一种法医学硅藻检验方法技术

本发明专利技术公开了一种法医学硅藻检验方法，包括如下步骤：按比例取磺胺二甲嘧啶、丙烯酸、丙烯酰胺、N’N‑亚甲基双丙烯酰胺、过硫酸铵和去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h制备薄膜状的印迹水凝胶；将所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，超声振荡去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶后，浸泡在待检测样品内5‑10min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理。本发明专利技术回收率高、效率高、性价比高、易于推广，定性定量分析准确、劳动强度低。

【技术实现步骤摘要】
一种法医学硅藻检验方法
本专利技术涉及及藻类检验领域，具体涉及一种法医学硅藻检验方法。
技术介绍
硅藻是一种单细胞藻类，全世界约有16000多种，体长一般在1μm至200μm之间，其最明显的特征是细胞壁除个别种类外，均高度硅质化，形成上、下两个透明的壳，以壳环带套合形成一个硅质细胞壁。硅藻的生活环境非常广泛，自然界中的水域，几乎都能见到硅藻的踪迹。水中尸体是法医学尸体检验中常见的类型。20世纪40年代以来，许多法医学者在溺死者尸体上证实，硅藻可由循环系统进入多个脏器。硅藻细胞壁因抵抗力强而不易被破坏，硅质含量高者，使用浓硫酸、浓硝酸煮沸甚至高温烧灼也不被破坏。因此，硅藻检验是解决水中尸体的死因问题的一种可靠手段。法医学实践中，1-30g组织器官消解后通常会留下10-50ml的消解液，离心是富集水样或组织器官消解液中硅藻的常用方法。如GA/T813-2008标准(《人体组织器官中硅藻硝酸破机法检验》)中，将消化后的消解液倒入离心管经反复离心后制片；最后采用光镜观察法，以10倍或40倍物镜检查硅藻。根据胡孙林等研究报道表明，离心一次导致大约10％的硅藻损失，增加离心速度不能显著提高硅藻的回收率，因此导致脏器组织中硅藻回收率低。由于真空抽滤的方法也可富集硅藻，但是滤膜本身是不透明的，无法直接置于光学显微镜下观察，因此胡孙林等尝试使用真空抽滤-自动化扫描电镜的方法观察硅藻。虽然电子显微镜的分辨率高、观察清晰，但是，鉴于其操作复杂、成本较高、维护费用高的特点，使得电子显微镜只能在一些大中型实验室和科研机构使用，无法广泛应用于基层法医学实验室。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种法医学硅藻检验方法，检验灵敏度高、检验效率高、又不会显著增加设备成本，还具有环境友好的优点，并可满足现场、高通量检测的需求。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种法医学硅藻检验方法，包括如下步骤：S1、分别取0.15-0.19份磺胺二甲嘧啶、12-16份丙烯酸、25-35份丙烯酰胺、0.8-1份N’N-亚甲基双丙烯酰胺、0.8-1份过硫酸铵和35-45份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5-10min，以去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶；S3、将步骤S3所得的印迹水凝胶浸泡在待检测样品内5-10min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理。优选地，所述待检验样品为水样、气管内溺液或组织器官的消解液。本专利技术具有以下有益效果：1)回收率高，采用特制的水凝胶富集硅藻，避免了传统离心富集法中多次离心处理过程所导致硅藻的损失，所采用的水凝胶是透明的，光线可大量透过滤膜以保证光镜观察。光学显微镜观察结果表明，采用水凝胶并不影响其定量。因此，与传统的离心富集法相比，使用滤膜富集法从水样和组织消解液中富集硅藻，操作更为简便，回收率更高。2)、效率高、性价比高、易于推广。水凝胶的制备，硅藻的富集步骤操作简便、花费时间短，每种检材只需富集一次，制片一张，避免了传统离心富集法的多次反复离心，多次涂片、制片，既费时费力，又使回收率降低。膜透明化步骤简单，时间短，其非常适用于经费少、规模小但叉广泛分布的基层实验室。3)定性定量分析准确、劳动强度低。使用特制的水凝胶富集法制片提高了硅藻回收率，制片量减少，无需过多的培训和操作，并能结合计算机自动化识别方式对所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理，这些都能显著降低分析人员的劳动强度。具体实施方式为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1S1、分别取0.15份磺胺二甲嘧啶、12份丙烯酸、25份丙烯酰胺、0.8份N’N-亚甲基双丙烯酰胺、0.8份过硫酸铵和35份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5min，以去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶；S3、将步骤S3所得的印迹水凝胶浸泡在待检测样品内5min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理；其中，所述待检验样品为水样、气管内溺液或组织器官的消解液。实施例2S1、分别取0.19份磺胺二甲嘧啶16份丙烯酸、35份丙烯酰胺、1份N’N-亚甲基双丙烯酰胺、1份过硫酸铵和45份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡510min，以去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶；S3、将步骤S3所得的印迹水凝胶浸泡在待检测样品内10min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理；其中，所述待检验样品为水样、气管内溺液或组织器官的消解液。实施例3S1、分别取0.17份磺胺二甲嘧啶、14份丙烯酸、30份丙烯酰胺、0.9份N’N-亚甲基双丙烯酰胺、0.9份过硫酸铵和40份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡7.5min，以去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶；S3、将步骤S3所得的印迹水凝胶浸泡在待检测样品内7.5min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理；其中，所述待检验样品为水样、气管内溺液或组织器官的消解液。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种法医学硅藻检验方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、分别取0.15‑0.19份磺胺二甲嘧啶、12‑16份丙烯酸、25‑35份丙烯酰胺、0.8‑1份N’N‑亚甲基双丙烯酰胺、0.8‑1份过硫酸铵和35‑45份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5‑10min，以去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶；S3、将步骤S3所得的印迹水凝胶浸泡在待检测样品内5‑10min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理。

【技术特征摘要】
1.一种法医学硅藻检验方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、分别取0.15-0.19份磺胺二甲嘧啶、12-16份丙烯酸、25-35份丙烯酰胺、0.8-1份N’N-亚甲基双丙烯酰胺、0.8-1份过硫酸铵和35-45份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵峰，
申请(专利权)人：山东政法学院，
类型：发明
国别省市：山东;37