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一种易保存生物羊膜的制备方法技术

技术编号:13510097 阅读:124 留言:0更新日期:2016-08-11 12:01
本发明专利技术公开了一种易保存生物羊膜的制备方法,属于生物羊膜制备领域。本发明专利技术将羊膜清洗酶解,过滤后加入甘油浸泡,并用生理盐水冲洗,得粗生物羊膜,之后取壳聚糖和无菌水,混合加入磷酸溶液,茶多酚、酪蛋白以及过硫酸铵,再次混合加热并加入甲壳素,得混合液,随后将得到的粗生物羊膜浸泡混合液中,通过微波反应,冲洗过滤,置于无菌净化间自然晾干,从而得到易保存生物羊膜的制备方法。实例证明,本发明专利技术操作工艺简便,无需特殊仪器,不仅克服了现有羊膜材料较薄,机械强度较差,易撕裂的缺陷,而且制得的生物羊膜无生物学毒性,具有较好的相容组织性,可在常温下长期保存,保存时间延长至3~5年,使用方便,可规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种易保存生物羊膜的制备方法,属于生物羊膜制备领域。
技术介绍
羊膜由于自身独有的特性受到国内外学者关注,羊膜是指人类胎盘的基底膜层,是无血管、无细胞结构的胶原组织层,富含IV、V型胶原、碱性成纤维细胞生长因子(BFGF)、干细胞生长因子(HGF),易使上皮细胞移行长入、促进上皮的分化、增殖,在上皮创伤愈合中起重要作用。羊膜含各种蛋白抑制因子,通过抑制相应蛋白酶而发挥抗炎作用。同时还含有抑制细胞因子表达和调节细胞凋亡成分TGF-β1,可避免胶原纤维过度增生,预防粘连。作为一种新的生物材料,近年来国内外临床上广泛用于烧伤创面及眼科疾病的辅助治疗,其疗效非常显著。目前,人羊膜主要用于外科手术中,其中包括:1、眼睛表面疾病如角膜修复、先天性青光眼、角膜溃疡等;2、修补鼓膜损伤;3、用于疝修补;4、外科手术后预防粘连;5、烧伤后表面覆盖,用作生物敷料。传统制备得到的羊膜材料比较薄、易卷曲、黏附性较差、使用时易滑动脱落。为了克服上述缺点,目前采用交联技术制备复合生物衍生羊膜以改善其可操作性,但处理时使用了氯仿、甲醇、戊二醛等多种有机试剂,处理强度大,经过脱脂等多个步骤后对羊膜的天然结构破坏很大,造成胶原束排列不规则,胶原纤维断裂,同时大量的生物活性因子失活试剂残留风险高。目前临床上采用的羊膜主要为临时剥离处理的新鲜羊膜,或者经过预处理的深低温保存羊膜。两者均不能做到随取随用。目前还有一种技术是将羊膜预处理后真空冷冻干燥,灭菌包装储存,该种方式能够做到随取随用,延长保存期到1~3年。但这种羊膜材料极少能完全取出细胞等抗原成分,因此仍具有一定的抗原性,有可能在使用时引发炎症。单层的羊膜或羊膜材料较薄,机械强度较差,易撕裂,手术中操作困难,不利于临床使用和研究。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问题:针对目前普遍使用的新鲜羊膜,不利于保存,使用时不方便,且羊膜材料较薄,机械强度较差,易撕裂,导致手术中操作困难的现状,提供了一种将羊膜清洗酶解,过滤后加入甘油浸泡,并用生理盐水冲洗,得粗生物羊膜,之后取壳聚糖和无菌水,混合加入磷酸缓冲溶液,茶多酚、酪蛋白以及过硫酸铵,再次混合加热并加入甲壳素, 得混合液,随后将得到的粗生物羊膜浸泡混合液中,通过微波反应,冲洗过滤,置于无菌净化间自然晾干,从而得到易保存生物羊膜的制备方法。该方法操作工艺简便,无需特殊仪器,不仅克服了现有羊膜材料较薄,机械强度较差,易撕裂的缺陷,而且制得的生物羊膜无生物学毒性,具有较好的相容组织性,可在常温下长期保存,保存时间延长至3~5年,使用方便,可规模化生产,广泛应用于各种外科手术中。为了解决上述技术问题,本专利技术所采用的技术方案是:(1)取新鲜羊膜,使用水将其表面清洗干净,将清洗后的羊膜浸泡于质量分数为4~6%乳酸溶液中,并置于超声振荡器中,在23~25KHz下振荡50~70min后进行过滤,使用蒸馏水淋洗羊膜表面,直至淋洗液pH为7.0,将淋洗后羊膜与羊膜质量3~5%胰蛋白酶,搅拌均匀,在30~35℃下酶解5~7h;(2)待上述酶解结束后进行过滤,收集酶解后的羊膜,将笛膜平铺于冰块表面,将酶解后的羊膜平铺于笛膜表面,羊膜下皮面朝下,使用细胞刮子将羊膜上的表面杂质去除,随后将去除杂质后的羊膜浸泡于甘油中,于4~6℃下,静置脱水过夜,再进行过滤,使用生理盐水将过滤后的羊膜冲洗5~7次,得粗生物羊膜,备用;(3)按固液比1:3,取壳聚糖与无菌水搅拌均匀,放入玻璃容器中,再向玻璃容器中加入pH为4.5的磷酸缓冲溶液,加入量为无菌水体积的30~40%,搅拌均匀并静置10~15min,分别向玻璃容器中加入壳聚糖质量50~60%茶多酚、壳聚糖质量1~3%酪蛋白及酪蛋白质量10~15%的过硫酸铵;(4)在上述物质加入后,对玻璃容器进行加热至50~60℃,以150r/min搅拌4~7h后,向其中加入上述壳聚糖质量2~4%甲壳素,搅拌均匀,将步骤(3)所得的粗生物羊膜放入玻璃容器中,使其完全浸泡于玻璃容器中的混合物中,随后将玻璃容器移至微波反应器中10~12h,再进行过滤,使用生理盐水冲洗过滤后的羊膜5~7次,将冲洗后的羊膜置于无菌净化间内,自然晾干,即可得到易保存生物羊膜。本专利技术的应用方法是:选取3~5只健康小老鼠,消毒后经乙醚麻醉,切开背部皮肤2~3cm,植入长(cm)×宽(cm)为0.5×1.0~0.8×1.0本专利技术制得的生物羊膜,缝合,消毒,术后观察7~14天,可发现伤口无任何感染,创面愈合良好,植入物周围物任何积液、化脓现状,具有显著的组织相容性,可作为医用材料广泛用于各种外科手术中。 本专利技术的有益效果是:(1)本专利技术操作工艺简便,在制备的过程中无需特殊仪器,反应温和,制得的生物羊膜无生物学毒性,具有较好的相容组织性,且机械强度大,不易撕裂;(2)本专利技术制得的生物羊膜可在常温下长期保存,保存时间延长至3~5年,使用方便,可规模化生产,广泛应用于各种外科手术中。具体实施方式首先取新鲜羊膜,使用水将其表面清洗干净,将清洗后的羊膜浸泡于质量分数为4~6%乳酸溶液中,并置于超声振荡器中,在23~25KHz下振荡50~70min后进行过滤,使用蒸馏水淋洗羊膜表面,直至淋洗液pH为7.0,将淋洗后羊膜与羊膜质量3~5%胰蛋白酶,搅拌均匀,在30~35℃下酶解5~7h;待上述酶解结束后进行过滤,收集酶解后的羊膜,将笛膜平铺于冰块表面,将酶解后的羊膜平铺于笛膜表面,羊膜下皮面朝下,使用细胞刮子将羊膜上的表面杂质去除,随后将去除杂质后的羊膜浸泡于甘油中,于4~6℃下,静置脱水过夜,再进行过滤,使用生理盐水将过滤后的羊膜冲洗5~7次,得粗生物羊膜,备用;随后按固液比1:3,取壳聚糖与无菌水搅拌均匀,放入玻璃容器中,再向玻璃容器中加入pH为4.5的磷酸缓冲溶液,加入量为无菌水体积的30~40%,搅拌均匀并静置10~15min,分别向玻璃容器中加入壳聚糖质量50~60%的茶多酚、壳聚糖质量1~3%的酪蛋白及酪蛋白质量10~15%的过硫酸铵;最后在上述物质加入后,对玻璃容器进行加热至50~60℃,以150r/min搅拌4~7h后,向其中加入上述壳聚糖质量2~4%的甲壳素,搅拌均匀,将上述所得的粗生物羊膜放入玻璃容器中,使其完全浸泡于玻璃容器中的混合物中,随后将玻璃容器移至微波反应器中10~12h,再进行过滤,使用生理盐水冲洗过滤后的羊膜5~7次,将冲洗后的羊膜置于无菌净化间内,自然晾干,即可得到易保存生物羊膜。实例1首先取新鲜羊膜,使用水将其表面清洗干净,将清洗后的羊膜浸泡于质量分数为4%乳酸溶液中,并置于超声振荡器中,在23KHz下振荡50min后进行过滤,使用蒸馏水淋洗羊膜表面,直至淋洗液pH为7.0,将淋洗后羊膜与羊膜质量3%胰蛋白酶,搅拌均匀,在30℃下酶解5h;待上述酶解结束后进行过滤,收集酶解后的羊膜,将笛膜平铺于冰块表面,将酶解后的羊膜平铺于笛膜表面,羊膜下皮面朝下,使用细胞刮子将羊膜上的表面杂质去除,随后将去除杂质后的羊膜浸泡于甘油中,于4℃下,静置脱水过夜,再进行过滤,使用生理盐水将过滤后的羊膜冲洗5次,得粗生物羊膜,备用;随后按固液比1:3,取壳聚糖与无菌水搅拌均匀,放入玻璃容器中,再向玻璃容器中加入pH为4.5的磷酸缓冲溶液,加入量为本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种易保存生物羊膜的制备方法,其特征在于具体制备步骤为:(1)取新鲜羊膜,使用水将其表面清洗干净,将清洗后的羊膜浸泡于质量分数为4~6%乳酸溶液中,并置于超声振荡器中,在23~25KHz下振荡50~70min后进行过滤,使用蒸馏水淋洗羊膜表面,直至淋洗液pH为7.0,将淋洗后羊膜与羊膜质量3~5%胰蛋白酶,搅拌均匀,在30~35℃下酶解5~7h;(2)待上述酶解结束后进行过滤,收集酶解后的羊膜,将笛膜平铺于冰块表面,将酶解后的羊膜平铺于笛膜表面,羊膜下皮面朝下,使用细胞刮子将羊膜上的表面杂质去除,随后将去除杂质后的羊膜浸泡于甘油中,于4~6℃下,静置脱水过夜,再进行过滤,使用生理盐水将过滤后的羊膜冲洗5~7次,得粗生物羊膜,备用;(3)按固液比1:3,取壳聚糖与无菌水搅拌均匀,放入玻璃容器中,再向玻璃容器中加入pH为4.5的磷酸缓冲溶液,加入量为无菌水体积的30~40%,搅拌均匀并静置10~15min,分别向玻璃容器中加入壳聚糖质量50~60%茶多酚、壳聚糖质量1~3%酪蛋白及酪蛋白质量10~15%的过硫酸铵;(4)在上述物质加入后,对玻璃容器进行加热至50~60℃,以150r/min搅拌4~7h后,向其中加入上述壳聚糖质量2~4%甲壳素,搅拌均匀,将步骤(3)所得的粗生物羊膜放入玻璃容器中,使其完全浸泡于玻璃容器中的混合物中,随后将玻璃容器移至微波反应器中10~12h,再进行过滤,使用生理盐水冲洗过滤后的羊膜5~7次,将冲洗后的羊膜置于无菌净化间内,自然晾干,即可得到易保存生物羊膜。...

【技术特征摘要】
1.一种易保存生物羊膜的制备方法,其特征在于具体制备步骤为:(1)取新鲜羊膜,使用水将其表面清洗干净,将清洗后的羊膜浸泡于质量分数为4~6%乳酸溶液中,并置于超声振荡器中,在23~25KHz下振荡50~70min后进行过滤,使用蒸馏水淋洗羊膜表面,直至淋洗液pH为7.0,将淋洗后羊膜与羊膜质量3~5%胰蛋白酶,搅拌均匀,在30~35℃下酶解5~7h;(2)待上述酶解结束后进行过滤,收集酶解后的羊膜,将笛膜平铺于冰块表面,将酶解后的羊膜平铺于笛膜表面,羊膜下皮面朝下,使用细胞刮子将羊膜上的表面杂质去除,随后将去除杂质后的羊膜浸泡于甘油中,于4~6℃下,静置脱水过夜,再进行过滤,使用生理盐水将过滤后的羊膜冲洗5~7次,得粗生物羊膜,备用;(3)按固液比...

【专利技术属性】
技术研发人员:郭迎庆张明宋奇
申请(专利权)人:郭迎庆
类型:发明
国别省市:江苏;32

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