L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法技术

本发明专利技术提供了一种L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，属于分析化学领域。本发明专利技术使用衍生化试剂和L‑脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。该方法实用方便、稳定可靠，可用于L‑脯氨醇化工品中对映异构体的分离检测和质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及氨基醇对映异构体的分离检测方法，具体涉及L-脯氨醇对映异构体的分离检测方法，属于分析化学领域。
技术介绍
L-脯氨醇是重要的手性化学试剂，既是合成优良光学材料NPP和手性聚合物材料的原料，又是合成手性药物的重要手性源。其化学名为(S)-pyrrolidin-2-ylmethanol，其结构式如下所示：L-脯氨醇的对映异构体为D-脯氨醇，其结构式如下所示：通常在手性药物及其制剂产品的制备和生产过程中，需要对其对映异构体的含量进行研究和控制。而合成手性化合物的手性源的对映异构体含量的研究和控制进一步保证了手性药物及其制剂产品的光学纯度。现代色谱分离分析技术在对映体的分离与测定方面显示出巨大的优越性。常用的手性药物测定技术有手性高效液相色谱法、手性毛细管电泳法和手性气相色谱法等，其中以手性高效液相色谱法最为常用。手性高效液相色谱法又包括手性固定相法、手性流动相添加剂法和手性衍生化法。作为手性合成重要的手性源，L-脯氨醇的对映异构体的检测和控制是手性药物控制对映异构体的重要控制步骤，一方面可以保证目标手性药物的光学纯度，另一方面减少了手性药物光学纯化的成本，例如手性药物阿伐那非的合成。手性高效液相色谱法是最为普遍的方法，但是由于脯氨醇几乎无紫外吸收，故需要将其衍生化为有较强紫外吸收的化合物，利用高效液相色谱仪在正相色谱柱上进行分离。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种实用方便、稳定可靠的手性衍生化高效液相色谱法来分离和检测L-脯氨醇及其对映异构体，可用于L-脯氨醇中对映异构体的分离检测和质量控制。为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，是在有机溶剂中，使用衍生化试剂和L-脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。上述衍生化试剂选自乙酰扁桃酰氯、9-氯甲酸芴甲酯和氯甲酸苄酯中的一种，优选9-氯甲酸芴甲酯。上述有机溶剂可以是下列溶剂中的一种或多种：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳、四氢呋喃，优选乙腈。上述衍生化反应的温度从-10℃到所使用有机溶剂的常压沸点温度均可，优选室温。上述衍生化反应中，当使用9-氯甲酸芴甲酯作为衍生化试剂时，L-脯氨醇及其异构体与衍生化试剂9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比为1∶1～1∶5，优选1∶1.1～1∶1.5。在本专利技术的一些实施例中，衍生化反应包括以下步骤：1)室温下，在反应器中加入C1～C4的有机胺和L-脯氨醇及其异构体，C1～C4的有机胺与L-脯氨醇及其异构体的摩尔比为5∶1～1∶1，加入有机溶剂，搅拌均匀；2)在步骤1)得混合物中加入衍生化试剂，搅拌反应5～60min，即得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品。其中，反应时间优选30min。优选的，所述C1～C4的有机胺选自三乙胺、二乙胺和二异丙基乙胺中的一种或多种。C1～C4的有机胺在此处用作缚酸剂，用于中和反应中产生的酸，采用C1～C4的有机胺的原因在于，相比于无机碱来说，它能溶于有机溶液。上述步骤2)所用衍生化试剂优选为9-氯甲酸芴甲酯，L-脯氨醇及其异构体与9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比优选为1∶1.1～1∶1.5。上述正向高效液相色谱以正相色谱柱为分离柱，以正己烷-C1～C4低级醇组成正相流动相系统。所述正相色谱柱优选以硅胶表面涂敷有直链淀粉－(二甲苯基氨基甲酸酯)或表面涂敷有纤维素－(二甲苯基氨基甲酸酯)为固定相的手性色谱柱，更优选硅胶表面涂敷有直链淀粉－三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)为固定相的色谱柱。所述正相流动相系统中的低级醇优选C1～C4的一元醇，更优选异丙醇和/或乙醇，最优选异丙醇。所述正相流动相系统中低级醇占流动相的体积百分比为10％～30％，优选15％～25％。进一步的，色谱条件优选为：流速为0.7～1.3mL/min，优选为0.8mL/min；检测波长为255nm-275nm，优选为265nm；色谱柱柱温为25℃～40℃，优选为35℃。在本专利技术的一些具体实施例中，按照以下步骤进行正相高效液相色谱法，实现L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的分离检测：(a)取L-脯氨醇及其异构体衍生化产品，用流动相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其异构体0.03mg～0.08mg的样品溶液；(b)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为265nm，色谱柱柱温为35℃；(c)取步骤(a)的样品溶液10μL注入色谱仪，记录色谱图。本专利技术的优点如下：1、在现有技术中，L-脯氨醇的纯度分析使用旋光法测量，定量不准确。本专利技术创造性地将L-脯氨醇及其对映异构体进行衍生化，然后使用高效液相色谱进行定量分析，准确性更高。满足了对药用原料L-脯氨醇的纯度分析的要求。2、本专利技术方法可有效分离L-脯氨醇及其对映异构体D-脯氨醇，使用本专利技术方法，两者可完全分离，分离度达到《中国药典》的要求，即分离度大于1.5。3、本专利技术方法基线平稳、峰形好，对称因子在1.0左右。4、本专利技术方法专属性强，在D-脯氨醇出峰位置附近没有其它杂质峰的影响，可准确定量。5、本专利技术方法检测灵敏度高，完全满足对药用原料L-脯氨醇进行纯度检测的要求。综上，本专利技术的方法简便有效，稳定可靠，有利于准确、快速地检测L-脯氨醇中的对映异构体的含量。附图说明图1是分离检测方法实施例1消旋脯氨醇衍生化产品分离检测的高效液相色谱图。图2是分离测试方法实施例2消旋脯氨醇衍生化产品分离检测的高效液相色谱图。图3是分离测试方法实施例3D-脯氨醇衍生化产品的高效液相色谱图。图4是分离测试方法实施例4L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的高效液相色谱图。图5是分离测试方法实施例5L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的高效液相色谱图。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。制备实施例1：L-脯氨醇及其对映异构体衍生化产品的制备室温下，在25mL圆底烧瓶中加入L-脯氨醇及其对映异构体40mg，然后加入乙腈4mL、70μL三乙胺，搅拌均匀，加入9-氯甲酸芴甲酯113mg，密闭反应容器，搅拌反应30min，即得到L-脯氨醇及其异构体衍生化产品。分离检测方法实施例1：消旋脯氨醇衍生化产品的分离检测本实施例的目的是定位L-脯氨醇衍生化产品和D本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种L‑脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，其特征在于，在有机溶剂中，使用衍生化试剂和L‑脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L‑脯氨醇及其异构体的衍生化产品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。

【技术特征摘要】
1.一种L-脯氨醇及其对映异构体的分离检测方法，其特征在于，在有机溶剂中，使用衍
生化试剂和L-脯氨醇及其异构体进行衍生化反应，制备得到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产
品，然后使用正相高效液相色谱法进行分离和检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂选自乙酰扁桃酰氯、9-氯
甲酸芴甲酯和氯甲酸苄酯中的一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自下列溶剂中的一种或多
种：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳和四氢呋喃。
4.根据权利要求1～3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述衍生化反应包括以下步
骤：
1)室温下，在反应器中加入C1～C4的有机胺和L-脯氨醇及其异构体，C1～C4的有机胺
与L-脯氨醇及其异构体的摩尔比为5∶1～1∶1，加入有机溶剂，搅拌均匀；
2)在步骤1)得混合物中加入衍生化试剂，搅拌反应5～60min，优选反应30min，即得
到L-脯氨醇及其异构体的衍生化产品。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述C1～C4的有机胺选自三乙胺、二乙胺
和二异丙基乙胺中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述衍生化试剂是9-氯甲酸芴甲酯，L-脯
氨醇及其异构体与9-氯甲酸芴甲酯用量的摩尔比为1∶1.1～1∶1.5。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色谱法以正相色谱柱为
分离柱，以正己烷-C...

【专利技术属性】
技术研发人员：易崇勤，崔畅，孙宇，
申请(专利权)人：北大方正集团有限公司，方正医药研究院有限公司，北大医疗产业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11