本发明专利技术涉及具有蛋白酶活性的分离的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明专利技术进一步涉及此类多肽在洗涤剂和/或清洁过程中的用途。本发明专利技术还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞连同产生这些多肽的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对序列表的引用本申请含有计算机可读形式的序列表，将该序列表通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及具有蛋白酶活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸的用途。本专利技术还涉及包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞连同产生这些多肽的方法。本专利技术具体涉及具有蛋白酶活性的多肽在食品应用和洗涤剂中的用途。相关技术说明酶已经在清洁组合物中使用了数十年，如用于各种目的的洗涤剂，如在家庭护理和工业清洗中的衣物洗涤和餐具洗涤。使用不同酶的混合物，每种酶都表现出其对构成来自各种污物的污垢的特定物质的比活性。蛋白酶是降解蛋白质的酶，并且可以用于清洗过程如餐具洗涤和衣物洗涤以去除蛋白质污渍。最常用的蛋白酶是丝氨酸蛋白酶，特别是枯草杆菌酶。这个家族先前已经进一步由西埃泽恩(Siezen)RJ和洛因伊森(Leunissen)JAM，1997，蛋白质科学(ProteinScience)，6，501-523被分组为6个不同亚组。这些亚组之一是枯草杆菌蛋白酶家族，该家族包括枯草杆菌酶，如(诺维信公司(NovozymesA/S))和(汉高公司(HenkelAG))。这些年来，枯草杆菌蛋白酶和其他蛋白酶已经被基因工程化以提高其性能。典型地，将这些蛋白酶设计为满足不同目的，如增加其洗涤性能，例如，在低温条件下，和/或增加其去除某些污渍的能力。商业上已知的基因工程蛋白酶包括(诺维信公司)、PurafectPurafect和(丹尼斯克/杜邦公司(Danisco/DuPont))。尽管存在针对各种目的所设计的许多优化的蛋白酶，但是污渍和污物的组成非常复杂，并且洗涤条件和洗涤剂组合物改变以满足不同使用者需要。所有这些因素使得获得在清洗和洗涤剂中使用的不同类型的蛋白酶是有利的。专利技术概述本专利技术涉及具有蛋白酶活性的分离的芽孢杆菌属多肽，这些多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)与SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少85％序列一致性的多肽；(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列具有至少85％序列一致性；(c)SEQIDNO:2的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入；及(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性；(e)与SEQIDNO:4的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽；(f)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:3的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性；(g)SEQIDNO:4的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入；及(h)(e)、(f)或(g)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性；(i)与SEQIDNO:6的成熟多肽具有至少90％序列一致性的多肽；(j)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:5的成熟多肽编码序列具有至少90％序列一致性；(k)SEQIDNO:6的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入；及(l)(i)、(j)或(k)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性。本专利技术还涉及编码本专利技术多肽的分离的多核苷酸；包括这些多核苷酸的核酸构建体；重组表达载体；重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。本专利技术还涉及本专利技术的蛋白酶在洗涤剂、清洁和洗涤剂组合物中的用途，进行清洁和去污过程的方法。本专利技术还涉及编码包括SEQIDNO:2的氨基酸-110至-84或由其组成的信号肽的多核苷酸、编码包括SEQIDNO:2的氨基酸-83至-1或由其组成的前肽的多核苷酸、或编码包括SEQIDNO:2的氨基酸-110至-1或由其组成的信号肽和前肽的多核苷酸，其每一者被可操作地连接至编码蛋白质的基因；包括这些多核苷酸的核酸构建体、表达载体和重组宿主细胞；以及产生蛋白质的方法。本专利技术还涉及编码包括SEQIDNO:4的氨基酸-103至-77或由其组成的信号肽的多核苷酸、编码包括SEQIDNO:4的氨基酸-76至-1或由其组成的前肽的多核苷酸、或编码包括SEQIDNO:4的氨基酸-103至-1或由其组成的信号肽和前肽的多核苷酸，其每一者被可操作地连接至编码蛋白质的基因；包括这些多核苷酸的核酸构建体、表达载体和重组宿主细胞；以及产生蛋白质的方法。本专利技术还涉及编码包括SEQIDNO:6的氨基酸-106至-78或由其组成的信号肽的多核苷酸、编码包括SEQIDNO:6的氨基酸-77至-1或由其组成的前肽的多核苷酸、或编码包括SEQIDNO:6的氨基酸-106至-1或由其组成的信号肽和前肽的多核苷酸，其每一者被可操作地连接至编码蛋白质的基因；包括这些多核苷酸的核酸构建体、表达载体和重组宿主细胞；以及产生蛋白质的方法。序列表综述SEQIDNO:1是芽孢杆菌属物种(Bacillussp)-1蛋白酶的DNA序列SEQIDNO:2是如从SEQIDNO:1推导的氨基酸序列SEQIDNO:3是病研所芽孢杆菌(Bacillusidriensis)蛋白酶的氨基酸序列SEQIDNO:4是如从SEQIDNO:3推导的氨基酸序列SEQIDNO:5是芽孢杆菌属物种-2蛋白酶的DNA序列SEQIDNO:6是如从SEQIDNO:5推导的氨基酸序列SEQID:NO:7是成熟芽孢杆菌属物种-1蛋白酶的氨基酸序列。SEQIDNO:8是成熟病研所芽孢杆菌蛋白酶的氨基酸序列SEQIDNO:9是成熟芽孢杆菌属物种-2蛋白酶的氨基酸序列。SEQIDNO:10是TY-145蛋白酶(WO2004/067737，SEQIDNO:1)的氨基酸序列。SEQIDNO:11芽孢杆菌属物种-1蛋白酶的正向引物SEQIDNO:12芽孢杆菌属物种-1蛋白酶的反向引物SEQIDNO:13病研所芽孢杆菌蛋白酶的正向引物SEQIDNO:14病研所芽孢杆菌蛋白酶的反向引物SEQIDNO:15芽孢杆菌属物种-2蛋白酶的正向引物SEQIDNO:16芽孢杆菌属物种-2蛋白酶的反向引物SEQIDNO:17是迟缓芽孢杆菌的氨基酸序列SEQIDNO:18是疏棉状嗜热丝孢菌(Termomyceslanuginosus)的氨基酸序列SEQIDNO:19是芽孢杆菌属物种的氨基酸序列SEQIDNO:20是盐敏芽孢杆菌(Bacillushalmapalus)的氨基酸序列SEQIDNO:21是芽孢杆菌属物种的氨基酸序列SEQIDNO:22是噬纤维菌属物种的氨基酸序列<本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有蛋白酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少85％序列一致性的多肽；与SEQ ID NO:4的成熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽；与SEQ ID NO:6的成熟多肽具有至少89％序列一致性的多肽；(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列具有至少85％序列一致性；由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:3的成熟多肽编码序列具有至少80％序列一致性；由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:5的成熟多肽编码序列具有至少89％序列一致性；(c)SEQ ID NO:2、4或6的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失和/或插入；及(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.12.20 EP 13198809.91.一种具有蛋白酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：
(a)与SEQIDNO:2的成熟多肽具有至少85％序列一致性的多肽；与SEQIDNO:4的成
熟多肽具有至少80％序列一致性的多肽；与SEQIDNO:6的成熟多肽具有至少89％序列一
致性的多肽；
(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:1的成熟多肽编码序列具有
至少85％序列一致性；由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQIDNO:3的成熟多肽
编码序列具有至少80％序列一致性；由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQID
NO:5的成熟多肽编码序列具有至少89％序列一致性；
(c)SEQIDNO:2、4或6的成熟多肽的变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处
包括取代、缺失和/或插入；及
(d)(a)、(b)或(c)的多肽的片段，该片段具有蛋白酶活性。
2.根据权利要求1所述的多肽，该多肽包括SEQIDNO:2、4、6或SEQIDNO:2、4或6的成
熟多肽或由其组成。
3.根据权利要求2所述的多肽，其中该成熟多肽是SEQIDNO:2的氨基酸1至313，该成
熟多肽是SEQIDNO:4的氨基酸1至314或该成熟多肽是SEQIDNO:6的氨基酸1至314。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，该多肽是SEQIDNO:2、4或6的成熟多肽的
变体，该变体在一个或多个位置处包括取代、缺失和/或插入。
5.一种组合物，包括根据权利要求1至4中任一项所述的多肽。
6.根据权利要求5所述的组合物，该组合物是洗涤剂组合物，例如用于衣物洗涤或自动
餐具洗涤的组合物。
7.根据权利要求6所述的组合物，该组合物进一步包括一种或多种另外的酶，其中所述
一种或多种另外的酶选自以下项：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖
酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解...
【专利技术属性】
技术研发人员：M杰曼森，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK
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