一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，所述方法包括依次采用酶处理、超声辅助溶剂提取、大孔吸附树脂分离提纯等步骤，通过工艺条件的优化而高效提取得到了金丝桃素，提高了提取物中金丝桃素的含量。该提取工艺原料易得，操作简单，提取成本低廉，生产成本可控，具有广泛的工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术涉及一种植物活性成分的提取，特别地涉及一种从贯叶连翘中提取金丝桃素药用活性成分的提取方法，属于药物活性成分的提取


技术介绍

贯叶连翘中含有多种生物活性物质，可检测到的活性化合物的种类主要分为：萘骈二蒽醌类(Naphtodianthrones)、黄酮类(Flavonoides)、间苯三酚类(Phloroglucinols)、原花青素(Procyanidins)、单宁类(Tannins)等。
其中，萘骈二蒽醌类(Naphtodianthrones)是该类植物的代表性化学成分，其包括：金丝桃素(Hypericin)、伪金丝桃素(Pseudohypericin)、原金丝桃素(Protohypercin)、原伪金丝桃素(Protopseudohypericin)和环伪金丝桃素(Cyclopseudohypericin)。
经过大量的研究发现，金丝桃素和伪金丝桃素对单纯疱疹病毒-1和-2、人类免疫缺陷病毒、流感病毒等有一定的抑制和杀灭活性。金丝桃素对集体的免疫系统也有一定的调节作用，在临床医学中对于自身免疫疾病(如器官排斥反应)的治疗有巨大的潜在应用价值。目前，国际市场对于金丝桃素提取物的需要日益增加。
贯叶连翘中金丝桃素的含量长期以来被作为贯叶连翘提取物的质控指标，国际市场普遍要求金丝桃素的质量含量不低于0.3%。
经过大量的深入研究，目前已经开发出了多种提取贯叶连翘活性成分的方法，例如：
CN1247071A公开了利用NaOH溶液浸提贯叶连翘原药，该方法所得成品中金丝桃素的含量为0.6%。
CN1385412A中利用KOH和/或NaHCO3溶液浸提两次，得到金丝桃素提取物。
CN1436562A和CN1689596A分别公开了利用柱色谱分离提纯金丝桃素，该方法虽然得到了金丝桃素的含量为0.6%的提取物，但其收率仅为2.7%，换算可知，金丝桃素的提取率仅仅为0.0162%。
CN1850766A得到金丝桃素浓缩液后，利用大孔吸附树脂分离提纯金丝桃素，所得浸膏中金丝桃素含量为0.9%，其收率只有万分之2-5，提取率更低。
因此，针对现有金丝桃素提取工艺状况，有必要研究一种能够从贯叶连翘中更高效提取和分离金丝桃素的生产方法，这也是当前该领域内的研究热点和重点之一。

技术实现思路

针对现有技术存在的诸多缺陷，本专利技术人经过大量的深入研究，在付出了充分的创造性劳动后，从而研发了一种从贯叶连翘中高效提取和分离提纯金丝桃素的方法，进而完成了本专利技术。
具体而言，本专利技术涉及一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，所述方法包括如下步骤：
步骤(1)：处理原料
取贯叶连翘部位，清洗，避光干燥，粉碎，过100-200目筛，得到贯叶连翘粉末。
在本专利技术的所述方法中，所述贯叶连翘部位为贯叶连翘的花、叶、果实或各部位的混合物，优选贯叶连翘的花或叶或幼果或它们任意几种的混合物。
步骤(2)：酶处理
在惰性气体氛围下，向水中加入贯叶连翘粉末和生物酶，其中贯叶连翘粉末与水的质量比为1:5-30，生物酶与贯叶连翘粉的质量比为0.1-10:100，从而配制得到贯叶连翘酶溶液；然后调节所述酶溶液的pH为3.0-7.0，调节后放入恒温摇床中，摇床转速为100-120rpm，在25-75℃下进行保温酶解60-180min，最后温度升高至85-100℃，搅拌10-20min，使酶灭活，得到酶解液。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(2)中的惰性气体例如可为氮气。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(2)中的生物酶为纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶或上述酶中任何几种的混合物，优选纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶或其混合物，最优选纤维素酶和果胶酶的混合物，两者的质量比优选为1:1-10，优选1:3-8，更优选1:6-8。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(2)中贯叶连翘粉末与水的质量比优选1:8-20，更优选1:10-15，最优选1:12。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(2)中生物酶(以下有时也称为“酶”)与贯叶连翘粉末的质量比优选为0.5-10:100；随着反应体系中酶用量的增加，酶与底物接触机会增加，但当酶用量达到一定比例后，再增加酶的用量，金丝桃素的提取率增加不明显，从节约成本、提高提取率的角度考虑，酶与贯叶连翘的质量比更优选为3-6:100。
在本专利技术的所述方法中，为了保证生物酶的活力，所述步骤(2)中pH优选为4.5-6.0，最优选为5.0。反应液的pH过高或过低，都会影响酶的稳定性，从而使酶催化遭受不可逆破坏。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(2)中的酶解保温温度优选35-65℃，酶解温度过高或过低均会使酶的活力降低，从而导致酶解效率降低，本专利技术中的酶解温度更优选45-65℃，最优选55℃。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(2)中酶解时间优选60-120min。酶解反应时间与酶解进行程度密切相关，酶解时间太短，酶解不充分，但当反应进行到一定程度以后，延长酶促反应时间并不能显著增加提取率，综合考虑，酶解时间更优选60-90min。
在本专利技术的所述方法中，所述pH的调节可利用无机酸或者无机碱来进行，例如无机酸可选自盐酸、硫酸、硝酸或磷酸，无机碱可选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。
步骤(3)：超声提取和纯化
抽滤酶解液，得到滤渣，将该滤渣在30-40℃下真空干燥20min后，与有机溶剂按照质量体积比(g/mL)为1:10-50进行混合，然后在一定温度和功率下，超声提取30-90min，得到提取液；浓缩提取液，过吸附树脂柱，用醇水溶液洗脱，收集洗脱液；减压蒸馏洗脱液，得到金丝桃素提取物。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(3)中的有机溶剂选自C1-C4一元醇、C2-C4二元醇、C1-C4一元醇的水溶液、C1-C4一元醇的丙酮溶液或者C1-C4一元醇的氯仿溶液。其中，更优选选自体积分数为50%-90%的乙醇水溶液、体积分数为10%-50%的甲醇丙酮溶液或体积分数为10%-50%的乙醇丙酮溶液，最优优选体积分数为10-30%的乙醇丙酮溶液。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(3)中所述滤渣与有机溶剂质量体积比(g/mL)为1:10-50，即以克(g)计的所述滤渣与以毫升(mL)计的所述有机溶剂的比为1:10-50，也即每1克(g)滤渣使用10-50毫升(mL)有机溶剂，优选为1:10-30，最优选1:20。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(3)中超声提取温度为25-60℃，优选未35-55℃，最优选为45℃；所述超声功率为120-240W，优选为160-200W，最优选为160-180W；超声时间为30-90min，优选为40-60min，最优选为45-60min。
在本专利技术的所述方法中，该超声提取过程可进行1-2次，当进行两次时，将两次所得的提取液进行合并，并进行后续的浓缩等后续处理过程。
在本专利技术的所述方法中，所述步骤(3)的有机溶剂中还优选加入无机碱或有机碱，所述无机碱或有机碱可以其水溶液的形式进行加入。所述无机碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠或NH4OH，优选氢氧化钠或氢氧化钾；所述有机碱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，所述包括以下步骤：步骤(1)：处理原料取贯叶连翘部位，清洗，避光干燥，粉碎，过100‑200目筛，得到贯叶连翘粉末；步骤(2)：酶处理在惰性气体氛围下，向水中加入贯叶连翘粉末和生物酶，其中贯叶连翘粉末与水的质量比为1:5‑30，生物酶与贯叶连翘粉的质量比为0.1‑10:100，从而配制得到贯叶连翘酶溶液；然后调节所述酶溶液的pH为3.0‑7.0，调节后放入恒温摇床中，摇床转速为100‑120 rpm，在25‑75℃下进行保温酶解60‑180 min，最后温度升高至85‑100℃，搅拌10‑20 min，使酶灭活，得到酶解液；步骤(3)：超声提取和纯化抽滤酶解液，得到滤渣，将该滤渣在30‑40℃下真空干燥20 min后，与有机溶剂按照质量体积比(g/mL)为1:10‑50进行混合，然后在一定温度和功率下，超声提取30‑90 min，得到提取液；浓缩提取液，过吸附树脂柱，用醇水溶液洗脱，收集洗脱液；减压蒸馏洗脱液，得到金丝桃素提取物。

【技术特征摘要】
1.一种从贯叶连翘中提取金丝桃素的方法，所述包括以下步骤：
步骤(1)：处理原料
取贯叶连翘部位，清洗，避光干燥，粉碎，过100-200目筛，得到贯叶连翘粉末；
步骤(2)：酶处理
在惰性气体氛围下，向水中加入贯叶连翘粉末和生物酶，其中贯叶连翘粉末与水的质量比为1:5-30，生物酶与贯叶连翘粉的质量比为0.1-10:100，从而配制得到贯叶连翘酶溶液；然后调节所述酶溶液的pH为3.0-7.0，调节后放入恒温摇床中，摇床转速为100-120rpm，在25-75℃下进行保温酶解60-180min，最后温度升高至85-100℃，搅拌10-20min，使酶灭活，得到酶解液；
步骤(3)：超声提取和纯化
抽滤酶解液，得到滤渣，将该滤渣在30-40℃下真空干燥20min后，与有机溶剂按照质量体积比(g/mL)为1:10-50进行混合，然后在一定温度和功率下，超声提取30-90min，得到提取液；浓缩提取液，过吸附树脂柱，用醇水溶液洗脱，收集洗脱液；减压蒸馏洗脱液，得到金丝桃素提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的生物酶为纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶或上述酶中任何几种的混合物，优选纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶或其混合物，最优选纤维素酶和果胶酶的混合物，两者的质量比优选为1:1-10，优选1:3-8，更优选1:6-8。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中生物酶与贯叶连翘粉末的质量比优选为0.5-10:100，优选为3-6:100。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中pH优选为4.5-6.0，最优选为5.0；酶解保温...

【专利技术属性】
技术研发人员：张锋，司红康，王启家，王贤军，吴成柱，
申请(专利权)人：六安裕发农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34