本发明专利技术公开了人LOXL2基因的用途及其相关药物。本发明专利技术公开了人LOXL2基因在肿瘤治疗、肿瘤诊断及药物制备中的用途。本发明专利技术还进一步构建了人LOXL2基因小分子干扰RNA、人LOXL2基因干扰核酸构建体、人LOXL2基因干扰慢病毒并公开了它们的用途。本发明专利技术提供的siRNA或者包含该siRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人LOXL2基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中LOXL2基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及人LOXL2基因的用途及其相关药物。
技术介绍
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)即用核苷酸组成的短的双链RNA(dsRNA)进行转录后基因沉默。它可高效、特异地阻断体内特定基因的表达，导致其降解，从而引起生物体内特异基因的沉默，使细胞表现出某种基因表型的缺失，是近年来新兴的一种常用的研究基因功能、寻找疾病治疗方法的实验室技术。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性的引起RNAi(TuschlT,ZamorePD,SharpPA,BartelDP.RNAi:double-strandedRNAdirectstheATP-dependentcleavageofmRNAat21to23nucleotideintervals.Cell2000；101:25-33.)。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤进程(Uprichard,SusanL.ThetherapeuticpotentialofRNAinterference.FEBSLetters2005；579:5996-6007.)。LOXL2是一种GTP结合蛋白，最初是通过差异显示PCR在肾脏疾病中有差异表达而被发现，这个蛋白有GTP酶的作用，它可以作为分子开关而存在有无活性两种不同的状态；当与GTP结合的时候是没有活性的，当与GDP结合的时候是有活性的，这个时候分子开关打开激活细胞中的一些下游信号通路。当外源受体与GTP样的受体结合。受体构象改变，三聚体G蛋白开关打开会释放GDP，从而形成GTP,当G蛋白酶水解了与其结合的GTP的高能磷酸键，开关关闭，GTP转变为GDP(LapingNJ1,OlsonBA,ZhuY.Identificationofanovelnuclearguanosinetriphosphate-bindingproteindifferentiallyexpressedinrenaldisease。JAmSocNephrol.2001May；12(5):883-90.)LOXL2与Nog1形成复合物可以参与60S核糖体亚单位的合成是必要的(JensenBC,WangQ,KiferCT,ParsonsMTheNOG1GTP-bindingproteinisrequiredforbiogenesisofthe60Sribosomalsubunit.JBiolChem278:32204–32211FuentesJL,DattaK,SullivanSM,WalkerA,MaddockJR(2007)InvivofunctionalcharacterizationoftheSaccharomycescerevisiae60SbiogenesisGTPaseNog1.MolGenetGenomics278:105–123LapikYR,MisraJM,LauLF,PestovDG(2007)RestrictingconformationalflexibilityoftheswitchIIregioncreatesadominant-inhibitoryphenotypeinObgGTPaseNog1.MolCellBiol27:7735–7744.)利用wholegeneDNAmicroarrays技术，在高血压大鼠(SHR)细胞和正常血压大鼠比较发现，检测了数十种蛋白与此相关，其中包括LOXL2蛋白。(KinoshitaK,AshenagarMS,TabuchiM,HigashinoH.，WholeratDNAarraysurveyforcandidategenesrelatedtohypertensioninkidneysfromthreespontaneouslyhypertensiveratsubstrainsattwostagesofageandwithhypotensiveinductioncausedbyhydralazinehydrochloride.ExpTherMed.2011Mar；2(2):201-212.Ep)，有报道称在环境污染方面用microarray分析的方式，分析污水样本中有存在能够受雌激素调节上调影响LOXL2蛋白的表达。(WangDY1,McKagueB,LissSN,EdwardsEA.Geneexpressionprofilesfordetectinganddistinguishingpotentialendocrine-disruptingcompoundsinenvironmentalsamplesEnvironSciTechnol.2004Dec1；38(23):6396-406.)关于LOXL2在肿瘤相关领域的报道很少。为了研究LOXL2和肿瘤的相关性，本专利技术选取胃癌细胞模型，以RNAi为手段研究LOXL2在胃癌发生和发展中的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开与人LOXL2基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰(RNAi)为手段研究LOXL2基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。本专利技术的第一方面，以RNA干扰为手段，研究了LOXL2基因在肿瘤发生和发展中的作用，公开了一种抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿瘤细胞施用一种能够特异性抑制LOXL2基因的转录或翻译，或能够特异性抑制LOXL2蛋白的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。所述肿瘤细胞选自其生长与LOXL2蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的，所述肿瘤细胞选自胃癌。所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用量为足够降低LOXL2基因的转录或翻译，或者足够降低LOXL2蛋白的表达或活性的剂量。进一步的，所述LOXL2基因的表达至少被降低50％、80％、90％、95％或99％。所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒。所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶III制备的小干扰RNA(esiRNA)或者短发夹RNA(shRNA)。所述双链RNA、核酶、esiRNA或者shRNA含有LOXL2基因的启动子序列或LOXL2基因的信息序列。进本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的人LOXL2基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。
【技术特征摘要】
1.一种分离的人LOXL2基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的
用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤选自胃癌。
3.一种降低肿瘤细胞中LOXL2基因表达的分离的核酸分子，所述核酸分子包含：
a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与LOXL2基因杂交的核苷酸
序列；或者
b)shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与LOXL2基因杂交的核苷酸序列。
4.如权利要求3所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA包含第一链和第二
链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与
LOXL2基因中的靶序列基本相同；所述shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连
接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列
互补，并且所述正义链片段的序列与LOXL2基因中的靶序列基本相同。
5.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述LOXL2基因的靶序列含有
SEQIDNO:1-5中任一序列。
6.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA为小干扰RNA，
该小干扰RNA第一链的序列如SEQIDNO：17所示。
7.如权利要求3或4所述分离的核酸分子，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQIDNO：
18所示。
8.一种LOXL2基因干扰核酸构建体，含有编码权利要求3-7任一权利要求所述分离的核
酸分子中的shRNA的基因片段，能表达所述shRNA。
9.如权利要求8所述LOXL2基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述LOXL2基因干扰
核酸构建体为干扰慢病毒载体。
10.如权利要求9所述LOXL2基因干扰核酸构建体，其特征在于，所述干扰慢病毒载体由
将编码所述shRNA的基因片段克隆入慢病毒载体后获得，所述慢病毒载体选自：
pLKO.1-puro、pLK...
【专利技术属性】
技术研发人员：聂勇战，吴开春，董加强，胡思隽，窦建华，唐光波，吴健，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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