人EIF3A基因的用途及其相关药物制造技术

本发明专利技术公开了人EIF3A基因的用途及其相关药物。本发明专利技术公开了人EIF3A基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途。本发明专利技术还进一步构建了人EIF3A基因小分子干扰RNA、人EIF3A基因干扰核酸构建体、人EIF3A基因干扰慢病毒并公开了它们的用途。本发明专利技术提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人EIF3A基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中EIF3A基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
，更具体地涉及人EIF3A基因的用途及其相关药物。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进行转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi(TuschlT,ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000；101:25-33.)。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程(Uprichard,SusanL.ThetherapeuticpotentialofRNAinterference.FEBSLetters2005；579:5996-6007.)。真核生物蛋白合成包括起始、延伸、终止三个阶段，这一复杂的生理过程在细胞质内的核糖体上进行，有一系列称为真核翻译起始因子(eifs)的蛋白因子参与。至今为止发现13种起始因子，其中分子量最大的一个eIF3包含8-11个亚基，并在蛋白合成超始途径中起重要的作用。在缺乏其它起始因子的条件下，eIF3可结合核糖体40s小亚基从而维持40s与60s亚基的解离状态，同时还能稳定和促进三元复合物eIF2-GTP-甲硫氨酸与5’端mRNA的作用[KolupaevaVG,UnbehaunA,LomakinIB,HellenCU,PestovaTV.Bindingofeukaryoticinitiationfactor3toribosomal40Ssubunitsanditsroleinribosomaldissociationandanti-association.RNA.2005Apr；11(4):470-86.ZhouM,SandercockAM,FraserCS,RidlovaG,StephensE,SchenauerMR,Yokoi-FongT,BarskyD,LearyJA,HersheyJW,DoudnaJA,RobinsonCV.MassspectrometryrevealsmodularityandacompletesubunitinteractionmapoftheeukaryotictranslationfactoreIF3.ProcNatlAcadSciUSA.2008Nov25；105(47):18139-44]。关于EIF3A在肿瘤相关领域的报道很少。为了研究EIF3A和肿瘤的相关性，本专利技术选取结肠癌细胞模型，以RNAi为手段研究EIF3A在结肠癌发生和发展中的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开与人EIF3A基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰(RNAi)为手段研究EIF3A基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。本专利技术第一方面，以RNA干扰为手段，研究了EIF3A基因在肿瘤发生和发展中的作用，公开了一种抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿瘤细胞施用一种能够特异性抑制EIF3A基因的转录或翻译，或能够特异性抑制EIF3A蛋白的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。所述肿瘤细胞选自其生长与EIF3A蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的，所述肿瘤细胞选自结肠癌。所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用量为足够降低EIF3A基因的转录或翻译，或者足够降低EIF3A蛋白的表达或活性的剂量。进一步的，所述EIF3A基因的表达至少被降低50％、80％、90％、95％或99％。所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒。所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶III制备的小干扰RNA(esiRNA)或者短发夹RNA(shRNA)。所述双链RNA、核酶、esiRNA或者shRNA含有EIF3A基因的启动子序列或EIF3A基因的信息序列。进一步的，所述双链RNA为小干扰RNA(siRNA)。所述小干扰RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与EIF3A基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。所述小分子干扰RNA能特异性结合靶序列所编码的mRNA片段，并特异性沉默人EIF3A基因的表达。进一步的，所述小干扰RNA的第一链序列与EIF3A基因中的靶序列基本相同。较优的，所述EIF3A基因中的靶序列含有如SEQIDNO:1任一所示的序列。所述EIF3A基因中的靶序列即为所述小分子干扰RNA特异性沉默EIF3A基因表达时，与所述的小分子干扰RNA互补结合的mRNA片段所对应的EIF3A基因中的片段。较佳的，所述EIF3A基因来源于人。本专利技术第一方面还公开了一种分离的人EIF3A基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。进一步的，所述肿瘤选自结肠癌。所述将分离的EIF3A基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容：其一，将EIF3A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂；其二，将EIF3A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂。所述将EIF3A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制剂具体是指：将EIF3A基因作为RNA干扰作用的靶标，来研制针对肿瘤细胞的药物或制剂，从而能降低肿瘤细胞内EIF3A基因的表达水平。所述将EIF3A基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物或制剂具体是指：将EIF3A基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制或促进人EIF3A基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如本专利技术所述的EIF3A基因小分子干扰RNA(siRNA)即是以人EIF3A基因为作用对象筛选获得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的人EIF3A基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.一种分离的人EIF3A基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的
用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自结肠癌。
3.一种降低肿瘤细胞中EIF3A基因表达的分离的核酸分子，所述核酸分子包含：
a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与EIF3A基因杂交的核苷酸序
列；或者
b)shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与EIF3A基因杂交的核苷酸序列。
4.如权利要求3所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA包含第一链和第二
链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与
EIF3A基因中的靶序列基本相同；所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连
接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列
互补，并且所述正义链片段的序列与EIF3A基因中的靶序列基本相同。
5.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述EIF3A基因的靶序列含有
SEQIDNO:1的序列。
6.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA为小干扰RNA，
该小干扰RNA第一链的序列如SEQIDNO：13所示。
7.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQIDNO：
14所示。
8.一种EIF3A基因干扰核酸构建体，含有编码权利要求3-7任一权利要求所述分离的核酸
分子中的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA。
9.如权利要求8所述EIF3A基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述EIF3A基因干扰核
酸构建体为干扰慢病毒载体。
10.如权利要求9所述EIF3A基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述干扰慢病毒载体由
将编码所述shRNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，所述慢病毒载体选自：
pLKO.1-puro、pLKO....

【专利技术属性】
技术研发人员：聂勇战，吴开春，董加强，胡思隽，窦建华，唐光波，吴健，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61