对HPV18 E7蛋白具有结合亲和力的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种对HPV18E7具有结合亲和力的多肽及其应用，首次揭示了一种对HPV18的E7蛋白具有结合亲和力的多肽；本发明专利技术还提供了该多肽作为药物或分子靶向试剂的诊断或治疗用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，具体是一种对HPV18E7（人乳头瘤病毒18型的E7蛋白）具有结合亲和力的多肽及其应用。
技术介绍
宫颈癌是威胁人类健康和生命的主要疾病，在女性的癌症发病率居第二位，仅次于乳腺癌，在发展中国家更为多见，近几年甚至出现年轻化的趋势。在我国，每年宫颈癌的新病例大概是13.15万，占全世界的1/7,宫颈癌的发病率和死亡率居全球第二位。虽然近60年来,国内外的学者们进行了大量研究，并且宫颈癌的预防疫苗已经上市，但由于多方面因素的共同存在，目前临床对于宫颈癌的治疗，效果仍不理想。人乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus,HPV)感染是宫颈癌的重要病因。流行病学研究表明90%以上的宫颈癌与HPV感染相关，尤其是高危型HPV中的HPV16和18型，宫颈鳞状细胞癌中，HPV16型感染阳性占51%以上，而宫颈腺癌中HPV18型感染阳性占56％。HPV基因组约有8000bp，结构上由早期转录区（Earlytranscribedregion，E区）、晚期转录区（Latetranscribedregion，L区）和非编码区（Non-codingregion，URR）组成。E区有E1、E2、E4、E5、E6、E7等6个开放读码框（Openreadingframe，ORF），它们编码的蛋白均参与病毒复制与转录的过程，其中E6和E7为肿瘤原性蛋白，E6与P53结合，E7和pRB蛋白结合，诱导感染细胞发生转化，细胞因复制失控而致永生化。亲和体分子，英文名affibody，是一类崭新的亲和性配体，其结构由58个氨基酸组成、相对分子量小，约为6.5×103，其功能类似于抗体，可与相应的抗原、受体或配体结合，但又有着一些抗体所没有的性质，如相对分子量小，仅为6.5×103、折叠速率快、选择性和亲和力高，以及理化性质稳定，可耐受化学修饰等，因此人们称其为“人工抗体”。affibody分子所具备的这些独特性质，使其在各个免疫学领域和生物科学领域中迎来了广阔的应用前景，从20世纪80年代首次报道以来，研究者们便对其产生了浓厚的兴趣，因此它的发展也极为迅速。基于上述说明，本领域仍然亟待研究靶向性治疗HPV相关肿瘤疾病的新药物或新方法，以改善目前临床现状。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种HPV18E7具有结合亲和力的多肽及其应用。本专利技术的第一个目的，其技术方案是一种对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于：该多肽是以葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列作为骨架，进行12-20个氨基酸变异后获得的多肽。进一步设置是相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，该多肽在第9-11，13-14，17-18，24-25，27-28，32，35，43位上发生氨基酸突变。进一步设置是相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，该多肽的：第9位氨基酸突变为P、F或A；第10位氨基酸突变为F、L或V；第11位氨基酸突变为C、L或R；第13位氨基酸突变为R、M或S；第14位氨基酸突变为Q、V或G；第17位氨基酸突变为S、F或A；第18位氨基酸突变为P、W或V；第24位氨基酸突变为H、E或P；第25位氨基酸突变为H或E；第27位氨基酸突变为E、A或D；第28位氨基酸突变为P、E或L；第32位氨基酸突变为G、R或P；第35位氨基酸突变为P、H、Q或V；第43位氨基酸突变为E、D或K。进一步设置是该多肽与人乳头瘤病毒18型的E7蛋白相互作用的KD值为1×10-6M至3×10-7M。本专利技术的第二个目的，提供一种靶向人乳头瘤病毒18型的靶向性分子，所述的靶向性分子包括前文所述的任一多肽，以及与该多肽相连接(或偶联)的偶联物，所述的偶联物包括：半胱氨酸残基，多肽标签，抑制人乳头瘤病毒18型的药物，或可检测标记物（如荧光标记，酶，生物素或放射性同位素）。本设置中，所述的偶联物与所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽构成融合多肽。本设置中，所述的多肽标签包括但不限于：His标签(如6×His)，Myc标签，GST标签，Flag标签，所述酶包括但不限于：碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。进一步设置是所述的抑制人乳头瘤病毒18型的药物包括：毒素；所述毒素是具有抑制人乳头瘤病毒18型病毒感染或抑制肿瘤作用的毒素，如白喉毒素、蓖麻毒素、绿脓杆菌外毒素或所述毒素的功能性片段；且所述的肿瘤是人乳头瘤病毒18型阳性的肿瘤。本设置中，所述的毒素是绿脓杆菌外毒素A，或所述毒素的功能性片段是绿脓杆菌外毒素A的活性片段PE38KDEL。较佳地，该绿脓杆菌外毒素A或其功能性片段连接于所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽的羧基末端(C末端)。本设置中，所述的偶联物与所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽以柔性肽连接，所述柔性肽包括(但不限于)：(Gly4Ser)3。本专利技术的第三个目的，提供一种分离的多核苷酸，其编码前文任一所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽。本专利技术的第四个目的，提供一种多核苷酸，其编码前文所述的靶向人乳头瘤病毒18型的靶向性分子，且其中所述的偶联物是肽。本专利技术的第五个目的，提供一种重组载体，该载体包含前文所述的多核苷酸。本专利技术的第六个目的，提供一种宿主细胞，该宿主细胞包含前文所述的重组载体，或其包含有或基因组中整合有前文所述的多核苷酸。本专利技术的第七个目的，提供一种制备前文所述的任一对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)培养前文所述的细胞，从而表达前文所述任一的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽；(2)分离纯化(1)获得的多肽。本专利技术的第八个目的，提供一种前文所述的任一对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽或所述的靶向人乳头瘤病毒18型的靶向性分子的用途，用于制备治疗人乳头瘤病毒18型感染疾病或人乳头瘤病毒18型表达阳性肿瘤的药物；或用于制备检测人乳头瘤病毒18型病毒感染的检测试剂；或用于制备诊断人乳头瘤病毒18型感染疾病或人乳头瘤病毒18型表达阳性肿瘤的诊断试剂。本专利技术的第九个目的，提供一种药物组合物，其包括前文所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽或权利要求5或6所述的靶向人乳头瘤病毒18型的靶向性分子；和药学上可接受的载体。本专利技术的第十个目的，提供一种用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对人乳头瘤病毒18 型的E7 蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于：该多肽是以葡萄球菌A 蛋白Z 段的氨基酸序列作为骨架，进行12‑20个氨基酸变异后获得的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于：该多肽
是以葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列作为骨架，进行12-20个氨基酸变异后获得的多肽。
2.如权利要求1所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽，其特
征在于：相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，该多肽在第9-11，13-14，17-18，24-25，
27-28，32，35，43位上发生氨基酸突变。
3.如权利要求2所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽，其特
征在于，相对于葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列，该多肽的：
第9位氨基酸突变为P、F或A；
第10位氨基酸突变为F、L或V；
第11位氨基酸突变为C、L或R；
第13位氨基酸突变为R、M或S；
第14位氨基酸突变为Q、V或G；
第17位氨基酸突变为S、F或A；
第18位氨基酸突变为P、W或V；
第24位氨基酸突变为H、E或P；
第25位氨基酸突变为H或E；
第27位氨基酸突变为E、A或D；
第28位氨基酸突变为P、E或L；
第32位氨基酸突变为G、R或P；
第35位氨基酸突变为P、H、Q或V；
第43位氨基酸突变为E、D或K。
4.如权利要求1所述的对人乳头瘤病毒18型的E7蛋白具有结合亲和力的多肽，其特
征在于：该多肽与人乳头瘤病毒18型的E7蛋白相互作用的KD值为1×10-6M至3×10-7M。
5.一种靶向人乳头瘤病毒18型的靶向性分子，其特征在于，所述的靶向性分子包括权
利要求1-4任一所述的多肽，以及与该多肽相连接(或偶联)的偶联物，所述的偶联物包括：
半胱氨酸残基，多肽标签，抑制人乳头瘤病毒18型的药物，或可检测标记物。
6.如权利要求5所述的靶向人乳头瘤病毒18型的靶向性分子，其特征在于，所述的抑
制人乳头瘤病毒18型的药物包括：毒素；所述毒素是具有抑制人乳头瘤病毒18型病毒感
染或抑制肿瘤作用的毒素，如白喉毒素、蓖麻毒素、绿脓杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽芳，王乐丹，薛向阳，朱珊丽，蒋朋飞，李文姝，陈俊，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33