本发明专利技术公开了一种葡聚糖和酒石酸钾钠双水相萃取分离藻蓝蛋白的方法，包括如下步骤：(1)用蒸馏水清洗新鲜的螺旋藻2～4次，洗涤干净的螺旋藻经压力为200～400kg/cm2的高压细胞匀浆机破碎5～6min，超声波处理12‑15min，将破碎的螺旋藻悬浊液于离心机中离心10～18min，离心收集上清液，制得含藻蓝蛋白的粗提液于4～5℃下储存；(2)双水相萃取：向步骤(1)所得含藻蓝蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸钾钠，彻底搅拌1～2h，静置过夜使两相分开，收集上相；(3)采用膜孔径为3～5um的滤膜对藻蓝蛋白粗提液进行粗过滤，制得双水相萃取藻蓝蛋白。本发明专利技术分离效果好，过滤分离回收率高，产品质量高，运行成本低。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，包括如下步骤：(1)用蒸馏水清洗新鲜的螺旋藻2～4次，洗涤干净的螺旋藻经压力为200～400kg/cm2的高压细胞匀浆机破碎5～6min，超声波处理12?15min，将破碎的螺旋藻悬浊液于离心机中离心10～18min，离心收集上清液，制得含藻蓝蛋白的粗提液于4～5℃下储存；(2)双水相萃取：向步骤(1)所得含藻蓝蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸钾钠，彻底搅拌1～2h，静置过夜使两相分开，收集上相；(3)采用膜孔径为3～5um的滤膜对藻蓝蛋白粗提液进行粗过滤，制得双水相萃取藻蓝蛋白。本专利技术分离效果好，过滤分离回收率高，产品质量高，运行成本低。【专利说明】
本领域涉及天然产物深加工
，尤其是涉及一种葡聚糖和酒石酸钾钠双水 相萃取分离藻蓝蛋白的方法。
技术介绍
藻蓝蛋白是一种天然蓝色色素，已作为食物色素添加在软饮料，口香糖，唇膏，眼 线等产品中。高纯度的藻蓝蛋白因其具有高效的荧光性，被作为生物化学探针应用在免疫 分析研究。藻蓝蛋白具有抗氧化、增强机体免疫力、保肝护肝、抗癌、抗炎等诸多生理活性， 具有重大的潜在药用开发价值。藻蓝蛋白主要从螺旋藻、鱼腥藻等藻类中提取纯化得来，不 同纯度(A620/A280)的藻蓝蛋白有不同的用途。葡聚糖dextran，glucan又称右旋糖酐。为一种多糖。存在于某些微生物在生长过 程中分泌的粘液中。葡聚糖具有较高的分子量，主要由D-葡萄吡喃糖以a，1-6键连接，支 链点有1 - 2、1 - 3、1 - 4连接的。随着微生物种类和生长条件的不同，其结构也有差别。 八620/六280大于等于0.7时，澡监蛋白为食品级;六620/六280大于等于3.9时，澡监蛋白为反应 级;A620/A280大于等于4.0时，藻蓝蛋白为分析级。藻蓝蛋白具有十分广阔的应用前景，但 繁琐的纯化步骤不仅制约着它的大规模生产也导致其价格昂贵。食品级藻蓝蛋白的价格约 为0.13美元/mg，分析级的藻蓝蛋白价格为1-5美元/mg。 葡聚糖是以葡萄糖为组成糖的多糖的总称。由于D-葡萄糖残基彼此间结合样式的 不同而分为多种，广泛分布于微生物、植物、动物界。其中代表性的有细菌的多缩葡萄糖（由 a_l，6键的主链上支出以a-1，4和a-1，6键的侧链），褐藻类的海带多糖（lami-narin)(主要 以0-1，3键），地衣类的木聚糖⑴-1，4和0-1，3键），高等植物的纤维素、(0-1，4结合），直链淀 粉(a-1，4键），支链淀粉（由a-1，4键的主链上支出a-1，6键的侧链），动物的糖原等。藻蓝蛋 白是从藻类中分离出的一种深蓝色物质.它既是一种蛋白质，又是一种极好的天然食用色 素，同时还是良好的保健食品，具有很高的营养价值和医疗价值。传统的从蓝藻中提取分离 藻蓝蛋白的方法多采用盐析沉淀法，包括沉淀、离心和透析3个主要操作环节，这在实际工 业化生产中存在操作步骤繁琐、动力能耗高及操作周期长等缺点。Albertsson于20世纪50 年代后期开发了双水相萃取法。70年代以后，双水相萃取技术在生物分离过程中得到广泛 应用，为蛋白质特别是胞内蛋白质的分离与纯化开辟了新的途径，具有良好的发展前景。 目前，缺乏一种分离效果好，过滤分离回收率高的葡聚糖和酒石酸钾钠双水相萃 取分离藻蓝蛋白的方法。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种分离效果好，过滤分离回收率高的葡 聚糖和酒石酸钾钠双水相萃取分离藻蓝蛋白的方法。 为实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的一种葡聚糖和酒石 酸钾钠双水相萃取分离藻蓝蛋白的方法，包括如下步骤： (1)制备藻蓝蛋白粗提取液:用蒸馏水清洗新鲜的螺旋藻2~4次，洗涤干净的螺旋 藻经压力为200~400kg/cm2的高压细胞匀浆机破碎5~6min，超声波处理12-15min，将破碎 的螺旋藻悬浊液于离心机中离心1 〇~18min，离心收集上清液，制得含藻蓝蛋白的粗提液于 4~5 °C下储存； (2)双水相萃取：向步骤（1)所得含藻蓝蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸钾 钠，彻底搅拌1~2h，静置过夜使两相分开，收集上相； (3)采用膜孔径为3~5um的滤膜对藻蓝蛋白粗提液进行粗过滤，处理时间为20~ 26小时，再于-13~-8°C冷冻干燥8~15小时，制得双水相萃取藻蓝蛋白。 进一步地，在步骤(1)中，所述离心速率为800~1000r/min。进一步地，在步骤⑵中，所述葡聚糖质量为双水相体系总质量的9~13%。 更进一步地，在步骤(2)中，所述酒石酸钾钠为双水相体系总质量的16~25%。 进一步地，在步骤(2)中，含藻蓝蛋白的粗提液的质量为双水相体系总质量的65~ 70% 〇 进一步地，在步骤（3)中，所述滤膜的流速为150mL/min，渗透通量为58.5L/(h ? m2)〇 有益效果:本专利技术分离效果好，过滤分离回收率高，产品质量高，运行成本低;过程 无需添加化学药品、溶媒溶剂，不带入二次污染物质;设备可自动运行，稳定性好，容易实现 工业化需求。 与现有技术相比，本专利技术具有如下优点： (1)本专利技术的双水相萃取与其他分离方法相比，具有易放大、操作时间短、成相物 质对待分离的生物活性物质无毒负作用等优点。在双水相体系中，待分离的组分选择性分 配于其中一相，而其他杂质组分分配于另一相中，因此使待分离组分的浓度和纯度都得到 提高。其中影响双水相萃取的因素很多，主要有:聚合物种类、聚合物平均分子质量和浓度、 成相无机盐种类和浓度、离子强度、pH值等等。 (2)本专利技术的双水相体系用于萃取螺旋藻细胞破碎液中藻蓝蛋白，经一次萃取藻 蓝蛋白收率可达90.6%，分配系数达到8.03,分离因数达到6.5。结果证实螺旋藻藻蓝蛋白 在该体系中的分配系数和分离因数均较高。 (3)超/微滤膜过滤与传统过滤的不同在于不同分子质量的化合物可通过膜进行 有效分离，这个过程是一种物理过程，不发生相的变化，不需要添加助剂。【附图说明】图1为破壁后螺旋藻溶液的紫外-可见吸收图； 图2为酒石酸钾钠饱和度对藻蓝蛋白纯度的影响图； 图3为pH值对双水相体系及藻蓝蛋白萃取的影响图。【具体实施方式】以下通过实施例和说明书附图进一步说明本专利技术。应该理解的是，这些实施例是 本专利技术的阐释和举例，并不以任何形式限制本专利技术的范围。 实施例1 本专利技术的，包括如下步 骤： (1)制备藻蓝蛋白粗提取液：用蒸馏水清洗新鲜的螺旋藻2次，洗涤干净的螺旋藻 经压力为200kg/cm 2的高压细胞勾衆机破碎5min,超声波处理15min,将破碎的螺旋藻悬池 液于离心机中离心15min，离心收集上清液，制得含藻蓝蛋白的粗提液于4°C下储存;所述搅 摔转速为800r/min。 (2)双水相萃取：向步骤（1)所得含藻蓝蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸钾 钠，彻底搅拌lh，静置过夜使两相分开，收集上相;所述葡聚糖质量为双水相体系总质量的 9%。酒石酸钾钠为双水相体系总质量的16%。含藻蓝蛋白的粗提液的质量为双水相体系总 质量的68%。 (3)采用膜孔径为3um的滤膜对藻蓝蛋白粗提液进行粗过滤，处理时间为20小时， 再于-13°C冷冻干燥8小时得藻蓝蛋白粉末。所述滤膜的流速为150mL/min，渗透通量为 58.5L本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种葡聚糖和酒石酸钾钠双水相萃取分离藻蓝蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)制备藻蓝蛋白粗提取液：用蒸馏水清洗新鲜的螺旋藻2～4次，洗涤干净的螺旋藻经压力为200～400kg/cm2的高压细胞匀浆机破碎5～6min，超声波处理12‑15min，将破碎的螺旋藻悬浊液于离心机中离心10～18min，离心收集上清液，制得含藻蓝蛋白的粗提液于4～5℃下储存；(2)双水相萃取：向步骤(1)所得含藻蓝蛋白的粗提液中加入葡聚糖和酒石酸钾钠，彻底搅拌1～2h，静置过夜使两相分开，收集上相；(3)采用膜孔径为3～5um的滤膜对藻蓝蛋白粗提液进行粗过滤，处理时间为20～26小时，再于‑13～‑8℃冷冻干燥8～15小时，制得双水相萃取藻蓝蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高志刚，汪世军，王峰，
申请(专利权)人：东台市赐百年生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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