具有昆虫拒食活性和生长抑制活性的化合物及其制备方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，公开了从植物肉桂中分离提取的多种瑞诺烷二萜类化合物的活性及结构，提供了新瑞诺烷二萜化合物的分离制备方法。本发明专利技术揭示了该类化合物具有免疫抑制活性、昆虫拒食活性和生长抑制活性，其中具有免疫抑制活性的化合物表现为对ConA诱导的T细胞增殖有显著抑制作用，昆虫拒食活性和生长抑制活性表现为对甜菜夜蛾幼虫有拒食活性、对棉铃虫幼虫有拒食活性和对棉铃虫幼虫有生长抑制作用。这些化合物可用于制备免疫抑制、对昆虫有拒食活性和生长抑制活性的药物。

【技术实现步骤摘要】
本申请是2014103695394号专利申请的分案申请。原申请的申请日是：2014年7月30日。原申请的申请号是：201410369539.4。原申请的专利技术创造名称是：具有昆虫拒食活性和生长抑制活性的化合物及其制备方法。
本专利技术属于医药
，涉及瑞诺烷二萜化合物1-11的分离制备方法及用途。具体涉及分离纯化过程，结构确证，免疫抑制、昆虫拒食和生长抑制作用等。
技术介绍
自身免疫性疾病是仅次于心血管疾病和癌症的第三大疾病，目前已开发了大量的免疫抑制药物，主要用于防止器官移植中的排斥反应和抑制某些自身免疫性疾病的进展等。其中不少药物虽具有免疫抑制作用，但毒副作用强，容易造成全身性免疫抑制。寻找并开发出高效低毒的免疫抑制先导化合物是世界医药学界的一项重大课题。最新的研究发现，自身免疫性疾病和T细胞关系尤其密切。ConA能在体外刺激T细胞表面的受体，选择性激活T细胞过度增殖，因此，利用ConA建立的脾T细胞的增殖模型可快速、高效的筛选免疫抑制的化合物。甜菜夜蛾和棉铃虫都是世界范围内广泛分布的杂食性农业害虫，主要危害棉花、玉米、大豆和蔬菜等作物。目前防治甜菜夜蛾和棉铃虫仍然主要依赖于化学农药，但大量不合理地使用化学农药造成了土地、水、空气的污染，植物抗药性产生以及危害人体牲畜健康等灾害性弊端。因而植物性农药的开发成为近年来的研究热点，植物中的杀虫物质主要是次生代谢物质，不会污染环境，对农作物和生态环境相对安全，且昆虫也不易产生抗药性，因此植物性农药的开发应用在当前“绿色食品”生产中发挥着越来越重要的作用。肉桂皮是樟科植物肉桂树(CinnamomumcassiaPresl(Lauraceae))的干燥树皮，肉桂叶即为肉桂的干燥树叶。肉桂能调节人体免疫力，肉桂及其异瑞诺烷二萜具有抗补体的活性，肉桂具能驱虫、净化空气，肉桂中有能使昆虫拒食的活性成分。
技术实现思路
：本专利技术的任务是提供肉桂中具有生物活性的化合物及其分离制备方法和应用。实现本专利技术的技术方案是：从肉桂中分离得到瑞诺烷二萜类化合物的方法包括以下步骤：将干燥肉桂皮粉碎，用乙醇室温提取，合并乙醇提取液并减压回收浓缩成浸膏，得到总膏，热水将总膏分散至混悬状，依次用极性递增的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取液减压浓缩得乙酸乙酯部位，正丁醇部位，石油醚及氯仿部位去除。将乙酸乙酯部位进行硅胶柱层析，氯仿至甲醇梯度洗脱(氯仿/甲醇10:1-3:1)，氯仿/甲醇6:1时得一段Fr.1，Fr.1经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)得一部位，此部位再经凝胶、制备液相纯化得到化合物1；将正丁醇部位进行硅胶柱层析，氯仿至甲醇梯度洗脱(氯仿/甲醇10:1-3:1)，氯仿/甲醇8:1时得Fr.2，氯仿/甲醇6:1时得Fr.3，氯仿/甲醇5:1时得Fr.4，氯仿/甲醇4:1时得Fr.5；Fr.2经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)得一部位，此部位再经凝胶、制备液相纯化得到化合物4、5；Fr.3经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1-7:3)得二部位分别为Fr.3.1、Fr.3.2。Fr.3.1经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物2、6、7；Fr.3.2经凝胶、制备液相纯化得到化合物8、9；Fr.4经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)，再经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物3、11；Fr.5经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇8:2)得一部位，此部位再经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物10。本专利技术分离得到的瑞诺烷二萜类化合物1-11的结构式及名称见表1，分离流程见附图1。表1.本专利技术从肉桂中分离得到的瑞诺烷二萜类化合物1-11结构式其中化合物肉桂萜F、肉桂萜G为新骨架化合物，19-脱氧肉桂萜G16-葡萄糖苷和18-hydroxyperseanol为新化合物。化合物1的单晶衍射结构图见附图2，化合物2的单晶衍射结构图见附图3。本专利技术在免疫抑制活性筛选的指导下，对肉桂活性成分进行了系统研究。通过这11个化合物对ConA诱导的T细胞增殖抑制作用的研究，本专利技术发现化合物肉桂萜G和cinnacaslo对ConA诱导的T细胞有显著的抑制作用，表示其有显著的免疫抑制作用。通过对化合物1-7进行昆虫拒食及生长抑制活性的研究，发现化合物肉桂萜F、肉桂萜G和18-hydroxyperseanol对甜菜夜蛾幼虫有拒食活性，化合物肉桂萜F和18-hydroxyperseanol对棉铃虫幼虫有拒食活性；化合物1-7对棉铃虫幼虫有生长抑制作用。本专利技术提供了化合物1-11的植物来源，分离纯化方法，免疫抑制活性，昆虫拒食和生长抑制活性及应用。本专利技术在免疫抑制活性筛选的指导下，对肉桂免疫抑制活性成分进行了系统研究，分离得到了化合物1-11，其中化合物1、2为新骨架化合物，化合物3和4为新化合物。结构式如表1所示。通过这11个化合物对ConA诱导的T细胞增殖抑制作用的研究，发现化合物2和11对ConA诱导的T细胞有显著的抑制作用，表示其有显著的免疫抑制作用。通过对化合物1、2、4、5、6、8、9进行昆虫拒食及生长抑制活性的研究，发现化合物1、2和4对甜菜夜蛾幼虫有拒食活性，化合物2和4对棉铃虫幼虫有拒食活性；化合物1、2、4、5、6、8、9对棉铃虫幼虫有生长抑制作用。本专利技术所提供的免疫抑制活性，昆虫拒食活性和生长抑制活性化合物1、2、3、4和5的结构式如下：本专利技术化合物1、2、3、4分离制备方法是：将肉桂乙酸乙酯部位和正丁醇部位均由正相硅胶柱(流动相：氯仿/甲醇10:1-3:1梯度洗脱)划段；然后将得到的部分均经过反相硅胶(流动相：水/甲醇10:0-7:3梯度洗脱)再次进行划段；将分离得到的片段进一步经过凝胶、HPLC等分离得到化合物1、2、3、4。本专利申请实施例1陈述了本专利技术从肉桂中分离得到瑞诺烷二萜类化合物的具体方法。附图说明图1：实施例1流程图；图2：化合物1的单晶衍射结构图；图3：化合物2的单晶衍射结构图。具体实施方式实施例1：化合物的分离制备。50Kg干燥肉桂皮粉碎，用乙醇室温提取3次，每次7天，合并乙醇提取液并减压回收浓缩成浸膏，得到总膏5.1Kg，热水将总膏分散至混悬状，依次用极性递增的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取液减压浓缩得乙酸乙酯部位70g，正丁醇部位320g，石油醚及氯仿部位去除。化合物1(22mg)：乙酸乙酯部位70g进行硅胶柱层析，氯仿至甲醇梯度洗脱(氯仿/甲醇10:1-3:1)，氯仿/甲醇6:1时得一段Fr.1，Fr.1经过反相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从肉桂中分离得到下列瑞诺烷二萜类化合物11的方法，包括以下步骤：步骤一：将干燥肉桂皮粉碎，用乙醇室温提取，合并乙醇提取液并减压回收浓缩成浸膏，得到总膏，热水将总膏分散至混悬状，依次用极性递增的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收萃取液减压浓缩得乙酸乙酯部位，正丁醇部位，石油醚部位及氯仿部位；步骤二：将权利要求2之步骤一中得到的正丁醇部位进行硅胶柱层析，氯仿至甲醇梯度洗脱(氯仿/甲醇10:1‑3:1)，氯仿/甲醇5:1时得Fr.4；步骤三：将Fr.4经过反相硅胶柱色谱(水/甲醇9:1)，再经硅胶、凝胶、制备液相纯化得到化合物11。

【技术特征摘要】
1.一种从肉桂中分离得到下列瑞诺烷二萜类化合物11的方法，包括以下步骤：
步骤一：将干燥肉桂皮粉碎，用乙醇室温提取，合并乙醇提取液并减压回收浓缩成浸膏，
得到总膏，热水将总膏分散至混悬状，依次用极性递增的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃
取，回收萃取液减压浓缩得乙酸乙酯部位，正丁醇部位，石油醚部位及氯仿部位；
步骤二：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张勇慧，姚广民，曾俊芬，张锦文，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42