本发明专利技术提供一种多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物为miR27a。研究表明，miR27a促进颗粒细胞的凋亡，抑制芳香化酶的产生，使颗粒细胞内的雌性激素比例失调，导致排卵障碍引起多囊乱巢综合征。本发明专利技术采用DHT(双氢睾酮)诱导小鼠多囊卵巢综合征模型，发现miR27a在多囊卵巢综合征小鼠模型中高表达，并验证了miR27a及其靶基因在多囊卵巢综合征致病机理中的作用。可将miR27a作为多囊卵巢综合征的生物标志物，为临床制药提供理论基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体地说，涉及多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物及其应用。
技术介绍
世界范围内的不孕不育已经成为继癌症、心血管疾病之后严重影响人类健康的第三大疾病。其中女性不孕占40％。女性不孕中，排卵障碍率占25％-30％，常见为多囊卵巢综合征、卵巢早衰、黄素华卵泡不破裂综合征等，育龄妇女中大约有10％发生多囊卵巢综合征。多囊卵巢综合征(PCOS)是以稀发排卵或无排卵、高雄激素或胰岛素抵抗、多囊卵巢为特征的内分泌紊乱的症候群。雌\\雄激素比例失调引起的体内雄激素水平过高是导致PCOS的主要原因。miRNA是内源性长度约为21-25nt的非编码小RNA，对靶基因mRNA的降解和抑制起重要调控作用。miRNA作为潜在的组织特异性疾病的生物标志物，可为许多病理诊断提供有效措施。miRNA在PCOS中的研究目前主要集中在胰岛素抵抗，肥胖等方面，而关于激素比例失调这一关键因素的致病机制仍不清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物及其应用。为了实现本专利技术目的，本专利技术提供的多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，所述miRNA生物标志物为miR27a。其成熟序列为：UUCACAGUGGCUAAGUUCCGC。本专利技术还提供miR27a在制备或筛选人多囊卵巢综合征的诊断及治疗药物中的应用。本专利技术还提供miR27a在制备人多囊卵巢综合征检测试剂中的应用。所述检测试剂选自用于southern印迹法、northern印迹法、PCR法、逆转录酶PCR法、实时定量PCR法、纳米阵列法、宏阵列法、放射自显影法或原位杂交法等方法检测生物标志物miR27a的相关试剂。本专利技术进一步提供一种多囊卵巢综合征诊断用试剂盒，所述试剂盒包括一种或多种特异性检测miR27a表达水平的引物和/或探针。所述引物是基于实时定量PCR法检测miR27a而设计的，所述引物序列如下：miR27a-3p-RT:5′-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGGCGGAACT-3′miR27a-3p-F:5′-CATCTGAGGATTCACAGTGGCTA-3′miR27a-3p-R:5′-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTC-3′miRNA在女性生殖道卵巢、子宫、子宫内膜、输卵管以及胚胎发育过程中广泛表达，通过与其靶基因特异性结合，引起靶mRNA的降解或抑制其翻译。有关miRNA的研究完善和丰富了疾病发生、发展的分子生物学与遗传学机制。研究表明，miR27a促进颗粒细胞的凋亡，抑制芳香化酶的产生，使颗粒细胞内的雌性激素比例失调，导致排卵障碍引起多囊乱巢综合征。本专利技术采用DHT(双氢睾酮)诱导小鼠多囊卵巢综合征模型，发现miR27a在多囊卵巢综合征小鼠模型中高表达，并验证了miR27a及其靶基因在多囊卵巢综合征致病机理中的作用。可将miR27a作为多囊卵巢综合征的生物标志物，为临床制药提供理论基础。附图说明图1为本专利技术实施例1中miR27a超表达抑制雌激素的分泌。图2为本专利技术实施例1中miR27a超表达抑制颗粒细胞增殖，miR27a被抑制(通过添加miR27ainhibitor)促进颗粒细胞增殖。图3为本专利技术实施例1中miR27a超表达促进小鼠颗粒细胞的凋亡。图4为本专利技术实施例1中miR27a超表达抑制芳香化酶CYP19A1的产生。图5为本专利技术实施例1中PCOS模型小组，即DHT处理组后代成年雌鼠卵巢呈现多囊状。图6为本专利技术实施例1中多囊卵巢综合征小鼠模型中miR27a的表达量显著升高。图7为本专利技术实施例1中芳香化酶CYP19A1的表达量显著降低。图1-图4中，NC-mi为miR-NCmimic(模拟物)，miR-27a-mi为miR27a，NC-in为miR-NCinhibitor(抑制剂)，miR-27a-in为miR27ainhibitor。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。实施例1miR27a在促进颗粒细胞凋亡、抑制芳香化酶产生以及使颗粒细胞内雌性激素比例失调方面的研究(一)体外实验：体外培养KK-1细胞系，分为实验组和对照组，分别转染miR27a(即miR27amimic，UUCACAGUGGCUAAGUUCCGC)和miR-NC(不相关的miR模拟物)，检测细胞增殖及凋亡变化，细胞中芳香化酶的变化及细胞上清中雌激素含量的变化。miR-NCmimic(模拟物):sense:UUCUCCGAACGUGUCACGUTTantisense:ACGUGACACGUUCGGAGAATTmiR-NCinhibitor(抑制剂):CAGUACUUUUGUGUAGUACAA具体实验操作如下：1、miR27a对小鼠激素分泌的影响(1)细胞转染使用Invitrogen公司生产的lipofectamineTM2000，按说明书操作(以6孔板，共A、B、C、D四组，每组一个孔为例，实际转染时每个处理组设置3个复孔)：转染前24h接种细胞(4×105个/孔)，培养于含血清培养基，24h后细胞贴壁率约为70％-80％；转染前2h换无血清培养基；转染分以下A、B、C、D四组进行，E组为稀释的转染试剂。A：100pmolmiR-NCmimic(模拟物)+250μL无血清DMEM/F12培养基B：100pmolmiR27amimic(模拟物)+250μL无血清DMEM/F12培养基C：100pmolmiR-NCinhibitor(抑制剂)+250μL无血清DMEM/F12培养基D：100pmolmiR27ainhibitor(抑制剂)+250μL无血清DMEM/F12培养基E：5μLLipofectamineTM2000+250μL无血DMEM/F12清培养基上述miR27ainhibitor即miR27a的反义序列。以上五组预混液配好后吹打混匀，室温静置5min。分别将A、B、C、D四组预混液与E组预混液等体积混合，得到约500μl转染试剂(小RNA混合液)，吹打混匀，室温孵育20min，每孔加入500μL上述配制的转染试剂，37℃培养箱中孵育6h后，换成正常10％FBSDMEM/F12培养基继续培本文档来自技高网...
【技术保护点】
多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，其特征在于，所述miRNA生物标志物为miR27a。
【技术特征摘要】
1.多囊卵巢综合征诊断用miRNA生物标志物，其特征在于，所
述miRNA生物标志物为miR27a。
2.权利要求1所述的miRNA生物标志物在制备或筛选人多囊卵巢
综合征的诊断及治疗药物中的应用。
3.权利要求1所述的miRNA生物标志物在制备人多囊卵巢综合征
检测试剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂选自
用于southern印迹法、northern印迹法、PCR法、逆转录酶PCR法、实
时定量PCR法、纳米阵列法、宏阵列法、放射自显影法或原位杂交法
检测生物标志物miR27a的相关试剂。
【专利技术属性】
技术研发人员：李向东，王明明，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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