用于检测血清中MGMT抗体的多肽，检测器件和检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及用于检测血清中MGMT抗体的多肽，检测器件和检测试剂盒。本发明专利技术的多肽由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成。将本发明专利技术的多肽应用与检测血清中MGMT抗体，具有高度特异性和灵敏性，可对TMZ产生耐药性提供实验室判定依据，从而用于指导临床化疗用药。本发明专利技术的多肽可应用于检测血清中MGMT抗体的检测器件或检测试剂盒。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术属于生物检测领域，主要涉及用于检测血清中MGMT抗体的多肽，检测器件和检测试剂盒。

技术介绍

胶质母细胞瘤(GlioblastomamultiformeGBM)是最具侵袭性的人脑高度恶性肿瘤，临床诊断后的患者平均生存期12～15月，因此一直是临床治疗的难点。临床治疗中，抗肿瘤药物因为获得性耐药、高毒性、血脑屏障(bloodbrainbarrierBBB)和肿瘤内和肿瘤周围又存在一定数量耐药的胶质瘤干细胞(gliomastemcellsGSCs)等诸多原因，最终导致化疗失败。尽管到目前为止，二代烷化剂-替莫唑胺(TemozolomideTMZ)能有效透过BBB，而且毒副作用小，国际标准化的Stupp化疗方案被认为是目前最好的临床治疗胶质母细胞瘤的化疗方案，一部分GBM患者生存期从此获益。但遗憾的是，即使应用了上述手术、放疗和化疗的综合治疗，胶质母细胞瘤的平均生存期仍然只有14.6月，5年生存率只有9.8％。大家公认，导致TMZ标准化疗失败的根本原因是肿瘤中存在耐药的胶质瘤细胞和胶质瘤细胞，这些耐药细胞的O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanineDNAmethyltransferase，MGMT)在细胞耐药性上起着关键的作用。
MGMT是一种高效的DNA修复酶，能够修复化疗中烷化剂药物对肿瘤细胞DNA所造成的损伤。研究结果表明，当MGMT在胶质母细胞瘤组织中高表达，肿瘤细胞对烷化剂就出现耐药；或其MGMT发生甲基化，肿瘤细胞表现为对TMZ的敏感性。目前临床把肿瘤组织中MGMT的表达和MGMT的甲基化作为判断新发GBM对TMZ治疗敏感性的指标。因此，必须采集到GBM的组织，进行MGMT甲基化分析，以及应用免疫组织化学和Western-blot对组织中MGMT蛋白表达。但临床实际中存在二种情况，一是无法获得肿瘤组织或只有少量组织，无法获取完整的耐药性信息；二是部分GBM会TMZ治疗中出现继发性耐药。在基础研究中发现GBM细胞株可在TMZ培养下成功地培育出耐TMZ的细胞株，并高效表达MGMT，这也是模拟了临床实际治疗中部分患者出现的继发性耐药。正如临床抗菌素治疗细菌感染中，出现耐药的细菌株，导致抗菌素治疗的失败。
因此，胶质母细胞瘤治疗的临床实践中，迫切需要开发一种GBM的伴侣MGMT检测试剂盒产品，通过监测患者血清的方法来明确肿瘤对TMZ的耐药性，既解决了肿瘤组织无或不足所导致的临床使用TMZ的盲目性，又解决了肿瘤治疗过程中判断可能出现的获得性耐药的问题。

技术实现思路

本专利技术的目的在于提供一种用于检测血清中MGMT抗体的多肽、抗该多肽的抗体、包含该多肽的检测器件、包含该多肽或该检测器件的检测试剂盒、以及该多肽在检测血清中MGMT抗体中的用途、该多肽在制备用于检测血清中MGMT抗体的检测器件或检测试剂盒中的用途。
即，本专利技术包含下述技术方案：
1.一种用于检测血清MGMT抗体的多肽，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，即：TLDSPLGKLELSGCEQGLHE。
2.编码权利要求1所述的多肽的核酸。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入权利要求3所述的表达载体的宿主细胞。
5.抗权利要求1所述的多肽的抗体。
6.一种检测器件，其包括：
固体载体，以及
连接于该固体载体上的权利要求1所述的多肽。
7.根据权利要求2所述的检测器件，其中，所述固体载体是IPDMS薄膜。
8.一种检测试剂盒，其包括权利要求1所述的多肽、或者权利要求2或3所述的检测器件。
9.权利要求1所述的多肽在制备用于检测血清中MGMT抗体的试剂盒或检测器件中的用途。
将本专利技术的多肽应用与检测血清中MGMT抗体，具有高度特异性和灵敏性，可对TMZ产生耐药性提供实验室判定依据，从而用于指导临床化疗用药。本专利技术的多肽可应用于检测血清中MGMT抗体的检测器件或检测试剂盒。
附图说明
图1对IPDMS薄膜的制作过程进行说明的示意图。
图2说明多肽微阵列点样模式的示意图。
图3是显示对健康正常人或非胶质母细胞瘤病人血清进行检测的结果的照片。
图4是显示对胶质母细胞瘤病人血清进行检测的结果的照片。
具体实施方式
本专利技术的多肽
本专利技术的多肽是20肽。本专利技术的20肽由SEQIDNO：1所示的氨基酸序列构成，即：TLDSPLGKLELSGCEQGLHE。如实施例所示，其用于检测血清中MGMT抗体，对胶质母细胞瘤病人的血清呈阳性反应，而对健康正常人或非胶质母细胞瘤病人血清呈阴性反应。因此，该20肽作为检测胶质母细胞瘤病人血清中MGMT抗体的检测器件和试剂盒是有用的。
本专利技术的多肽在有市售的情况下，可以使用市售品，此外，还可以适宜采用(1)化学合成方法、或(2)酶反应合成方法等公知方法来获得，其中化学合成更为简便。在化学合成本专利技术的多肽情况下，通过使用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本
公知的。
此外，在通过酶反应生产本专利技术的多肽的情况下，可以采用例如国际公开小册子WO2004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的氨基酸或二肽的羧基末端被酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸处于游离状态的氨基酸(例如羧基保护的氨基酸)在肽合成酶的存在下进行反应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出：具有生成肽的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体处理物、或该微生物来源的肽合成酶。
而且，除了上述的酶方法、化学合成方法以外，有些情况下，本专利技术的多肽还可能是天然存在(但未被分离出来)的。在天然存在的情况下，还可以将其分离出来。
本专利技术的核酸、表达载体宿主细胞，以及抗本专利技术的多肽的抗体
本专利技术还涉及编码该多肽的核酸(本专利技术的核酸)、包含该核酸的表达载体(本专利技术的表达载体)、导入了该表达载体的宿主细胞(本专利技术的宿主细胞)，它们优选可用于生产本专利技术的多肽。本专利技术的核酸、表达载体、宿主细胞可以采用本领域技术人员公知的方法来制备。本专利技术还涉及抗本专利技术的多肽的抗体，其可用于检测本专利技术的抗体。本专利技术的抗体可以采用本领域技术人员公知的方法来制备。
本专利技术的检测器件
本专利技术还涉及一种检测器件(本专利技术的检测器件)，其包括固体载体、以及连接于该固体载体上的本专利技术的多肽。
在本专利技术中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料(例如是可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料)的载体即可。
构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶(聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纤维素、特氟隆TM、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、铂、银、铜、铁、不锈钢、铁氧体、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白(白蛋白等)、碳或它们的组合等。
固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于检测血清中MGMT抗体的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，即：TLDSPLGKLELSGCEQGLHE。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测血清中MGMT抗体的多肽，其氨基酸序列如SEQID
NO：1所示，即：TLDSPLGKLELSGCEQGLHE。
2.编码权利要求1所述的多肽的核酸。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入权利要求3所述的表达载体的宿主细胞。
5.抗权利要求1所述的多肽的抗体。
6.一种检测器件，其包括：

【专利技术属性】
技术研发人员：马宏伟，
申请(专利权)人：苏州偲聚生物材料有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32