一种氨基代谢物的测定方法技术

本发明专利技术公开了一种氨基代谢物的测定方法，其特征在于，对于10～20μl待测样品进行如下处理：(1)样品前处理；(2)还原处理：向前处理样品溶液中加入含有1～20mM三(2‑羧乙基)膦的硼酸缓冲溶液700～1400μl，得到还原后的样品溶液；(3)衍生化处理：向还原后的样品溶液加入衍生化试剂，衍生化氨基代谢物，固液分离其液相即衍生化样品溶液；(4)UPLC‑MS/MS检测：将衍生化样品溶液，用UPLC‑MS/MS方法多反应监测模式进行检测。本发明专利技术能够取得全面快速、可一次性检出还原型RSH和氧化型RSSR及检测限低灵敏度高等有益效果，尤其是在检测的广泛性和灵敏度方面实现质的飞跃。

【技术实现步骤摘要】
201610424377

【技术保护点】
一种氨基代谢物的测定方法，其特征在于，对于10～20μl待测样品进行如下处理：(1)样品前处理：(1‑1)向待检测的生物样品中加入浓度为1～5mM的N‑乙基马来酰亚胺(NEM)磷酸缓冲溶液80～200μl，混匀室温反应1min至5min使得N‑乙基马来酰亚胺与含自由巯基的氨基代谢物发生加成反应获得生物样品溶液；(1‑2)向步骤(1‑1)中获取的生物样品溶液中加入浓度为0.1～1M的4‑叔丁基苯硫酚的二甲基亚砜溶液或乙腈溶液10～20μl，室温反应1min至3min，去除生物样品溶液中多余的N‑乙基马来酰亚胺，得到前处理样品溶液；(2)还原处理：向步骤(1‑2)中获取的前处理样品溶液中加入含有1～20mM三(2‑羧乙基)膦的硼酸缓冲溶液700～1400μl，得到还原后的样品溶液；(3)衍生化处理：向步骤(2)中获得的还原后的样品溶液加入衍生化试剂，衍生化氨基代谢物，固液分离其液相即衍生化样品溶液；(4)UPLC‑MS/MS检测：将步骤(3)获得的衍生化样品溶液，用UPLC‑MS/MS方法多反应监测模式进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种氨基代谢物的测定方法，其特征在于，对于10～20μl待测样品进行如下处理：(1)样品前处理：(1-1)向待检测的生物样品中加入浓度为1～5mM的N-乙基马来酰亚胺(NEM)磷酸缓冲溶液80～200μl，混匀室温反应1min至5min使得N-乙基马来酰亚胺与含自由巯基的氨基代谢物发生加成反应获得生物样品溶液；(1-2)向步骤(1-1)中获取的生物样品溶液中加入浓度为0.1～1M的4-叔丁基苯硫酚的二甲基亚砜溶液或乙腈溶液10～20μl，室温反应1min至3min，去除生物样品溶液中多余的N-乙基马来酰亚胺，得到前处理样品溶液；(2)还原处理：向步骤(1-2)中获取的前处理样品溶液中加入含有1～20mM三(2-羧乙基)膦的硼酸缓冲溶液700～1400μl，得到还原后的样品溶液；(3)衍生化处理：向步骤(2)中获得的还原后的样品溶液加入衍生化试剂，衍生化氨基代谢物，固液分离其液相即衍生化样品溶液；(4)UPLC-MS/MS检测：将步骤(3)获得的衍生化样品溶液，用UPLC-MS/MS方法多反应监测模式进行检测。2.如权利要求1所述的氨基代谢物的测定方法，其特征在于，步骤(1-1)所述磷酸缓冲溶液含有质量分数8％～15％的二甲基亚砜。3.如权利要求2所述的氨基代谢物的测定方法，其特征在于，步骤(1-1)所述磷酸缓冲溶液含有1～10mM的抗坏血酸和/或1～10mM的乙二胺四乙酸。4.如权利要求1所述的氨基代谢物的测定方法，其特征在于，步骤(1-2)
\t中加入的4-叔丁基苯硫酚与N-乙基马来酰亚胺的摩尔比在5:1至100:1之间。5.如权利要求1所述的氨基代谢物的测定方法，其特征在于，步骤(2)所述硼酸缓冲溶液pH值在8至9之间，硼酸根浓度为200mM，含有1～20mM的抗坏血酸。6.如权利要求1所述的氨基代谢物的测定方法，其特征在于，步骤(3)所述衍生...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐惠儒，王瑾，王玉兰，
申请(专利权)人：博莱克科技武汉有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42