀后得到悬浮液，将所得悬浮液真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。
【技术特征摘要】
1. 一种复合微生态制剂的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）芽孢杆菌和抗菌肽酵母的培养：将芽孢杆菌和抗菌肽酵母种子分别从试管斜面培养基中接种到接有液体培养基的锥形瓶，置于摇床中，摇床转速150-250r/min，于25℃下培养3天；（2）将步骤（1）中处于对数期的芽孢杆菌及抗菌肽酵母分别接种到发酵培养基中进行发酵，发酵温度为25℃，发酵时间为48h；（3）将步骤（2）所得的处于对数期的芽孢杆菌和抗菌肽酵母培养发酵液等体积混合，加入低聚木糖和β-葡聚糖混匀，低聚木糖和β-葡聚糖在混合液中浓度均为2.0g·L-1，继续添加20wt%脱脂乳作为基本基质，并添加5wt%海藻糖，搅拌均匀后得到悬浮液，将所得悬浮液真空冷冻干燥后，制得复合微生态制剂。2. 根据权利要求1所述的一种复...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈宪，李智，杨明，艾佳敏，黄巧丽，陈小雅，陈志鸿，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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