一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法。本发明专利技术采用分子印迹聚合物作为分离介质，提高了黑木耳腺苷的选择性效果，该聚合物对黑木耳腺苷总的吸附量可达8~15mg/g。本发明专利技术针对黑木耳腺苷制备了分子印迹聚合物，该聚合物对黑木耳腺苷具有特异性吸附作用，分离效率高，且提取的腺苷活性高、纯度大。

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及黑木耳腺苷提取
，具体涉及一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法。
技术介绍

黑木耳腺苷是黑木耳中含有的一种水溶性成分，该成分被加热至90℃时仍不会失去活性，可以抑制血小板聚集。腺苷主要具有舒张血管，降低血压，减慢心律，抑制血小板聚焦，松弛血管平滑肌，改善心脑血液循环，防止心率失常，抑制神经递质的释放和调节腺苷酸活化酶活性等药理作用，具有降低血脂和血液粘度，减轻动脉硬化，防止血栓形成和中风发生等功能。目前，黑木耳中的腺苷提取主要是采用传统的液液萃取，但这种方法耗时长、步骤繁琐、需要耗费大量的提取液，并且提取率很低、活性不高、纯度很低。
技术实现思路
：本专利技术的目的在于提供一种用分子印迹技术制备黑木耳腺苷的方法。本专利技术的目的是这样实现的。一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法，其特征在于：具体操作方法依次按下列步骤：（1）黑木耳腺苷分子印迹聚合物的制备：称取纯度为98%以上的黑木耳腺苷标准品，溶于60~70倍重量的丙酮中，与甲基丙烯酸或丙烯酰胺功能单体，交联剂，引发剂混合，混合均匀后，超声处理10~20min，氮吹15min，密封，置于60℃水浴聚合反应24h，粉碎，过180目筛，烘干，置于烧杯中，加入黑木耳腺苷重量50倍的洗脱液，其中甲醇：乙酸的体积比为8:2，超声洗脱30min，抽滤，取滤渣重复上述过程，直至洗脱液在429nm波长检测无吸收，将洗脱后的滤渣置于烘箱中，烘干，得到黑木耳腺苷分子印迹聚合物；（2）将黑木耳原料粉碎至细度为80目，加入50~60倍重量的水，加入果胶酶、植物水解酶、复合纤维素酶充分酶解，制得黑木耳提取液，将提取液浓缩，喷雾干燥，获得黑木耳提取物，将粉末粉碎过50~60目筛，按照1:1~4比例称取黑木耳提取物和分子印迹聚合物，混合均匀，研磨均化5~10min，得到混合粉末；（3）将步骤（2）得到的混合粉末移入装有玻璃棉垫底的注射器中，再在混合粉末上方放置玻璃棉，压实；（4）将淋洗液倒入压实的注射器中，以1~2ml/min的流速淋洗，其中注射器中混合粉末的质量与淋洗液的体积比为1g:5~25ml，淋洗掉黑木耳提取物中除黑木耳腺苷以外的其他组分；（5）将洗脱剂倒入淋洗后的注射器中，以1~2ml/min的流速洗脱，其中注射器中混合粉末的质量与洗脱剂的体积比为1g:5~25ml，洗脱目标物为黑木耳腺苷。所述步骤（1）中，交联剂为三甲氧基丙烷三甲基丙烯酸酯，引发剂为偶氮二异丁晴。所述步骤（3）中，玻璃棉的厚度为2mm~3mm，混合粉末的质量与淋洗剂的体积比为1g:10~20ml。所述步骤（4）中，淋洗剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液，其中甲醇或乙醇与水的体积比为1:10~20。所述步骤（5）中，洗脱剂为乙酸与甲醇或乙醇的混合溶液，其中乙酸与甲醇或乙醇的体积比为1:10~50；混合粉末的质量与洗脱剂的体积比为1g:10~20ml。本专利技术的有益在于，本专利技术采用分子印迹聚合物作为分离介质，提高了黑木耳腺苷的选择性效果，该聚合物对黑木耳腺苷总的吸附量可达8~15mg/g。本专利技术针对黑木耳腺苷制备了分子印迹聚合物，该聚合物对黑木耳腺苷具有特异性吸附作用，分离效率高，且提取的腺苷活性高、纯度大。附图说明
图1为实施例1制备的分子印迹聚合物对黑木耳腺苷的吸附等温线图。图2为实施例1制备的分子印迹聚合物吸附黑木耳腺苷的Scatchard分析图。图3为实施例1制备的分子印迹聚合物对模板分子黑木耳腺苷的动力学曲线图。图4为实施例1制备的分子印迹聚合物吸附黑木耳腺苷的准一级动力学拟合图。图5为实施例1制备的分子印迹聚合物吸附黑木耳腺苷的准二级动力学拟合图。具体实施方式
下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明实施例1一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法，其特征在于：具体操作方法依次按下列步骤：（1）黑木耳腺苷分子印迹聚合物的制备：称取纯度为98%以上的黑木耳腺苷标准品，溶于60~70倍重量的丙酮中，与甲基丙烯酸或丙烯酰胺功能单体，交联剂，引发剂混合，混合均匀后，超声处理10~20min，氮吹15min，密封，置于60℃水浴聚合反应24h，粉碎，过180目筛，烘干，置于烧杯中，加入黑木耳腺苷重量50倍的洗脱液，其中甲醇：乙酸的体积比为8:2，超声洗脱30min，抽滤，取滤渣重复上述过程，直至洗脱液在429nm波长检测无吸收，将洗脱后的滤渣置于烘箱中，烘干，得到黑木耳腺苷分子印迹聚合物；（2）将黑木耳原料粉碎至细度为80目，加入50~60倍重量的水，加入果胶酶、植物水解酶、复合纤维素酶充分酶解，制得黑木耳提取液，将提取液浓缩，喷雾干燥，获得黑木耳提取物，将粉末粉碎过50~60目筛，按照1:1~4比例称取黑木耳提取物和分子印迹聚合物，混合均匀，研磨均化5~10min，得到混合粉末；（3）将步骤（2）得到的混合粉末移入装有玻璃棉垫底的注射器中，再在混合粉末上方放置玻璃棉，压实；（4）将淋洗液倒入压实的注射器中，以1~2ml/min的流速淋洗，其中注射器中混合粉末的质量与淋洗液的体积比为1g:5~25ml，淋洗掉黑木耳提取物中除黑木耳腺苷以外的其他组分；（5）将洗脱剂倒入淋洗后的注射器中，以1~2ml/min的流速洗脱，其中注射器中混合粉末的质量与洗脱剂的体积比为1g:5~25ml，洗脱目标物为黑木耳腺苷。实施例2所述步骤（1）中，交联剂为三甲氧基丙烷三甲基丙烯酸酯，引发剂为偶氮二异丁晴。实施例3所述步骤（3）中，玻璃棉的厚度为2mm~3mm，混合粉末的质量与淋洗剂的体积比为1g:10~20ml。实施例4所述步骤（4）中，淋洗剂为甲醇水溶液或乙醇水溶液，其中甲醇或乙醇与水的体积比为1:10~20。实施例5所述步骤（5）中，洗脱剂为乙酸与甲醇或乙醇的混合溶液，其中乙酸与甲醇或乙醇的体积比为1:10~50；混合粉末的质量与洗脱剂的体积比为1g:10~20ml。实施例6按照实施例制备的分子印迹聚合物粒径较小，且分布均匀。制备的分子印迹聚合物对黑木耳腺苷的吸附等温线图如图1所示，分子印迹聚合物吸附黑木耳腺苷的Scatchard分析图如图2所示，利用公式：Q/C=(Qmax-Q)/Kd（Q为MIP对黑木耳腺苷的吸附量，C为吸附溶液中的平衡浓度，Qmax为最大表观吸附量，Kd为解离常数）。从图2可以看出，MIP对黑木耳腺苷有两种结合方式，得到Kd1=35.2mg/L，Qmax1=9.21mg/g；Kd2=17.4mg/L，Qmax1=7.26mg/g，此结果显示制备得到MIP对黑木耳腺苷具有较强的吸附能力。按照实施例制备的分子印迹聚合物对模板分子黑木耳腺苷的动力学曲线图如图3所示，分子印迹聚合物吸附黑木耳腺苷的准一级动力学拟合图如图4所示，MIP吸附黑木耳腺苷的准二级动力学拟合图如图5所示，由图可知MIP对黑木耳腺苷的吸附符合准二级动力学模型，其中准二级动力学的拟合公式为：t/Qt=1/K2Qe2+t/Qe(Qt为平衡吸附量，Qe为理论最大吸附量，K2为动力学二级平衡速率常数)，得到MIP的K2=0.0682g.mg-1min-1，此结果显示制备得到的MIP对黑木耳腺苷具有快速的吸附速率。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法，其特征在于：具体操作方法依次按下列步骤：（1）黑木耳腺苷分子印迹聚合物的制备：称取纯度为98%以上的黑木耳腺苷标准品，溶于60~70倍重量的丙酮中，与甲基丙烯酸或丙烯酰胺功能单体，交联剂，引发剂混合，混合均匀后，超声处理10~20min，氮吹15min，密封，置于60℃水浴聚合反应24h，粉碎，过180目筛，烘干，置于烧杯中，加入黑木耳腺苷重量50倍的洗脱液，其中甲醇：乙酸的体积比为8:2，超声洗脱30min，抽滤，取滤渣重复上述过程，直至洗脱液在429nm波长检测无吸收，将洗脱后的滤渣置于烘箱中，烘干，得到黑木耳腺苷分子印迹聚合物；（2）将黑木耳原料粉碎至细度为80目，加入50~60倍重量的水，加入果胶酶、植物水解酶、复合纤维素酶充分酶解，制得黑木耳提取液，将提取液浓缩，喷雾干燥，获得黑木耳提取物，将粉末粉碎过50~60目筛，按照1:1~4比例称取黑木耳提取物和分子印迹聚合物，混合均匀，研磨均化5~10min，得到混合粉末；（3）将步骤（2）得到的混合粉末移入装有玻璃棉垫底的注射器中，再在混合粉末上方放置玻璃棉，压实；（4）将淋洗液倒入压实的注射器中，以1~2ml/min的流速淋洗，其中注射器中混合粉末的质量与淋洗液的体积比为1g:5~25ml，淋洗掉黑木耳提取物中除黑木耳腺苷以外的其他组分；（5）将洗脱剂倒入淋洗后的注射器中，以1~2ml/min的流速洗脱，其中注射器中混合粉末的质量与洗脱剂的体积比为1g:5~25ml，洗脱目标物为黑木耳腺苷。...

【技术特征摘要】
1.一种高纯度黑木耳腺苷的制备方法，其特征在于：具体操作方法依次按下列步骤：
（1）黑木耳腺苷分子印迹聚合物的制备：称取纯度为98%以上的黑木耳腺苷标准品，溶于60~70倍重量的丙酮中，与甲基丙烯酸或丙烯酰胺功能单体，交联剂，引发剂混合，混合均匀后，超声处理10~20min，氮吹15min，密封，置于60℃水浴聚合反应24h，粉碎，过180目筛，烘干，置于烧杯中，加入黑木耳腺苷重量50倍的洗脱液，其中甲醇：乙酸的体积比为8:2，超声洗脱30min，抽滤，取滤渣重复上述过程，直至洗脱液在429nm波长检测无吸收，将洗脱后的滤渣置于烘箱中，烘干，得到黑木耳腺苷分子印迹聚合物；
（2）将黑木耳原料粉碎至细度为80目，加入50~60倍重量的水，加入果胶酶、植物水解酶、复合纤维素酶充分酶解，制得黑木耳提取液，将提取液浓缩，喷雾干燥，获得黑木耳提取物，将粉末粉碎过50~60目筛，按照1:1~4比例称取黑木耳提取物和分子印迹聚合物，混合均匀，研磨均化5~10min，得到混合粉末；
（3）将步骤（2）得到的混合粉末移入装有玻璃棉垫底的注射器中，再在混合粉末上方放置玻璃棉，压实；
（4）将淋洗液倒入压实的注射器中，以1~2m...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴路，
申请(专利权)人：哈尔滨墨医生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23