一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法技术

本发明专利技术提供一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法，目的在于提高海带诱变率，使海带产生的遗传变异个体增多，从而有效提高筛选的效率。本发明专利技术的方法的紫外辐射的功率是波长2537Å，照射时间为40s。本发明专利技术利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变，使诱变的海带在低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率，从而获得产生突变的个体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于海藻良种培育
，具体设及一种紫外线诱变培育海带品系的方 法。
技术介绍
海带是具异型世代交替的大型经济褐藻，其生活史包括短期的配子体和长期的抱 子体阶段，成熟海带抱子体放散产生游抱子，游抱子附着后发育为雌、雄配子体，而配子体 分别产生精卵，卵子受精形成合子，合子发育为幼抱子体。 我国从50年代开始进行海带养殖，目前海带养殖业是我国海水养殖业的支柱产 业，海带品种选育技术也得到较大发展，射线诱变育种也应用过，在上个世纪科研人员利用 X射线诱变培育了 "1170"海带，还有研究化-Ne激光和紫外线对海带雌配子体的影响的报 道，但运种办法应用很少，主要原因在于诱变率低，导致筛选成本高，针对运个问题，本专利 提供一种方法解决运个问题。
技术实现思路
本专利技术提供，目的在于提高海带诱变 率，使海带产生的遗传变异个体增多，从而有效提高筛选的效率。 本专利技术的方法，包括如下的步骤： 1)准备诱变种质材料 选择作为诱变亲本的海带，分离海带配子体;并将配子体进行扩增培养；[000引 2)诱变前处理 收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体，培养的光照强度为25001X，溫度为10 。。 3)诱变处理 在诱变处理前7d，将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段，将雌、雄配子体用双层500 目筛絹过滤，使配子体留在筛絹上，再用灭菌海水洗到相应容器中，加入苗帘，再加入Icm深 的海水，置于8-12°C的环境中，进行紫外福射;福射光源的功率是波长2537没，15W紫外线灯 管2支，灯管距离海水表面30cm，照射时间为40s;照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖 并用黑纸包好，24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养;培养条件为：光照 25001X，光周期12h;溫度10°C ;海水中加 NaN〇3和K也P〇4，添加浓度为N-4mg/L，P-0.4mg/l; 待有合子形成，则将苗帘的水倒掉，加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态，采用 上述福射条件再进行紫外照射，2地后重复操作一次； 4)诱变苗种的养殖 把步骤3)中筛选的苗帘进行培育，培育条件为:光照为2000-25001X，溫度为8-12 °C，每3天换=分之一低溫灭菌海水;待发育至8列细胞W上的幼抱子体时，进行流水培育； 最后转移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。 所述的性状包括有： 1)表观性状检测:每2个月检测1次全部海带性状，包括长度、宽度、中带部宽和厚 度，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10 %的海带个体； 2)品质性状检测：在海带成熟期，取梢部部分藻体，测定褐藻胶、甘露醇和舰等品 质性状指标，与养殖群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10%的海带个体。 本专利技术利用紫外线对海带父母本的配子体和合子阶段进行诱变，使诱变的海带在 低剂量紫外照射的情况下获得最大的突变率，从而获得产生突变的个体。【具体实施方式】 海带的生活史有明显的世代交替，包括长期的抱子体和短期的配子体世代，两者 差别很大，抱子体大而有组织的分化，配子体只有十几个细胞。抱子体成熟时，产生很多游 动抱子。游抱子附着12-14d后萌发为雌、雄配子体。雌配子体成熟时卵排出，卵在母体外受 精，形成二倍的合子。合子几日后即萌发为新的海带。下面就实施例对
技术实现思路
做具体描 述。 实施例1:诱变条件的筛选 所做实验分为3组，分别是未作紫外福射组、只福射配子体组和按照本方法处理 组。 1、材料[002引1)种质材料准备 选择长海带和真海带分别作为父本和母本，记录海带父本和母本数量特征，包括 长度、宽度、厚度、中带部宽，W及藻体外形特征，包括梢部形状、基部形状W及藻体颜色等。 选用专利(ZL 2013 1 0225745.3)的方法分离海带种质并分雌、雄单独培养，使其营养生 长。 待长到0.1 g左右，进行扩增培养至实验所需要的量，其条件是:0.1 Og的起始重量、 用组织粉碎机粉碎后，经300目筛絹过滤，放入IL锥形瓶中，锥形瓶内加入800ml的消毒海 水，海水中加化N03和KH2PO4,添加浓度为N-10mg/L，P-lmg/L。光照周期为12h，强度为 20001x〇水溫 14°C。 2)诱变处理诱变处理前7d，再用组织粉碎机粉碎雌、雄配子体后，经300目筛絹过滤，将光照调 整为25001X，溫度为10°C。然后将雌、雄配子体用双层500目筛絹过滤，使配子体留在筛絹 上，再用少量灭菌低溫海水洗到相应容器中，保持少量水分。紫外福射诱变的条件：照射时 间分为5秒、10秒、20秒、40秒、1分、2分共6个时间剂量级。照射处理是在洁净工作台中进行 的，照射距离为30厘米。照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖并用黑纸包好，24小时后 去掉黑纸转入实验室培养。诱变后第3d对存活的细胞进行统计，在倒置显微镜10倍物镜下 (X 100)，随机挑选10个视野，颜色保持褐色的记为存活的，统计存活的数目，致死率（％ )= (1-存活的细胞数目/总细胞数目）X 100%。选用每个视野中细胞平均死亡率60-70%的20s 处理组。选用完处理组后，将相应的雌、雄配子体按照质量比3:1混合分别泼洒在6个苗帘 上，苗帘周围放置2-3个玻片，继续培养，其条件为:光照25001X，光周期12h;溫度1 (TC ;海水 中加 NaN〇3 和 K出 P〇4，添加浓度为 N-4mg/L，P-0.4mg/L。 福射完约5d后每天镜检玻片，如果发现有合子形成，则将苗帘的水倒掉，留取少量 海水使苗帘保持湿润状态，选用与上述相同的福射条件再照射一次，24h后重复操作一次， 目的在于使大部分合子受到福射。7d后统计合子细胞死亡率，选用40s处理组，此组的死亡 率为50 %-55 %，相应表明突变率更高。 实施例2 诱变苗种的养殖 把诱变后的苗帘进行培育，培育条件为:光照为2000-25001X，溫度为8-12°C，每3 天换=分之一低溫灭菌海水;待发育至8列细胞W上的幼抱子体时，进行流水培育；最后转 移至海上养殖;再进行性状检测筛选突变体。 所述的性状包括有： 到海带成熟期检测海带性状，包括长度、宽度、中带部宽和厚度，与对比组的杂交 群体作对照，标记出某一性状大于养殖群体的10% W上的海带个体； 各获得海带10绳，分别是320株、310株和330株，统计结果，平均长度3.3m±0.3m， 平均宽度35cm±0.6cm;同时发现，有2株海带的长度性状较突出，长度达到3.89m和3.92m， 长度分别提高18%和19% ;2株海带的长度和宽度都达到3.83m和40.6cm，提高16%。有些海 带厚度和成熟期发生了不同程度的改变，性状发生变化的总体比例在25%。【主权项】1. ，其特征在于，所述的方法包括如下的步 骤： 1) 准备诱变种质材料 选择作为诱变亲本的海带，分离海带配子体;并将配子体进行扩增培养； 2) 诱变前处理 收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体，培养的光照强度为25001x，温度为10°C; 3) 诱变处理 在诱变处理前7d，将雌、雄配子体粉碎至5-10个细胞段，将雌、雄配子体用双层500目筛 絹过滤，使配子体留在筛絹上，再用灭菌海水洗到相应容器中，加入苗帘，再加入lc本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用紫外线诱变培育海带品系的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)准备诱变种质材料选择作为诱变亲本的海带，分离海带配子体；并将配子体进行扩增培养；2)诱变前处理收集步骤1)扩增培养获得的的雌、雄配子体，培养的光照强度为2500lx，温度为10℃；3)诱变处理在诱变处理前7d，将雌、雄配子体粉碎至5‑10个细胞段，将雌、雄配子体用双层500目筛绢过滤，使配子体留在筛绢上，再用灭菌海水洗到相应容器中，加入苗帘，再加入1cm深的海水，置于8‑12℃的环境中，进行紫外辐射；辐射光源的功率是波长15W紫外线灯管2支，灯管距离海水表面30cm，照射时间为40s；照射完毕再往容器内加入培养液，盖上盖并用黑纸包好，24小时后将雌、雄配子体混合泼洒在苗帘上继续培养；待有合子形成，则将苗帘的水倒掉，加入预冷消毒海水使苗帘保持湿润状态，采用上述的辐射条件再进行紫外照射，24h后重复操作一次；4)诱变苗种的养殖把步骤3)中筛选的苗帘进行培育，培育条件为：光照为2000‑2500lx，温度为8‑12℃，每3天换三分之一低温灭菌海水；待发育至8列细胞以上的幼孢子体时，进行流水培育；最后转移至海上养殖；再进行性状检测筛选突变体。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王翔宇，
申请(专利权)人：山东省海洋生物研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37