一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，包括背衬底板，该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质标记的NGAL单克隆抗体；该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的NGAL单克隆抗体，该质控线包被有羊抗鼠IgG。本实用新型专利技术具有灵敏度高，特异性强、稳定性好和无放射性污染等特点，可广泛应用于NGAL的临床免疫检验和科学研究中。

【技术实现步骤摘要】


本技术属于免疫层析检测
，具体涉及一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条。

技术介绍

急性肾损伤(Acutekidneyinjury，AKI)是由多种原因引起的肾功能在短时间内下降而出现的临床综合征。迄今为止，AKI依然是十分常见而严重的临床问题。如果在AKI的早期阶段进行治疗，可以很大程度上降低肾衰竭的发生。因此尽早诊断AKI已成为肾病治疗的一个关键因素。但缺乏特异性的早期临床诊断指标，是治疗该病的主要障碍，导致AKI的发生率、病死率居高不下。人类中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL，载脂蛋白-2)是由中性粒细胞和某些上皮细胞如肾小管所表达的微量蛋白。缺血性或肾毒性肾损伤时，NGAL由肾脏大量表达，并被释放到尿液和血浆。NGAL含量在损伤发生后2小时内升高，是一种早期且敏感的肾损伤标志，成为一种高效的新型AKI早期肾损伤临床诊断标志物。截止目前还未有一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条。

技术实现思路

本技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条。
本技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，包括背衬底板，该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质标记的NGAL单克隆抗体；该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的NGAL单克隆抗体，该质控线包被有羊抗鼠IgG。
一实施例中：所述时间分辨荧光物质为镧系元素、镧系元素与乳胶的结合物、镧系元素的螯合物中的一种。
一实施例中：所述镧系元素为铕，铽，钐或镝中的一种。
一实施例中：所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜。
一实施例中：所述样品结合垫为玻璃纤维素膜或聚酯膜经含有表面活性剂的缓冲液预封闭后干燥而得。
一实施例中：所述试纸条外还包裹有一壳体。
本技术方案与
技术介绍
相比，它具有如下优点：
1.传统的定量检测试纸条分别设有样品垫和结合垫，血清/血浆等样品首先与样品垫接触，样品垫对样品进行预处理，去除样品中杂质颗粒，调节样品液pH值或粘度等，减缓样品渗透速度，有利于样品的均匀分布；经样品垫预处理过后的均匀的样品再流动至结合垫上与标记抗体发生结合，才能够保证定量反应的准确性，如果不经预处理，样品在结合垫上的结合量无法把握，且结合稳定性也差，更加难以实现定量效果；而本技术采用一个样品结合垫代替传统的样品垫和结合垫，该样品结合垫上准确而均匀地分布有标记抗体，既能保证样品得到预处理，又能保证样品结合一定量的标记抗体，保证了定量反应的准确性，经检测，准确度和精密度良好；同时，也使得试纸条结构和制备过程得到简化。
2.本技术的NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，利用时间分辨荧光免疫分析(time-resolvedfluoro-immunoassay，TRFIA)这种新型非放射性标记免疫分析技术。与传统的荧光素标记不同，采用具有独特荧光特性的镧系元素及其螯合物作为时间分辨荧光物质，镧系元素激发光与发射光之间的Stokes位移较大，避免了激发及发射光谱存在的重叠问题，排除激发光的干扰，通过波长分辨方式使其明显的区别于背景荧光；且镧系元素激发光光谱较宽，可采用只允许发射荧光通过的滤光片，从而进一步将抢特异性荧光和背景荧光区分开，消除干扰；镧系离子螯合物的荧光衰变时间长，为传统荧光的103～106倍，通过测定时间差可以实现高信噪比；同时其可以反复接受激发，从而大大提高仪器探测到的信号值，有效排除样品自然荧光的干扰，具有灵敏度高，特异性强、稳定性好和无放射性污染等特点，可广泛应用于NGAL的临床免疫检验和科学研究中。
3.本技术的NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条制作方便，可批量生产；体积小，便于携带。
附图说明
下面结合附图和实施例对本技术作进一步说明。
图1为本技术的NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条结构示意图。
附图标记：样品结合垫1；时间分辨荧光物质标记的NGAL单克隆抗体2；硝酸纤维素膜3；检测线4；质控线5；吸水膜6；背衬底板7。
具体实施方式
下面通过实施例具体说明本技术的内容：
请查阅图1，一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，包括背衬底板7，该背衬底板7上设置有硝酸纤维素膜3、样品结合垫1和吸水膜6，该样品结合垫1和吸水膜6分别叠压在硝酸纤维素膜3的两端上；该样品结合垫1上包被有时间分辨荧光物质标记的NGAL单克隆抗体2；该硝酸纤维素膜3上设有检测线4(T线)和质控线5(C线)，检测线4(T线)包被有另一个表位的NGAL单克隆抗体，质控线5(C线)包被有羊抗鼠IgG。
上述试纸条可以通过以下制备方法制备：
1)硝酸纤维素膜(NC膜)处理
将NC膜贴至背衬底板的制定位置，取10mM的pH7.4磷酸盐缓冲液将另一个表位的NGAL单克隆抗体稀释至1mg/ml，用于制备T线；用0.05M的MES缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1mg/ml，用于制备C线；按1μl/cm划液量，通过biodot划膜仪将上述两种稀释后的抗体均匀的划至NC膜上制备T线和C线；将划好的NC膜放置于37℃干燥箱中，干燥过夜。
2)样品结合垫的处理
取玻璃纤维素膜用含有表面活性剂的缓冲液(配方：100mMPB(pH7.4)，其中含有1.5％NaCl，5％BSA、0.5％吐温-20和5％蔗糖)浸泡10min进行预封闭后，取出，沥干水分，50℃干燥过夜；通过Biodot仪器的airjet喷头，将标记有时间分辨荧光物质乳胶微球的NGAL单克隆抗体按照10μl/cm的量超声喷雾至干燥好的玻璃纤维素膜上，50℃干燥过夜，制备得到样品结合垫。
本实施例之中，所述时间分辨荧光物质乳胶微球为含铕乳胶微球，即时间分辨荧光物质为镧系元素铕与乳胶的结合物；根据需要，所述时间分辨荧光物质可以调整为镧系元素、镧系元素与乳胶的结合物、镧系元素的螯合物中的一种；镧系元素可以为铕，铽，钐或镝中的一种。
3)组装
将步骤2)得到的样品结合垫固定叠压在步骤1)得到的硝酸纤维素膜的一端，并将吸水膜固定叠压在硝酸纤维素膜的另一端，用裁膜仪按每条4mm的宽度进行裁剪，并装入层析条壳体中，即得成品。
本技术的试纸条利用双抗夹心法进行检测：将待测样品量取75μL滴加到样品垫上，样品中的NGAL与样品垫上时间分辨荧光物质标记的NGAL单克隆抗体结合，形成抗原-标记抗体复合物。经层析原理，依次与硝酸纤维素膜上的另一个表位的NGAL抗体(T线)和羊抗鼠IgG抗体(C线)形成抗体-抗原-标记抗体复合物。在时间分辨荧光分析仪的激发光激发下，标记元素显现荧光，结合的标记抗体越多，荧光强度越高，从而进行定量检测。
健康人群尿液中NGAL平均浓度为5.3ng/mL(范围0.7～9.6ng/mL)；血浆中NGAL平均浓度63ng/mL(范围3～106ng/mL)。肾损伤后NGAL水平急剧上升。任意选择的重症监护室患者尿本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：包括背衬底板，该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质标记的NGAL单克隆抗体；该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的NGAL单克隆抗体，该质控线包被有羊抗鼠IgG。

【技术特征摘要】
1.一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：包括背衬底
板，该背衬底板上设置有硝酸纤维素膜、样品结合垫和吸水膜，该样品结合垫和吸水膜分别
叠压在硝酸纤维素膜的两端上；该样品结合垫上包被有时间分辨荧光物质标记的NGAL单
克隆抗体；该硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，该检测线包被有另一个表位的NGAL
单克隆抗体，该质控线包被有羊抗鼠IgG。
2.根据权利要求1所述的一种NGAL时间分辨荧光纳米免疫层析定量检测试纸条，其
特征在于：所述时间分辨荧光物质为镧系元素、镧系元素与乳胶的结合物、镧系元素的螯合
物中的一种。
3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟伟波，许元峰，卢志珍，
申请(专利权)人：厦门依柯利斯医疗科技有限公司，
类型：新型
国别省市：福建;35