本发明专利技术涉及一种肝素钠的制备方法，属于生物制药领域。本发明专利技术针对目前在制备肝素钠生产硬件设施投入较大，生产成本较高，同时在提取过程中肝素钠损失大的问题，本发明专利技术通过以牛肝为原料，通过酶解，超声辅助提取，再使用白土脱色及硫酸铵除杂，醇析制备粗肝素钠，然后通过牛血中超氧化物歧化酶等酶对粗肝素钠进一步处理，进行纯化，最后通过树脂吸附，脱吸附及干燥，制得肝素钠，本发明专利技术制备的肝素钠成本低，纯度高，提取率高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种肝素钠的制备方法，属于生物制药领域。
技术介绍
肝素钠是一种由动物结缔组织的肥大细胞产生的酸性粘多糖的硫酸酯类物质，因其具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首选药物，随着研究的深入，人们发现肝素钠不仅有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。虽肝素钠用于临床已有60余年的历史，但迄今还没有一种能够完全代替它的产品，所以它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓的生化药物，且目前只能从动物的部分组织中提取，不能人工合成。
肝素钠的制备，对物料及环境温度控制要求较高，硬件设施投入较大；该法在去蛋白工艺环节采用强酸性条件操作(pH1.5)，对肝素活性损失较大(肝素溶液在低PH值环境下很不稳定，极易降解失活)，影响最终活性收率和效价，可操作性不强；该法采用超滤浓缩分离技术，超滤设备昂贵，硬件投入较大；该法采用的离子平衡交换方式，是以高浓度钠离子不断介入的方式来实现肝素钠向肝素钠的转换，无法保证动态离子平衡转换的充分性和连续稳定性。国外制备肝素钠均采用离子交换法，该法需要选用精品肝素钠为原料，原料成本高，而且在离子交换过程中可引起pH急剧下降，严重影响产品的收率和效价，并且交换过程需要在低温提条件下进行，导致肝素钠生产硬件设施投入较大，生产成本较高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对目前在制备肝素钠生产硬件设施投入较大，生产成本较高，同时在提取过程中肝素钠损失大的问题，本专利技术通过以牛肝为原料，通过酶解，超声辅助提取，再使用白土脱色及硫酸铵除杂，醇析制备粗肝素钠，然后通过牛血中超氧化物歧化酶等酶对粗肝素钠进一步处理，进行纯化，最后通过树脂吸附，脱吸附及干燥，制得肝素钠，本专利技术制备的肝素钠成本低，纯度高，提取率高。
为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：
（1）称取新鲜牛肝放入搅碎机中将其粉碎成浆状物，再将浆状物与复合风味蛋白酶按质量比7:1，混合均匀，放入容器中，向容器中加入质量分数为1.5％的鞣花酸溶液，加入量为混合物质量的70～75％，使用质量分数为10％的盐酸调节pH至6.0～6.5，将容器移至超声振荡器中，在23～25KHz下振荡2～3h；
（2）在上述振荡结束后，将容器内的混合物放入搅拌器中，在6000r/min搅拌30～40min后过滤，收集过滤液，再按固液比1:9，将100目白土和过滤液搅拌均匀，随后向其中加入硫酸铵搅拌直至无沉淀产生后过滤，收集过滤液，再向过滤液中加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集沉淀物，得粗肝素钠，备用；
（3）收集牛血，将其与质量分数为20％的双氧水按体积比4:1，混合均匀，再向混合物中加入牛血质量5～7％的蛋白酶及牛血质量8～9％的磷脂酶，在35℃下以150r/min搅拌酶解3～5h，随后将酶解混合物放入离心机中，以9000～12000r/min离心分离5～10min，收集上清液，得处理液；
（4）按固液比1:3，将备用的粗肝素钠与上述所得的处理液混合均匀，以120r/min搅拌5～8h，随后再向其中加入粗肝素钠等质量的D208树脂，搅拌30min后过滤收集过滤物，随后将其按固液比1:2与质量分数为8％的氯化钠溶液搅拌脱吸附1～2h后过滤，收集过滤液放置于4℃下静置30min，再过滤，将过滤液进行喷雾干燥，收集干燥物，即可得到肝素钠。
经检测本专利技术所得的肝素钠得：肝素钠效价为138～148IU/mg，效价回收率为96～99.2％，肝素钠为白色。
本专利技术与其他方法相比，有益技术效果：
（1）本专利技术制备的肝素钠成本低，纯度高，提取率高；
（2）本专利技术工艺简单，废液排放量少，工艺条件环保，且质量稳定。
具体实施方式
称取新鲜牛肝放入搅碎机中将其粉碎成浆状物，再将浆状物与复合风味蛋白酶按质量比7:1，混合均匀，放入容器中，向容器中加入质量分数为1.5％的鞣花酸溶液，加入量为混合物质量的70～75％，使用质量分数为10％的盐酸调节pH至6.0～6.5，将容器移至超声振荡器中，在23～25KHz下振荡2～3h；在上述振荡结束后，将容器内的混合物放入搅拌器中，在6000r/min搅拌30～40min后过滤，收集过滤液，再按固液比1:9，将100目白土和过滤液搅拌均匀，随后向其中加入硫酸铵搅拌直至无沉淀产生后过滤，收集过滤液，再向过滤液中加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集沉淀物，得粗肝素钠，备用；收集牛血，将其与质量分数为20％的双氧水按体积比4:1，混合均匀，再向混合物中加入牛血质量5～7％的蛋白酶及牛血质量8～9％的磷脂酶，在35℃下以150r/min搅拌酶解3～5h，随后将酶解混合物放入离心机中，以9000～12000r/min离心分离5～10min，收集上清液，得处理液；按固液比1:3，将备用的粗肝素钠与上述所得的处理液混合均匀，以120r/min搅拌5～8h，随后再向其中加入粗肝素钠等质量的D208树脂，搅拌30min后过滤收集过滤物，随后将其按固液比1:2与质量分数为8％的氯化钠溶液搅拌脱吸附1～2h后过滤，收集过滤液放置于4℃下静置30min，再过滤，将过滤液进行喷雾干燥，收集干燥物，即可得到肝素钠。
实例1
称取新鲜牛肝放入搅碎机中将其粉碎成浆状物，再将浆状物与复合风味蛋白酶按质量比7:1，混合均匀，放入容器中，向容器中加入质量分数为1.5％的鞣花酸溶液，加入量为混合物质量的72％，使用质量分数为10％的盐酸调节pH至6.0，将容器移至超声振荡器中，在24KHz下振荡2h；在上述振荡结束后，将容器内的混合物放入搅拌器中，在6000r/min搅拌35min后过滤，收集过滤液，再按固液比1:9，将100目白土和过滤液搅拌均匀，随后向其中加入硫酸铵搅拌直至无沉淀产生后过滤，收集过滤液，再向过滤液中加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集沉淀物，得粗肝素钠，备用；收集牛血，将其与质量分数为20％的双氧水按体积比4:1，混合均匀，再向混合物中加入牛血质量6％的蛋白酶及牛血质量8％的磷脂酶，在35℃下以150r/min搅拌酶解4h，随后将酶解混合物放入离心机中，以10000r/min离心分离8min，收集上清液，得处理液；按固液比1:3，将备用的粗肝素钠与上述所得的处理液混合均匀，以120r/min搅拌7h，随后再向其中加入粗肝素钠等质量的D208树脂，搅拌30min后过滤收集过滤物，随后将其按固液比1:2与质量分数为8％的氯化钠溶液搅拌脱吸附2h后过滤，收集过滤液放置于4℃下静置30min，再过滤，将过滤液进行喷雾干燥，收集干燥物，即可得到肝素钠。
经检测本专利技术所得的肝素钠得：肝素钠效价为142IU/mg，效价回收率为98.6％，肝素钠为白色。
实例2
称取新鲜牛肝放入搅碎机中将其粉碎成浆状物，再将浆状物与复合风味蛋白酶按质量比7:1，混合均匀，放入容器中，向容器中加入质量分数为1.5％的鞣花酸溶液，加入量为混合物质量的75％，使用质量分数为10％的盐酸调节pH至6.5，将容器移至超声振荡器中，在25KHz下振荡3h；在上述振荡结束后，将容器内的混合物放入搅拌器中，在6000r/min搅拌40min后过本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝素钠的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取新鲜牛肝放入搅碎机中将其粉碎成浆状物，再将浆状物与复合风味蛋白酶按质量比7:1，混合均匀，放入容器中，向容器中加入质量分数为1.5％的鞣花酸溶液，加入量为混合物质量的70～75％，使用质量分数为10％的盐酸调节pH至6.0～6.5，将容器移至超声振荡器中，在23～25KHz下振荡2～3h；（2）在上述振荡结束后，将容器内的混合物放入搅拌器中，在6000r/min搅拌30～40min后过滤，收集过滤液，再按固液比1:9，将100目白土和过滤液搅拌均匀，随后向其中加入硫酸铵搅拌直至无沉淀产生后过滤，收集过滤液，再向过滤液中加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集沉淀物，得粗肝素钠，备用；（3）收集牛血，将其与质量分数为20％的双氧水按体积比4:1，混合均匀，再向混合物中加入牛血质量5～7％的蛋白酶及牛血质量8～9％的磷脂酶，在35℃下以150r/min搅拌酶解3～5h，随后将酶解混合物放入离心机中，以9000～12000r/min离心分离5～10min，收集上清液，得处理液；（4）按固液比1:3，将备用的粗肝素钠与上述所得的处理液混合均匀，以120r/min 搅拌5～8h，随后再向其中加入粗肝素钠等质量的D208树脂，搅拌30min后过滤收集过滤物，随后将过滤物按固液比1:2与质量分数为8％的氯化钠溶液搅拌脱吸附1～2h后过滤，收集过滤液放置于4℃下静置30min，再过滤，将过滤液进行喷雾干燥，收集干燥物，即可得到肝素钠。...
【技术特征摘要】
1.一种肝素钠的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）称取新鲜牛肝放入搅碎机中将其粉碎成浆状物，再将浆状物与复合风味蛋白酶按质量比7:1，混合均匀，放入容器中，向容器中加入质量分数为1.5％的鞣花酸溶液，加入量为混合物质量的70～75％，使用质量分数为10％的盐酸调节pH至6.0～6.5，将容器移至超声振荡器中，在23～25KHz下振荡2～3h；
（2）在上述振荡结束后，将容器内的混合物放入搅拌器中，在6000r/min搅拌30～40min后过滤，收集过滤液，再按固液比1:9，将100目白土和过滤液搅拌均匀，随后向其中加入硫酸铵搅拌直至无沉淀产生后过滤，收集过滤液，再向过滤液中加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集沉淀物，得粗肝素钠，备用；
...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪巍，宋奇，
申请(专利权)人：常州市蓝勖化工有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。