三孢布拉霉及三孢布拉霉制备番茄红素的方法技术

技术编号:13494506 阅读:77 留言:0更新日期:2016-08-07 17:45
本发明专利技术公开了一种三孢布拉霉,该三孢布拉霉被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。一种三孢布拉霉制备番茄红素的方法,活化;将活化菌种接种至种子培养基上,在温度为30~35℃、转速为150~220rpm下,培养42~44,得到种子培养液;将种子培养液接种至发酵培养基上,在避光条件下,在32~35℃下,发酵120~144h,在发酵46~48h时,加入阻断剂;萃取发酵液中的番茄红素,萃取剂为丙酮或石油醚,发酵液与萃取剂的质量比为1:200~250,萃取温度为40~60℃,萃取时间为2h;提取萃取液,提取温度40~50℃,-4℃过夜结晶,用液相色谱测得番茄红素的纯度达到85%以上。本发明专利技术不仅提高了番茄红素的产量,而且分离番茄红素纯度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及一种=抱布拉霉及=抱布拉霉制备番茄红素的方法。
技术介绍
番茄红素又名(6-胡萝h素,是一种开链式的不饱和胡萝h素,为胡萝h素和叶黄素生 物合成过程中的中间产物,经两步环化反应后即为胡萝h素。其全反式结构为: 随着研究的不断深入,人们发现番茄红素具有很强的清除氧自由基的能力,尤其 是近年许多研究表明其在防癌、抗癌等方面具有显著效果。番茄红素的应用也已从最早仅 作为色素添加到食品、饮料和化妆品中逐渐扩展到保健品、医药行业,国内外市场上呈现出 番茄红素供不应求的景象。运些因素使得番茄红素的生产制备工艺W及病理学研究成为当 今的热点。W色列、日本、俄罗斯等国家W及罗氏、己斯夫等跨国公司在此方面具领先地位。 W色列Lycored公司多年前就从事番茄红素的开发研究并已取得了世界领先地 位。日本Nippon公司通过离屯、分离、微滤、提纯从西红柿开发番茄红素,从230kg西红柿浆中 分离到20kg含0.5 %番茄红素的色素,用于加工运动饮料及果冻。日本Kagome公司开发生产 了一种含番茄红素的饲料,将西红柿压碎、离屯、去汁、冻干后与基本饲料混合而得。罗氏公 司采用合成方法生产番茄红素,1997年10月该公司完成了工艺开发并在欧洲提出专利申 请。德国己斯夫公司也看到了番茄红素不可估量的市场潜力,投人力量进行研究开发,1997 年8月完成了合成工艺开发,并在欧洲提出专利申请。 目前世界上番茄红素的生产主要有天然提取、化学合成、微生物发酵等方法。番茄 中的番茄红素含量很低,通常每吨西红柿中仅含20g番煎红素,并且天然提取法产率较低、 价格高昂,不能满足市场需求。化学合成法成本虽低但容易造成污染,存在一定不安全性。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题,并提供至少后面将说明的优点。[000引本专利技术还有一个目的是提供一种=抱布拉霉及=抱布拉霉制备番茄红素的方法, 其不仅提高了番茄红素的产量,而且分离番茄红素纯度高。 为了实现根据本专利技术的运些目的和其它优点,提供了一种S抱布拉霉Blakeslea trispora H019-D,所述S抱布拉霉被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中屯、,保藏号为:CGMCC No. 11740,保藏时间为:2015年11月25日。 -种利用=抱布拉霉制备番茄红素的方法,包括W下步骤:步骤一、活化:在无菌条件下,将权利要求1所述的立抱布拉霉的菌种接种至LB培 养基上,在溫度为35~40°C、转速为240~25化/min下,培养24~28h,得到活化菌种,其中, 接种至LB培养基上的=抱布拉霉的菌种的体积为LB培养基体积的1%~5%; 步骤二、种子培养:将活化菌种接种至种子培养基上,在溫度为30~35 °C、转速为 150~22化pm下,培养42~4地,得到种子培养液; 步骤=、种子发酵:将步骤二得到的种子培养液接种至发酵培养基上,在避光条件 下,在30~35°C下,发酵120~144h,其中,在发酵24~36h时,加入发酵培养基质量的5~ 10%的大豆油或菜巧油,在36-48h时,加入发酵培养基质量的0.3~0.6%的大豆卵憐脂,在 发酵46~4她时,加入阻断剂,接种至发酵培养基上的种子培养液的体积为种子培养基体积 的10%~20% ;在发酵过程中,使用5mol/L氨水将发酵培养基的pH值控制在6.0~6.5; 发酵过程中空气流量3~化/min,采用的补料方式,控制溶氧在25~30%,转速保 持在600 ~800r/min; 步骤四、分离:萃取发酵液中的番茄红素,萃取剂为丙酬或石油酸,发酵液与萃取 剂的体积比为1:200~250,萃取溫度为40~60°C,萃取时间为化;提取萃取液,提取溫度40 ~50°C,-4°C过夜结晶,即得到番茄红素,所得到的番茄红素的纯度达到85% W上。 优选的是,所述的利用=抱布拉霉制备番茄红素的方法,所述步骤二中,种子培养 基包括W下质量分数的组数:淀粉4%、玉米粉5%,甘油2.5%、K化P〇4〇.2%、MgSCk+ 7出00.05 %、维生素Bi0.00 1 % 和水88.249 % ; 其中,种子培养基的初始pH值为6.0~6.5,且在121°C灭菌20~25min。 优选的是,所述的利用=抱布拉霉制备番茄红素的方法,所述步骤=中,发酵培养 基包括W下质量分数的组数:淀粉4%、棉巧油8.5%、黄豆粉2.2%、甘油2.5%、 K出P〇4〇. 1 %、MgS〇4巧出0 0.04%、维生素Bi0.00 1 %、7长82.659,其中,发酵培养基的初始抑值为6.0,且在m°C灭菌20~25min。 本专利技术至少包括W下有益效果:第一、本专利技术采用高密度液体发酵技术,制备的番 茄红素具有产量高、产品单一性强、污染小等特点,技术上处于国内领先水平,提供一种番 茄红素产业化生产方法;第二、本专利技术提取方法操作简单、分离番茄红素纯度不低于85%, 整个提取工艺中多糖提取率不低于12% 本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本 专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解【附图说明】 图1为本专利技术所述的=抱布拉霉制备番茄红素的流程图。【具体实施方式】 下面结合附图对本专利技术做进一步的详细说明,W令本领域技术人员参照说明书文 字能够据W实施。 应当理解,本文所使用的诸如"具有"、"包含"W及"包括"术语并不配出一个或多 个其它元件或其组合的存在或添加。 实施例1、 -种S抱布拉霉Blakeslea trispora册19-D,其分类命名为S抱布拉霉,S抱布 拉霉被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、,保藏号为= CGMCC No. 11740,保藏时间为:2015年11月25日;保藏单位地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3 号,中国科学院微生物研究所。 实施例2、 如图1所示,一种利用实施例1所述的酿酒酵母制备番茄红素的方法,包括W下步 骤: 菌株筛选过程:在长有S抱布拉霉的培养基中加入5mL生理盐水,用涂布器将抱子 提出,溶于生理盐水;取1.5mLS抱布拉霉的抱子悬液在3000巧m下离屯、,弃去上清液后,加 入生理验收,使菌悬液浓度达到107~8个/ml;取10化L菌悬液加入PDA-SDC-洛伐他汀(PDA 为马铃馨葡萄糖琼脂培养基的简称,在PM培养基的配置中加入Img/lOOmL的脱氧胆酸钢 (SDC)和O.lmg/lOOmL的洛伐他汀配制而成。)培养基上涂布,在紫外灯下照射3min;在22°C 下培养4她,挑选生长较好的单菌落,转接到PDA培养基中;重复筛选=次,最后将挑选的较 好的单菌落转移到PDA培养基中保存。 PDA固体培养基:±豆提取液1.化(400g±豆加1.5水煮沸50min),葡萄糖20g/L,琼 月旨 20g/L,lOmg/L 的VBi,115 °C 灭菌化 min。 步骤一、活化:在无菌条件下,将上述筛选的S抱布拉霉的菌种接种至LB培养基 上,在溫度为35°C、转速为24化/min下,培养2地,得到活化菌种,其中,接种至LB培养基上的 =抱布拉霉的菌种的体积为LB培养体积量的1 % ; 步骤二、种子培养:将活化菌种接种至种子培养基上,在溫度30°C、转速为15化本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种三孢布拉霉Blakeslea trispora H019‑D,其特征在于,所述三孢布拉霉被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为:CGMCC No.11740,保藏时间为:2015年11月25日。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:张春颖
申请(专利权)人:西藏天虹科技股份有限责任公司
类型:发明
国别省市:西藏;54

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