基于GC-MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法技术

本发明专利技术公开了一种基于GC‑MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法，其包括步骤：1)将植物样本、内标物和预冷至‑20～4℃的亲水性有机溶剂混匀并降温至‑80～‑10℃，然后研磨粉碎，并冰水浴超声提取；2)再分别加入亲脂性有机溶剂和水，混匀，并冰水浴超声提取；于0～16℃高速离心，取水相并挥干；3)加入肟化试剂，于30～45℃进行肟化反应；4)最后加入衍生化试剂和正己烷，于60～80℃进行衍生化反应。本发明专利技术的预处理方法不仅可充分提取植物样本的初级代谢物，获得丰富的代谢物质谱数据信息，而且可尽量避免提取过程中代谢物的变化，以及脂溶性物质对气相色谱柱的污染，从而获得较好的样品重现性。

【技术实现步骤摘要】
201610196406

【技术保护点】
一种基于GC‑MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法，其特征在于包括如下步骤：1)将植物样本、内标物和预冷至‑20～4℃的亲水性有机溶剂混匀并降温至‑80～‑10℃，然后研磨粉碎，并冰水浴超声提取；2)再分别加入亲脂性有机溶剂和水，混匀，并冰水浴超声提取；于0～16℃高速离心，取水相并挥干；3)加入肟化试剂，于30～45℃进行肟化反应；4)最后加入衍生化试剂和正己烷，于60～80℃进行衍生化反应，得到基于GC‑MS的植物非靶向代谢组学样品。

【技术特征摘要】
1.一种基于GC-MS的植物非靶向代谢组学样品预处理方法，其特征在于包括如下步骤：1)将植物样本、内标物和预冷至-20～4℃的亲水性有机溶剂混匀并降温至-80～-10℃，然后研磨粉碎，并冰水浴超声提取；2)再分别加入亲脂性有机溶剂和水，混匀，并冰水浴超声提取；于0～16℃高速离心，取水相并挥干；3)加入肟化试剂，于30～45℃进行肟化反应；4)最后加入衍生化试剂和正己烷，于60～80℃进行衍生化反应，得到基于GC-MS的植物非靶向代谢组学样品。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述亲水性有机溶剂为甲醇、丙酮或乙醇，所述亲水性有机溶剂体积:所述植物样本重量为0.5～1mL:100mg优选0.6～0.75mL:100mg；所述内标物为氯苯丙氨酸，所述内标物重量:所述植物样本重量为10～30μg:100mg优选20μg:100mg。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氯苯丙氨酸为L-2-氯-苯丙氨酸、3,4-二氯苯丙氨酸、L-4-氯苯丙氨酸、D-4-氯苯丙氨酸或D-2-氯苯丙氨酸。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述内标物预先用所述亲水性有机溶剂稀释为溶度为0.2～0.4mg/mL优选0.3mg/mL的内标物溶液，然后再准确量取并与所述植物样本、所述亲水性有机溶剂混合，量取混合用的所述亲水性有机溶剂时扣除所述内标物溶液体积，以此维持所述亲水性有机溶剂总的体积；步骤1)具体操作为，将所述内标物溶液、所述植物样本和预冷至-20～4℃优选-10～0℃的亲水性有机溶剂混合并降温至-80～-10℃优选-60～-40℃，放入研磨机中以40～80Hz优选60Hz频率研磨粉碎1～4min优选2min，并用冰水浴超声提取20～40min优选30min。5.如权利要求2～4任一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述亲脂性有机溶剂为氯仿、乙醚和/或乙酸乙酯，所述亲水性有机溶剂:所述亲脂性有机溶剂:水的体积比为1:0.4～0.6:0....

【专利技术属性】
技术研发人员：白娴，舒烈波，彭章晓，杨卓，郭峻杰，
申请(专利权)人：上海青鹿投资有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31