在治疗尘螨过敏症中的肽组合及其用途制造技术

本发明专利技术涉及肽或其变体的组合，其中所述的肽或其变体衍生自房尘螨过敏原(例如过敏原Der p 1、Der f 1、Der p 2和/或Der f 2)的氨基酸序列的一部分。此类肽包含至少一种T细胞表位，并且在全世界的人群中，极大量的患者都具有潜在地与所述的肽的组合中的肽结合的HLA等位基因。本发明专利技术还涉及此类肽的组合在减轻由尘螨导致的免疫应答中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及由房尘螨过敏原衍生的肽的组合物，使用这种调控免疫应答的组合物的方法，用于治疗受试对象的过敏反应和/或在受试对象中诱导或促进免疫耐受，以及诊断方法和试剂盒。
技术介绍
对尘螨的过敏症影响了世界大部分地区的人群。最普通的尘螨是欧洲房尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)和美洲房尘螨(Dermatophagoides farinae)，它们分别包含主要过敏原Der p 1/Der p 2和Der f 1/Der f 2。其他普通的尘螨在世界的亚热带/热带地区发现，例如包含主要过敏原过敏原Blo t 1和Blo t 2的热带无爪螨(Blomiatropicalis)和包含主要过敏原过敏原Eur m 1和Eur m 2的埋内欧螨(Euroglyphusmaynei)。目前，使用基于完全的、完整的或修饰的过敏原的过敏原特异性免疫疗法产品实施尘螨过敏症的治疗，其中所述的产品通常以由尘螨制得的复合提取物的形式施用。通常，通过皮下注射或通过舌下途径在延长的时期内(通常是几个月或几年)将所述的产品施用受试对象，并且目前认为所述的产品诱导了受试对象的“耐受”状态。认为其作用机制涉及IgG抑制抗体的诱导、巨细胞/嗜碱细胞反应性的抑制、T细胞应答的抑制、T细胞无反应性的促进、和/或克隆清除，并且就长期而言，降低过敏原特异性IgE的水平。不幸的是，过敏原特异性免疫疗法具有IgE介导的不利事件的风险，包括严重的过敏反应。因此，与实际上已经证明所述的治疗的有利作用不同，该治疗并未广泛地提供给过敏受试对象。近年来，已经表明使用过敏原(例如主要过敏原)的一级氨基酸序列的较小的片段(肽)治疗过敏症，其中所述的片段包含被调控过敏反应的T细胞识别的一个或多个表位。这种概念被称为肽免疫疗法(PIT)，其中通过皮内注射将重复剂量的肽施用受试对象(Moldaver and Larche 2011)。在分子水平上，更具体而言，肽被抗原提呈细胞(APC)表面上的II类人类白细胞抗原(HLA)结合。随后，这种肽-HLA复合物被T细胞的细胞表面上的特异性T细胞受体识别，其中所述的T细胞在于APC相互作用时被活化。肽基免疫疗法和基于全长过敏原的治疗的主要差异在于认为这种相互作用在未引起伴随的抗体介导的“危险信号”情况下发生。在更耐受的方向下，认为上述情况驱动了T细胞应答。肽基免疫疗法(PIT)代表了过敏原提取物的潜在的有吸引力的备选方法，其比现有的治疗具有更有利的安全性/耐受性概况和明显更短的治疗方案。与基于完整的过敏原的治疗相反，由于肽比过敏原的尺寸更小而缺乏抗体的表位的原因，所以PIT单独地解决了免疫系统的T细胞隔间(compartment)，而不会引起现有的抗体应答。因此，预计没有IgE介导的不利事件，但是当使用传统的过敏原基免疫疗法产品治疗过敏症时经常见到这种不利事件。目前，肽免疫疗法处于临床研发中，并且似乎具有超过完全过敏原基疫苗的有利的安全性概况。但是，使用包含T细胞表位的肽的缺点与各种肽仅结合人群中天然形成的II类HLA分子的子集的这种限制有关。因此，涵盖不同的II类HLA等位基因的多种肽的混合物强制性地形成广泛起作用的免疫疗法过敏症的治疗。由于这种II类HLA等位基因的清单在人与人之间以及一个种群与另一个种群之间是不同的，所以具有挑战的是提供可以向世界上任何地理区域的过敏受试对象提供肽基免疫疗法，而并非在疫苗中包含大量的肽。考虑到新疫苗的临床研发中的巨大成本和风险，以及管理结构对毒性检验、剂量调节、安全性和效力试验满足高标准的要求增加，理想的是提供包含尽可能较少的肽的肽疫苗，但是同时能够使用该免疫疗法产品治疗全世界人群中大多数的尘螨过敏受试对象。此类产品应该包含肽的组合，所述的肽能够以组合方式结合全世界的II类HLA等位基因清单，并且所得的肽-HLA复合物在受试对象中应该识别为T细胞表位，从而诱导耐受性免疫应答。近来，小鼠中的研究表明单独使用一种肽的肽免疫疗法不能降低过敏气道炎症的严重性，但是至少需要使用2种肽治疗小鼠，其中所述的肽与待治疗的小鼠的MHC分子匹配(Mackenzie KJ et al2013)。各个国际专利申请WO93/08280、WO94/24281、WO95/28424、WO2009/022156、WO95/28424和WO2010/018384，以及美国申请US20130302338涉及房尘螨过敏原的肽，以及它们在治疗房尘螨过敏症中的用途。专利技术概述本专利技术人发现组装由几种肽(例如3种、4种、5种或6种肽)组成的肽组合是可行的，所述的肽组合具有覆盖极大部分世界人群的II类HLA等位基因清单，并且在对防尘满过敏的极大部分供者人群中还产生T细胞应答。本专利技术提供了多种包含肽组合的组合物，其中所述的肽组合具有高的世界II类HLA等位基因覆盖率。如本文所公开，此类肽组合可以通过以下过程组装：首先提供一组包含T细胞表位的肽(例如如实施例3中所公开)，然后评估包含单个T细胞表位的肽(例如如实施例10中所公开)的II类HLA等位基因覆盖率，接着将多种肽与不同的HLA等位基因结合，从而覆盖世界人群的II类HLA等位基因清单(例如如实施例6中所公开)，然后在合格的供者人群中(例如实施例2中所公开)证实所提出的肽组合在大部分的人群中能够产生T细胞应答(例如实施例7中所公开)。因此，本文提供了在对房尘螨过敏原的过敏症的治疗中，用作“过敏症疫苗”的肽的组合(在下文中还称为“肽组合”或“肽混合物”)，所述的肽的组合适合用于大部分的世界人群。针对本文公开的肽组合所选择的肽衍生自房尘螨过敏原Der p 1、Der p 2、Der f 1和Der f 2、以及可任选的Der p 4中的一种或多种，并且显示在许多供者中产生T细胞应答，并具有令人满意的高的世界II类HLA覆盖率。应该理解的是本文公开的肽组合的肽主要是衍生自不同地区的房尘螨过敏原的不同的肽，可任选地其中一种不同的肽的氨基酸残基与另一种不同的肽的一些氨基酸残基重叠，例如与少于13个(例如少于12、11、10或9)氨基酸残基重叠。表9和10报告了显示在大部分的供者人群中产生T细胞应答的肽(“高应答者肽”—由图1至8得到)，并且其中多种肽由多组不同的肽中收集得到。因此，在第一个方面中，本专利技术涉及包含至少3种肽的组合物，其中所述的组合物包含选自以下肽组的至少3个组的肽：组26：氨基酸序列SEQ ID NO:82(pep-110)、269(pep-125)、70(pep-099)或253(pep-012)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ ID NO:223、247、224、248)；组24：氨基酸序列SEQ ID NO:271(pep-131)、67(pep-096)、79(pep-108)、256(pep-031)或270(pep-126)的亲本肽；或者其变体(例如SEQ IDNO:279、241)；组14：氨基酸序列SEQ ID NO:268(pep-130)或22(pep-054)的亲本肽；或者其变体；组1：氨基酸序列SEQ ID NO:90的亲本肽；或者其变体；组2：氨基酸序列SEQ ID NO:280的亲本肽；或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含至少3种肽的组合物，其中所述的组合物包含选自以下肽组的至少3组的肽：组26：氨基酸序列SEQ ID NO:82、269、70或253的亲本肽，或其变体；组24：氨基酸序列SEQ ID NO:271、67、79、256或270的亲本肽，或其变体；组14：氨基酸序列SEQ ID NO:268或22的亲本肽，或其变体；组1：氨基酸序列SEQ ID NO:90的亲本肽，或其变体；组2：氨基酸序列SEQ ID NO:280的亲本肽，或其变体；组3：氨基酸序列SEQ ID NO:9的亲本肽，或其变体；组4：氨基酸序列SEQ ID NO:10的亲本肽，或其变体；组5：氨基酸序列SEQ ID NO:11的亲本肽，或其变体；组6：氨基酸序列SEQ ID NO:12的亲本肽，或其变体；组7：氨基酸序列SEQ ID NO:42或249的亲本肽，或其变体；组8：氨基酸序列SEQ ID NO:15的亲本肽，或其变体；组9：氨基酸序列SEQ ID NO:266、255、46或17的亲本肽，或其变体；组10：氨基酸序列SEQ ID NO:18、258或267的亲本肽，或其变体；组11：氨基酸序列SEQ ID NO:120的亲本肽，或其变体；组12：氨基酸序列SEQ ID NO:20或49的亲本肽，或其变体；组13：氨基酸序列SEQ ID NO:21的亲本肽，或其变体；组15：氨基酸序列SEQ ID NO:52或23、272的亲本肽，或其变体；组16：氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽，或其变体；组17：氨基酸序列SEQ ID NO:29、58、251或252的亲本肽，或其变体；组18：氨基酸序列SEQ ID NO:71的亲本肽，或其变体；组19：氨基酸序列SEQ ID NO:72的亲本肽，或其变体；组20：氨基酸序列SEQ ID NO:61、73或276的亲本肽，或其变体；组21：氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽，或其变体；组22：氨基酸序列SEQ ID NO:63或278的亲本肽，或其变体；组23：氨基酸序列SEQ ID NO:77的亲本肽，或其变体；以及组25：氨基酸序列SEQ ID NO:81的亲本肽，或其变体...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.23 US 61/919,925;2014.06.16 US 62/012,6901.一种包含至少3种肽的组合物，其中所述的组合物包含选自以下肽组的至少3组的肽：组26：氨基酸序列SEQ ID NO:82、269、70或253的亲本肽，或其变体；组24：氨基酸序列SEQ ID NO:271、67、79、256或270的亲本肽，或其变体；组14：氨基酸序列SEQ ID NO:268或22的亲本肽，或其变体；组1：氨基酸序列SEQ ID NO:90的亲本肽，或其变体；组2：氨基酸序列SEQ ID NO:280的亲本肽，或其变体；组3：氨基酸序列SEQ ID NO:9的亲本肽，或其变体；组4：氨基酸序列SEQ ID NO:10的亲本肽，或其变体；组5：氨基酸序列SEQ ID NO:11的亲本肽，或其变体；组6：氨基酸序列SEQ ID NO:12的亲本肽，或其变体；组7：氨基酸序列SEQ ID NO:42或249的亲本肽，或其变体；组8：氨基酸序列SEQ ID NO:15的亲本肽，或其变体；组9：氨基酸序列SEQ ID NO:266、255、46或17的亲本肽，或其变体；组10：氨基酸序列SEQ ID NO:18、258或267的亲本肽，或其变体；组11：氨基酸序列SEQ ID NO:120的亲本肽，或其变体；组12：氨基酸序列SEQ ID NO:20或49的亲本肽，或其变体；组13：氨基酸序列SEQ ID NO:21的亲本肽，或其变体；组15：氨基酸序列SEQ ID NO:52或23、272的亲本肽，或其变体；组16：氨基酸序列SEQ ID NO:26的亲本肽，或其变体；组17：氨基酸序列SEQ ID NO:29、58、251或252的亲本肽，或其变体；组18：氨基酸序列SEQ ID NO:71的亲本肽，或其变体；组19：氨基酸序列SEQ ID NO:72的亲本肽，或其变体；组20：氨基酸序列SEQ ID NO:61、73或276的亲本肽，或其变体；组21：氨基酸序列SEQ ID NO:62的亲本肽，或其变体；组22：氨基酸序列SEQ ID NO:63或278的亲本肽，或其变体；组23：氨基酸序列SEQ ID NO:77的亲本肽，或其变体；以及组25：氨基酸序列SEQ ID NO:81的亲本肽，或其变体2.根据权利要求1所述的组合物，其中至少一种肽选自所述的肽组1-17中的任意一组。3.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中至少一种肽选自所述的肽组18-26中的任意一组。4.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中所述的至少3种肽选自所述的肽组4、5、6、9、10、13、14、15、16、17、20、21、24、25和26的中的3组。5.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中所述的至少3种肽选自所述的肽组9、10、13、14、16、20、21、24、25和26的中的3组。6.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物包含选自所述的肽组1-26的任意一组的附加的肽，其中在所述的组合物中不包含选自上述肽组的其他的肽。7.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物不包含得自所述的肽组7和/或肽组20的肽。8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述的组合物不包含得自所述的肽组7、20和17的各组的肽作为所述肽中的3种。9.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽作为所述肽中的1种。10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组1-17的任意一组的肽作为所述肽中的1种。11.根据上述权利要求的任意一项所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽作为所述肽中的1种，并且包含选自所述的肽组24、17、9或16的任意一种的肽作为所述肽中的1种。12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述的组合物包含得自所述的肽组26的肽和得自所述的肽组24的肽作为所述肽中的2种。13.根据权利要求12所述的组合物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·伦德迦德，L·H·克里斯坦森，P·A·维岑，A·赛特，J·西德尼，G·兰德，
申请(专利权)人：爱尔开阿贝优公司，拉霍拉敏感及免疫学研究所，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK