miR-1304在转移性肺鳞癌诊治中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种miRNA标记物，该miRNA标记物是miRNA‑1304。miRNA‑1304可用于判断肺鳞癌是否发生转移或者预判肺鳞癌转移风险。经检验证明，miRNA‑1304可有效区分肺鳞癌转移样本和非转移样本。在此基础上，miRNA‑1304还可以用于制备抑制肺鳞癌转移或预防肺鳞癌转移的药物。本发明专利技术为临床在分子水平上诊断肺鳞癌转移提供了新的诊断方法，同时为肺鳞癌转移的基因治疗提供了新的药物靶点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及miR-1304在转移性肺鳞癌诊治中的应用。
技术介绍
非小细胞肺癌是造成全世界癌症相关死亡的首要原因之一。它主要包括四种组织学亚型：腺癌、鳞状细胞癌、大细胞癌和其他(神经内分泌癌，良性肿瘤等)。鳞状细胞癌大约占所有非小细胞肺癌的30％，是致死率仅次于腺癌的非小细胞癌，肺鳞癌多见于老年男性，与吸烟有密切关系。由于非小细胞肺癌的五年生存率低于15％，早期诊断能有效的降低其死亡率。miRNA是天然存在于体内的21-22nt的非编码RNA分子，是一类通过转录后基因沉默对靶基因表达进行调节的RNA。据估计，生物体内约有1/3的基因受miRNA的调控。miRNA与RISC的复合体通过碱基配对可与靶基因mRNA5’-UTR或者3’-UTR中的互补序列相结合，抑制蛋白质翻译，或是引发mRNA降解，从而负调控靶基因的表达。检测miRNA的表达水平可以为疾病的临床诊断提供参考。而miRNA的异常表达直接导致一些与疾病发生相关基因的表达异常，诱发疾病的发生。已有报道证明miRNA可以通过调控靶基因mRNA的表达，在疾病发生、发展及转移中发挥重要作用。在未来临床治疗中，miRNA不仅可以成为新的疾病早期诊断和疾病进程相关的标记物，而且也有望通过改变miRNA的表达或者其靶基因的表达治疗疾病。寻找和鉴定与疾病发生相关的miRNA及其靶基因为miRNA的临床治疗提供基础。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种可用于早期诊断肺鳞癌转移的微小RNA标记物。本专利技术的目的之二在于提供上述微小RNA的用途。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了一种微小RNA在制备肺鳞癌转移诊断工具中的应用，所述微小RNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR-1304。应当知道，本专利技术的微小RNA包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，其显示完整微小RNA核酸分子相同的功能，尽管它们通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。本领域人员应该了解，为了保证微小RNA的稳定性，可以在微小RNA的一端或者两端增加保护性碱基，如TT，也可对微小RNA碱基进行修饰，但是上述修饰不影响微小RNA的功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miR-1304功能的条件下，对miR-1304进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。在本专利技术的一些具体的实施方式中，所述miR-1304是成熟miR-1304。成熟miR-1304包括miR-1304-3p和miR-1304-5p。优选的，本专利技术的成熟miR-1304是miR-1304-5p。虽然在某些具体实施方式中所使用的是成熟miRNA，但是本领域技术人员可以预期，初始miRNA、前体miRNA将可以获得与成熟miRNA同样的技术效果，因为细胞有能力进一步将初始miRNA、前体miRNA加工为成熟miRNA。本专利技术的微小RNA核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟miRNA主要呈单链形式，而前体miRNA是部分自互补的，以形成双链结构。本专利技术的核酸分子可以是RNA、DNA、PNA、LNA的形式。进一步，上述诊断工具包括但不限于，芯片、试剂盒、试纸、高通量测序平台。所述诊断工具包括用于检测样本中miR-1304的表达水平的试剂。进一步，所述样本的来源是肺组织。进一步，所述试剂盒包括针对miR-1304的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miR-1304的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-1304的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对miR-1304的引物和/或探针。本专利技术提供了一种肺鳞癌转移的诊断工具，所述诊断工具包括检测样本中miR-1304表达水平的试剂。进一步，所述样本的来源是肺组织。进一步，所述诊断工具包括试剂盒、芯片、试纸、高通量测序平台。进一步，所述试剂盒包括针对miR-1304的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于miR-1304的部分或全部序列；所述试纸包括针对miR-1304的引物和/或探针；所述高通量测序平台包括针对miR-1304的引物和/或探针。进一步，所述试剂盒中的针对miR-1304的引物和/或探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于检测前面所述的微小RNA表达水平的引物和/或探针。将多种微小RNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种微小RNA指标联合诊断肺鳞癌的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。进一步，所述芯片上固定的所述寡核苷酸探针还可包括针对现有技术中已经报道的可用于检测miR-1304的表达水平的寡核苷酸探针。将多种miRNA的检测探针放置在同一芯片上通过检测多种miRNA指标联合诊断肺鳞癌也包含在本专利技术的保护范围之内。进一步，所述固相载体包括所述固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料，例如但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。所述的miRNA芯片的制备可采用本领域已知的生物芯片的常规制造方法，例如，如果固相载体采用的是修饰玻片或硅片，探针的5’端含有氨基修饰的聚dT串，可将寡核苷酸探针配制成溶液，然后采用点样仪将其点在修饰玻片或硅片上，排列成预定的序列或阵列，然后通过放置过夜来固定，就可得到本专利技术的miRNA芯片。如果核酸不含氨基修饰，则其制备方法也可参照：王申五主编的《基因诊断技术-非放射性操作手册》；J.L.erisi，V.R.Iyer，P.O.BROWN.Exploringthemetabolicandgeneticcontrolofgeneexpressiononagenomicscale.Science，1997；278：680和马立人，蒋中华主编.生物芯片.北京：化学工业出版社，2000，1-130。本专利技术的miR-1304可以是天然的或是人工合成的，或者使用可以表达miR-1304的DNA片段的载体转染细胞获得。所述载体包括病毒载体、真核载体。病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(例如单纯疱疹病毒、痘苗病毒及EB病毒)载体、本文档来自技高网...

【技术保护点】
微小RNA在制备肺鳞癌转移诊断工具中的应用，其特征在于，所述微小RNA选自以下组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR‑1304。

【技术特征摘要】
1.微小RNA在制备肺鳞癌转移诊断工具中的应用，其特征在于，所述微小RNA选自以下
组：初始miRNA、前体miRNA、成熟miRNA；初始miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟
miRNA；前体miRNA能在人细胞内被剪切并表达成成熟miRNA；所述微小RNA是miR-1304。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微小RNA是成熟miR-1304。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述诊断工具包括检测样本中权利要求1
所述的微小RNA表达水平的试剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述样本的来源为肺组织。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述诊断工具包括试剂盒、芯
片、试纸、或高通量测序平台。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括针对权利要求1所述的微
小RNA的引物和/或探针；所述芯片包括固相载体，以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸
探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨承刚，边洋，肖枫，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11