本发明专利技术公开了鸡GnRHR‑2基因在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用，并具体获得了具体的序列和突变位点，即是指鸡的GnRHR‑2基因外显子2上第104bp处的一个T→C突变SNP位点在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。本发明专利技术的标记为鸡繁殖性能，尤其是开产日龄、300日龄总产蛋量的选育，提供了一种新的分子标记。实验证明，GnRHR‑2基因对开产日龄、300日龄总产蛋量有一定的影响，可以做为候选基因或开产日龄与300日龄产蛋量的遗传标记。而且，本发明专利技术的分子标记应用于鸡繁殖性能，尤其是开产日龄、300日龄总产蛋量的选育时，检测方法简单、快速，有很好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于禽类育种
更具体地，涉及鸡GnRHR-2基因在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。
技术介绍
禽类繁殖性状可根据实际育种需要进行适当的细分，如开产日龄、开产蛋重、总产蛋数、就巢率和就巢持续天数等，而总产蛋数又可进一步细分为总的合格蛋数、双黄蛋数、畸形蛋数等。目前，我国绝大部分的地方鸡种年产蛋量只有70~90枚，具有顽固的就巢性（Yangetal.，2005），如泰和丝羽乌骨鸡、杏花鸡等，繁殖性能较低，是制约优质鸡产业进一步发展的瓶颈。因此，提高优质鸡的繁殖性能是优质肉鸡和优质蛋鸡的共同需要，是优质鸡育种工作中需要重点解决的问题。鸡繁殖性状是一个复杂性状，具有遗传力低，易受环境影响等特点，受下丘脑-垂体-性腺轴（Hypothalamus-Pituitary-Gonadal-Axes，HPG）的高度调控，促性腺激素释放激素（Gonadotrophinreleasinghormone，GnRH）被认为是生殖激素的中枢调节器（Millar，2005）。GnRH是由下丘脑分泌产生的神经激素。下丘脑在光照的刺激下释放GnRH，通过垂体门脉，刺激促性腺激素（gonadotropinhormone，GtH）合成与分泌，同时作用于卵巢，调节卵巢卵泡的生长发育并产生甾体激素，促使卵泡颗粒细胞合成孕酮并使鸡的卵泡膜大量增多，通过诱导排卵来提高鸡的产蛋量。但是，由于GnRH是大分子物质不能通过细胞膜，只能通过与其膜上的受体（gonadotropinreleasinghormonereceptor，GnRHR）结合从而发挥其生物学作用，所以GnRHR对动物的生殖也有极其重要的影响。GnRHR是具有7次跨膜结构的膜蛋白，属于G蛋白偶联受体家族（G-protein-coupledreceptorfamily，GPCR）（Papageorgiou等，2005），与G蛋白（Gq）和磷脂酶（phospholipase）偶联。垂体促性腺细胞质膜上的促性腺激素释放激素受体与GnRH结合后，一系列细胞内信号通路被激活从而调节和表达各种生物学功能（肖杰文等，2008）。而在禽类上，鸡GnRHR家族已经鉴定出2种类型，鸡GnRHR-1基因在下丘脑、垂体等性腺组织和非性腺组织中广泛表达（Sun等，2001），该基因位于10号染色体（+）链上，大小为1,482bp，包括4个外显子和3个内含子；GnRHR-2基因主要在垂体中表达（Joseph等，2006；Shimizu等，2006；张涛等，2014），位于10号染色体（-）链，大小为2,309bp，包括4个外显子和3个内含子。目前已经发表的GnRHR基因多态位点与鸡繁殖性能相关的文献全部都是关于GnRHR-1基因的相关的研究（Wu等，2007；Xu等，2011；詹慧琴，2006；张旭等，2007；徐海平等，2011；朱凯等，2011；徐文娟等，2012）。而关于鸡GnRHR-2基因与鸡繁殖性状之间是否有关系？以及有何种关系？尚未见有相关的研究和报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中鸡繁殖性状的分子标记相关研究的不足，以及优质繁殖性能鸡的选育技术的不足，提供鸡GnRHR-2基因在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。具体是提供一个与鸡开产日龄、300日龄产蛋量相关的GnRHR-2基因上的位点，该位点可以作为分子标记，用于选育优质繁殖性能鸡。本专利技术的另一目的是提供上述与鸡开产日龄、300日龄产蛋量相关的GnRHR-2基因上的位点的应用。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：鸡GnRHR-2基因在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用，所述鸡GnRHR-2基因的序列如SEQIDNO.1所示。同时，鸡GnRHR-2基因在选育优质繁殖性能鸡方面的应用，也在本专利技术的保护范围之内。优选地，上述应用是指鸡GnRHR-2基因上的如SEQIDNO.2所示的基因片段在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。同时，鸡GnRHR-2基因上的如SEQIDNO.2所示的基因片段在选育优质繁殖性能鸡方面的应用，也在本专利技术的保护范围之内。更优选地，所述应用是指鸡的GnRHR-2基因外显子2上第104bp处的一个T→C突变SNP位点在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。更进一步地，上述应用是指基于鸡的GnRHR-2基因外显子2上第104bp处的一个T→C突变且产生了一个MspI内切酶位点的PCR-RFLP分型检测来研究该位点的多态性，以此判断鸡繁殖性状。优选地，所述鸡繁殖性状是指鸡开产日龄和/或300日龄产蛋量。具体判断的方法为：当PCR-RFLP分型检测的结果电泳图中，显示299bp的单一片段时为CC基因型个体，显示389bp单一片段时为TT基因型个体，当显示299bp和389bp两条片段时为CT基因型个体。CT基因型个体的开产日龄显著早于CC基因型个体、300日龄总产蛋数极显著高于CC型个体，为优势基因型。一种鸡繁殖性状的分子标记，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。一种鸡繁殖性状的分子标记，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。一种鸡繁殖性状的分子标记，所述分子标记为鸡的GnRHR-2基因外显子2上第104bp处的一个T→C突变SNP位点。上述鸡繁殖性状的分子标记（鸡的GnRHR-2基因外显子2上第104bp处的一个T→C突变SNP位点）在选育优质繁殖性能鸡方面的应用，也在本专利技术的保护范围之内。具体地，所述应用的方法为：（1）以鸡GnRHR-2基因DNA序列（序列如SEQIDNO.1所示）为模板，以引物F2（SEQIDNO.5）和引物R2（SEQIDNO.6）进行PCR扩增；（2）PCR-RFLP分型检测：取6μLPCR扩增产物，加入10UMspI限制性内切酶和1μL10×酶切缓冲液，加水至10μL；反应完成后，用2.5%琼脂糖凝胶电泳，电泳条件为电压100V，时间为40min，在凝胶成像系统中观察条带，根据产物的大小判定该位点在检测群体中的基因型；（3）当PCR-RFLP分型检测的结果电泳图中，显示299bp的单一片段时为CC基因型个体，显示389bp单一片段时为TT基因型个体，当显示299bp和389bp两条片段时为CT基因型个体；CT基因型个体的开产日龄显著早于CC基因型个体、300日龄总产蛋数极显著高于CC型个体，为优势基因型。其中，优选地，步骤（1）中PCR反应程序为：94℃变性3min；94℃30sec，58℃1min，72℃1min；35个循环；72℃延伸10min。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
鸡GnRHR‑2基因在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用，其特征在于，所述鸡GnRHR‑2基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.鸡GnRHR-2基因在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用，其特征在于，所述鸡
GnRHR-2基因的序列如SEQIDNO.1所示。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用是指鸡GnRHR-2基因上的如SEQID
NO.2所示的基因片段在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。
3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述应用是指鸡的GnRHR-2基因外显子2上第
104bp处的一个T→C突变SNP位点在作为鸡繁殖性状的分子标记方面的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述应用是指基于鸡的GnRHR-2基因外显子2
上第104bp处的一个T→C突变且产生了一个MspI内切酶位点的PCR-RFLP分型检测来研究该
位点的多态性，以此判断鸡繁殖性状；所述鸡繁殖性状是指鸡开产日龄和/或300日龄产蛋
量。
5.一种鸡繁殖性状的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
6.一种鸡繁殖性状的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。
7.一种鸡繁殖性状的分子标记，其特征在于，所述分子标记为鸡的GnRHR-2基...
【专利技术属性】
技术研发人员：周敏，谢丽红，
申请(专利权)人：南昌师范学院，
类型：发明
国别省市：江西;36
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